PPGB - Mestrado em Bioquímica

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Ação de polissacarídeos sulfatados de Fucus Vesiculosus na Hemostasia e no sistema complemento
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2006-07-18) Azevedo, Tarciana Carvalho Gurgel de; Leite, Edda Lisboa; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783254U6&dataRevisao=null; ; http://lattes.cnpq.br/2634280390150027; Lima, Dilma Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/0129976807551158; Benevides, Norma Maria Barros; ; http://lattes.cnpq.br/3839272083508826
Fucanas são uma família de homo e hetero polissacarídeos sulfatados, formadas por uma cadeia central com ligações α-(1→2) ou α-(1→3) unidas através de resíduos de L-fucose. Propriedades como a habilidade para agir como um anticoncepcional, reduzir níveis de colesterol, e agir como um agente anti-tumoral foram relatadas. Nós focalizamos nossa atenção nas propriedades anticoagulantes, agregação plaquetária, atividade anti-hemostática e sistema de complemento in vitro do fucoidan comercial e das frações F1, F2 e F3 de Fucus vesiculosus obtidas através do fracionamento do fucoidan por preciptação com acetona (1, 2 e 3v). A atividade anticoagulante dos compostos foi avaliada pelo tempo de tromboplastina parcial ativado (APTT) e o tempo de protrombina (PT) usando plasma humano citratado. Os resultados do teste de APPT mostraram que o Fucoidan (F) e as frações F1 e F2 têm altas atividades anticoagulantes 240,0 s (5 µg), enquanto que a F3 mostrou 73,7s nas mesma concentração. Os resultados obtidos com PT para o F, F1, F2 e F3 foram 81,5 s, 120,0 s, 57,1 e 32,5 s respectivamente usando a massa de 50 µg. A dessulfatação do Fucoidan demonstrou uma diminuição da atividade anticoagulante nos dois testes. O ensaio de agregação plaquetária foi realizado no agregometro de acordo com o método de Born. A agregação plaquetária induzida pelo fucoidam e pelas frações de F1, F2 e F3 exibiram uma resposta bifásica na concentração de 5 mg/mL com amplitude máxima de agregação de 76,36% ± 10,3%; 69,54% ± 9,40%; 75,94% ± 9,01%; 51,13% ± 9,59% respectivamente. Porém, na concentração 0,1 mg/mL foi observada um perfil hipoagregante para o Fucoidan (15,17% ± 5,2) e para as frações F1 (7,4% ± 3,04%), F2 (19,1% ± 5,41) e F3 (5,09% ± 3,02%). A atividade anti-hemostática foi realizada com ratos machos da linhagem Wistar e demonstrou que estes compostos têm efeito hemorrágico residual menor do que o da heparina. A ação dos polissacarídeos fucosilados sulfatados na via alternativa do sistema complemento foi realizada através da utilização de eritrócitos de coelhos não sensibilizados. Os resultados para o Sistema Complemento mostraram que o F, F2 e F3 têm ação neste sistema, apresentando efeito inibitório em relação ao grupo controle 0,544, 0,697, 0,622 e 0,958 respectivamente. Interações dos polissacarídeos com as proteínas C3 e C4 demonstraram que a fração F1 estimula a atividade hemolítica do complemento usando eritrócitos de coelho. Concluímos que estes açúcares têm atividade anticoagulante e atuam como inibidores do sistema complemento sendo uma valiosa droga que pode ser empregada em doenças relacionadas com inflamação e coagulação sangüínea
Ação Sacietogênica de um inibidor de tripsina da semente de tamarindo (Tamarindus indica L.)
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-02-19) Ribeiro, Joycellane Alline do Nascimento Campos; Santos, Elizeu Antunes dos; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782221T9&dataRevisao=null; ; Vasconcelos, Ilka Maria; ; http://lattes.cnpq.br/0103197383336584; Sousa, Jacira Maria Andrade de; ; http://lattes.cnpq.br/7638624358027104
As sementes são excelentes fontes de inibidores de proteinases, e a estes têm sido atribuído inúmeras aplicações. Dentre estas aplicações estão as com efeito sobre o consumo alimentar e o ganho de peso que se destacam devido o crescente aumento de indivíduos obesos. Esse estudo avaliou os efeitos do inibidor de tripsina presente na semente de tamarindo (Tamarindus indica L.) sobre o ganho de peso e parâmetros bioquímicos e morfohistológicos de órgãos de ratos wistar. Para isso, foi parcialmente purificado um inibidor de tripsina de semente de tamarindo (ITT2). Este na concentração de 25 mg/Kg de peso, num período de 11 dias, foi capaz de reduzir o consumo alimentar de ratos em cerca de 47%, ocasionando uma redução no ganho de peso de aproximadamente 70% quando comparado com o grupo controle. Com a avaliação da digestibilidade proteica in vivo foi possível demonstrar que os animais perderam peso devido à saciedade, apresentada pela redução do consumo alimentar, visto que não houve variações significativas da digestibilidade verdadeira entre o grupo controle (90,7%) e o grupo tratado com inibidor (89,88%). Além disso, o sangue dos animais foi coletado a fim de serem avaliados os efeitos do ITT2, sobre parâmetros bioquímicos (glicose, triglicerídeos, colesterol total, lipoproteínas de alta-densidade, lipoproteína de baixa-densidade, alanina amino transferase, aspartato amino transferase, gama glutamil transferase, albumina, globulina, proteínas totais e proteína C reativa) e estes não apresentaram variações significativas. Os órgãos, fígado, estômago, intestino, além do pâncreas, não apresentaram alterações. Para avaliar se o efeito do ITT2 sobre o consumo alimentar devido à saciedade seria acompanhado pelo aumento de colecistocinina (CCK), foram dosados os seus níveis plasmáticos, e observado que os níveis de CCK nos animais que receberam ITT2 eram significativamente maiores (20 + 1,22) do que nos animais que receberam apenas caseína (10,14 + 2,9) ou água (5,92 + 1,15). Dessa forma, os resultados obtidos, indicam que o ITT2 causou um efeito sacietogênico, reduzindo o consumo alimentar, que por sua vez ocasionou uma redução no ganho de peso nos animais, porém sem causar alterações bioquímicas ou morfohistológicas, efeito este acompanhado pela elevação nos níveis plasmáticos de CCK
Alterações hepáticas na expressão gênica e atividade da catalase e superóxido dimutase em ratos diabéticos induzidos por estreptozootocina
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2015-07-29) Almeida, Rômulo Rodrigo de Souza; Lima, João Paulo Matos Santos; Abreu, Bento João da Graça Azevedo; ; http://lattes.cnpq.br/1725848357337658; ; http://lattes.cnpq.br/3289758851760692; ; http://lattes.cnpq.br/7194056319856774; Rocha, Cíntia Renata Costa; ; http://lattes.cnpq.br/8356963705328584; Pasquali, Matheus Augusto de Bittencourt; ; http://lattes.cnpq.br/2819075769518114
Vários estudos tem estabelecido uma associação entre Diabetes Mellitus tipo 1 alterações hepáticas estresse oxidativo. No entanto os conhecimentos de como essas alterações ocorrem no sistema antioxidante ainda não está elucidado. Este estudo avaliou os efeitos de quatro semanas de diabetes tipo 1 no tecido hepático. Ratos machos wistar foram divididos em 2 grupos: Controle (C) e Diabético (D). A análise da atividade de enzimas antioxidantes (CAT e SOD); a expressão do mRNA de CAT, SOD1, SOD2, GPX1 e PRX4 foram avaliadas; marcadores de estresse oxidativo também foram avaliados (Peroxidação de lipídeos, carbonilação de proteínas e conteúdo tiol) e conteúdo de H2O2 hepático. Como resultado a diabetes aumentou a atividade da SOD e a expressão gênica da SOD2, enquanto diminuiu a expressão da SOD1. Assim como houve diminuição da atividade da CAT e na expressão gênica da CAT, GPX1 e PRX4. Houve também mudanças em biomarcadores de estresse oxidativo. Nossos resultados sugerem que provavelmente as quatro semanas da diabetes, induzem alterações precoces no sistema antioxidante no fígado de ratos induzidos por STZ, agravando alterações decorrentes do estresse oxidativo levando a formação de espécies reativas de oxigênio, podendo contribuir para um prejuízo da função hepáticas.
Alterações na homeostase redox e do retículo endoplasmático: mecanismos associados à lipodistrofia generalizada congênita do tipo 2
(2019-04-09) Sarmento, Aquiles Sales Craveiro; Campos, Julliane Tamara Araújo de Melo; Lima, Lucymara Fassarella Agnez; ; ; ; Rezende, Adriana Augusto de; ; Fayh, Ana Paula Trussardi; ; Montenegro Júnior, Renan Magalhães; ; Dalmolin, Rodrigo Juliani Siqueira;
A lipodistrofia generalizada congênita (LGC) do tipo 2 consiste numa rara síndrome autossômica recessiva caracterizada pela quase completa falta de tecido adiposo corporal desde o nascimento. A LGC, geneticamente causada por mutações de perda de função nos dois alelos do gene BSCL2, já foi fenotipicamente caracterizada por hipertrigliceridemia, hiperglicemia, diminuição do HDL-c e hipoadiponectinemia. Esses achados laboratoriais são importantes gatilhos para alterações na homeostase redox e do retículo endoplasmático (RE). Por conseguinte, o objetivo desse trabalho foi investigar se esses mecanismos intracelulares estariam presentes nessa síndrome. Para tal, o sangue total foi coletado a partir de pessoas originárias do Nordeste do Brasil com 0, 1 e 2 alelos mutantes para a mutação c.325dupA (rs786205071) no gene BSCL2. Por meio da técnica qPCR, foi avaliada a expressão de genes responsáveis por desencadear a resposta antioxidante, reparo de DNA e estresse do RE nos leucócitos. Testes colorimétricos foram utilizados para quantificar produtos de peroxidação lipídica e avaliar o status redox da glutationa, bem como acessar o panorama do metabolismo energético do plasma. A PCR convencional foi escolhida para observação das lesões no DNA das mitocôndrias dos leucócitos. Também foi escolhido o imunoblot para o estudo da expressão gênica de proteínas chaperonas relacionadas com o estresse do RE nos leucócitos, bem como das concentrações de adiponectina no plasma. Em relação aos grupos que não apresentavam lipodistrofia, as pessoas com a mutação rs786205071 nos 2 alelos apresentaram aumento da transcrição de NFE2L2, APEX1, OGG1 e αOGG1 nos leucócitos, bem como das concentrações de malondialdeído e da taxa GSSG:GSH no plasma. Além disso, também foi observada diminuição da taxa de polimerização in vitro do DNA mitocondrial e aumento do splicing de XBP1 nos leucócitos. As análises in sílico apontaram para alta probabilidade da seipina rs786205071 pertencer à membrana do RE, embora a mutação supracitada remova regiões amiloidogênicas dessa proteína. Ademais, também foi observada a diminuição da transcrição de BSCL2 nesses leucócitos, associado à ausência de diferenças significativas no padrão de expressão das chaperonas HSPA5 e P4HB. Em paralelo, essas células apresentaram diminuição das transcrições de DDIT3, mas sem diferenças significativas no padrão de clivagem da procaspase-3. Por fim, também foi observado leve aumento plasmático de triglicerídeos, junto com a diminuição das concentrações plasmáticas de adiponectina e do HDL-c. Juntos, os resultados apontaram para a presença de lesões em lipídeos decorrentes das alterações na homeostase redox, associadas com o aumento do número de danos no DNA mitocondrial e recrutamento transcricional de genes que participam da resposta antioxidante e do reparo do DNA. Embora também haja evidências de estresse do RE, a mutação rs786205071 se mostrou como tendo uma possível baixa probabilidade de gerar diretamente esse mecanismo. Ademais, os dados sugerem que não houve evidências de aumento significativo de morte celular e que as diminuições das concentrações de adiponectina e do HDL-c podem ser sugestivos gatilhos para as alterações na homeostase redox e do RE na LGC do tipo 2.
Análise de transcriptoma de células-tronco mesenquimais humanas durante a osteogênese
(2017-09-01) Rocha, Ana Carolina Pereira; Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de; ; ; Lima, Daniel Chaves de; ; Marques, Joana Cristina Medeiros Tavares; ; Lima, João Paulo Matos Santos;
A diferenciação das células-tronco mesenquimais humanas (CTMh) em osteoblasto segue um programa específico de expressão gênica, comprometendo-se inicalmente sob a influência das vias Wnt (Wingless pathway) e das BMPs (bone morphogenetic protein) que direcionam a célula a sua transformação em osteoblasto. Entretanto, as vias ativadas especificamente durante a fase inicial da diferenciação são ainda pouco exploradas. Assim, o objetivo deste trabalho foi caracterizar o perfil transcricional do início do processo de diferenciação de CTMh, obtidas da veia do cordão umbilical, em osteoblasto, a partir da técnica de RNA-Seq. A partir dos dados de transcriptoma, foi produzida uma lista ordenada de genes funcionalmente associados, obtida pela média da expressão gênica tomada sobre genes vizinhos nesta lista, facilitando, assim, a sua interpretação biológica. Para o estudo de ontologia gênica e delineamento do perfil de expressão durante a osteogênese, os processos metabólicos e funções moleculares significativamente alterados durante o decorrer do processo de diferenciação foram analisados em diversas ferramentas (REVIGO, GOrila, PANTHER, LNCipedia e NONCODE) e descritos. Durante a indução à diferenciação das CTMh em osteoblasto, foi observado o aumento da expressão de genes característicos do fenótipo osteoblástico já a partir do primeiro dia de diferenciação. Foram identificados RNAs não codificantes, consoante a evolução da diferenciação, bem como genes envolvidos na formação de rafts de membrana, já a partir do terceiro dia de diferenciação. Durante o terceiro dia de indução, genes envolvidos na regulação da diferenciação celular e em outros processos biológicos que precedem a diferenciação, como adesão celular, sinalização e resposta à fatores químicos externos já apresentaram aumento em sua expressão. O estudo da expressão gênica durante estes três primeiros dias revelou ainda a diminuição na expressão de genes envolvidos em processos biológicos de manutenção de metabolismo basal, degradação de RNA e organização do citoesqueleto, indicando assim que as mudanças celulares que levam a célula a entrar em diferenciação podem ter origem durante os três primeiros dias de tratamento osteogênico.
Análise do estresse oxidativo e morte celular por material particulado da queima da Amazônia e compostos isolados
(2016-09-19) Peixoto, Milena Simões; Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de; Alves, Nilmara de Oliveira; ; http://lattes.cnpq.br/7763292684638407; ; http://lattes.cnpq.br/5882662534904226; ; http://lattes.cnpq.br/6072610047748378; Coutinho, Leonam Gomes; ; http://lattes.cnpq.br/1909294735239579; Lajus, Tirzah Braz Petta; ; http://lattes.cnpq.br/9979644969955564
A poluição atmosférica é um fator de risco ambiental, e consequentemente, um problema a saúde. Diversas substâncias são lançadas diariamente por meio de atividades antropogênicas ou naturais, tornando o ar impróprio e nocivo ao bem-estar de seres humanos e prejudicial à fauna e à flora. Na região amazônica, os desmatamentos e as queimadas têm causado prejuízos para a população exposta. Estudos demonstram que essas partículas presentes no ar causam sérios problemas respiratórios e cardiovasculares, incluindo danos ao DNA. Diante disso, o objetivo desse estudo foi avaliar o estresse oxidativo, a integridade mitocondrial e morte celular desencadeados por compostos orgânicos do material particulado menor que 10 μm (MP10) oriundos da queima de biomassa da floresta Amazônica, assim como os efeitos do reteno, marcador de queima de biomassa, em células epiteliais do pulmão humano (A549). Para tal, foi avaliado a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO) com os corantes DCF e MitoSOX e o processo de autofagia por expressão e distribuição das isoformas da proteína LC3, marcadora de autofagossomo maduro, em células A549 expostas a 200 μg/mL e 400 μg/mL de MP10 nos tempos de 24 h e 72 h. Da mesma forma, foi analisado os efeitos do reteno sobre estresse oxidativo nas concentrações de 3,3 ng/mL, 10 ng/mL e 30 ng/mL. Também foi observado a função mitocondrial com TMRM e Mitotracker e o processo de morte celular via marcação por anexina e iodeto de propídeo. Com relação à fração orgânica do material particulado, esta induziu um aumento da produção de ERO intracelulares e de superóxido mitoncondrial. Além disso, a exposição ao MP10 desencadeou a formação de autofagossomos, sugerindo o aumento da autofagia. Nas análises biológicas com o reteno, os dados mostraram que este composto levou ao aumento de ERO e de superóxido mitocondrial, a hiperpolarização da membrana mitocondrial, assim como o aumento do conteúdo mitocondrial em todos os tempos testodos. Porém, o reteno só foi capaz de induzir a morte celular na maior concentração utilizada e no período de 72 h. Com esses resultados, é importante enfatizar a necessidade de redução da emissão de poluentes por queima de biomassa, buscando políticas de controle. Além disso, a toxicidade apresentada pelo reteno levanta um alerta em relação a inclusão desse composto, marcador de queima de biomassa, na avaliação de risco dos hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPA).
Análise do perfil epigenético de crianças com fendas labiopalatinas não sindrômicas
(2019-08-14) Rêgo, Amanda Jussara Figueirêdo; Amaral, Viviane Souza do; ; ; Navoni, Julio Alejandro; ; Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de;
As fendas labiopalatinas não sindrômicas (FL/PNS) são defeitos congênitos advindos de causas ambientais e genéticas. Estudos recentes têm associado os fatores epigenéticos, como a metilação do DNA, à hereditabilidade dessa malformação complexa, assim como a nutrição vem sendo considerada um gatilho ambiental das FL/PNS atuando diretamente no perfil de metilação. Desta forma, o objetivo desse trabalho foi analisar o padrão epigenético do DNA de crianças com FL/PNS. Também foi investigado o padrão dietético dos fissurados e o perfil de exposição durante a gestação de suas mães. Foram coletadas células da mucosa oral de todas as crianças para a extração do DNA e determinação da metilação global e específica. Para isso, aplicou-se a técnica de análise de restrição combinada por bissulfito (COBRA) às 5-metilcitosinas (5-mC) das regiões LINE-1 e Alu, pois compreendem cerca de 30 % do genoma humano, e, adicionalmente, foi feita a reação em cadeia da polimerase para análise da metilação específica do promotor do BRCA1. A escolha desse gene foi baseada no seu papel na estabilidade do genoma. Além disso, as mães colaboraram com a pesquisa respondendo um questionário sobre informações dietéticas sobre seus filhos e fatores de exposição na gestação. Como resultado, em relação aos scores do perfil dietético analisados, foi observado que o grupo controle apresentou um maior consumo de “ultraprocessados”, “trigo refinado”, “gorduras vegetais processadas”, “carboidratos simples” e “embutidos” (p<0,05), porém, quanto às demais categorias de alimentos, não houve diferença estatística entre os grupos. Com relação aos dados da gestação, foi visto uma baixa taxa de programação gestacional e consequente atraso no início do uso dos suplementos nutricionais que favorecem o adequado desenvolvimento do embrião. Além disso, o tempo de uso de anticoncepcionais antes da gestação foi significativamente maior para as mães do grupo de fendas e associado ao aumento do risco em quase duas vezes de seus filhos nascerem com fendas (p=0,036; IC 95%, 0,639 – 4,134). Sobre os dados de metilação global, foi encontrado uma porcentagem média de 5-mC apenas para o LINE-1, respectivamente, de 48% e 45,3%, controle e fenda, com diferença estatística significante (p=0,047). E o promotor do BRCA1 mostrou-se metilado em 30.4% e 56.5%, controle e fenda, respectivamente, sem diferença estatística entre os grupos. Em geral, foi visto que o perfil alimentar dos participantes da pesquisa é de baixa qualidade, e mesmo a alimentação sendo discretamente melhor entre os indivíduos do grupo fenda, houve tendência maior à hipometilação global e hipermetilação no BRCA1 nas crianças com fendas, corroborando com as especulações recentes de que marcas epigenéticas da metilação do DNA podem ser fruto de uma herança epigenética transgeracional e ter efeitos na etiologia dessa malformação. Porém, são necessários mais estudos para a confirmação desses achados e compreensão de outros mecanismos epigenéticos que estejam atuando conjuntamente com as variantes de susceptibilidade genética e em consequência aos fatores ambientais responsáveis pela caracterização desse fenótipo.
Análise do transcriptoma das glândulas venenosas do escorpião Tityus stigmurus
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2011-11-08) Almeida, Diego Dantas; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; ; http://lattes.cnpq.br/2929963416385218; ; http://lattes.cnpq.br/2493242398479819; Pimenta, Adriano Monteiro de Castro; ; http://lattes.cnpq.br/5047132878123669; Lima, João Paulo Matos Santos; ; http://lattes.cnpq.br/3289758851760692
No Brasil, acidentes com escorpiões são considerados de importância médicosanitária, não somente por sua incidência, mas também pela potencialidade do veneno de algumas espécies em determinar quadros clínicos graves. Tityus stigmurus é uma espécie de escorpião amplamente distribuída na região Nordeste do Brasil sendo conhecida por causar graves envenenamentos humanos, cujos sintomas incluem: dor, hipoestesia, edema, eritema, parestesia, cefaléia e vômitos. A composição química do veneno do escorpião T. stigmurus ainda não foi bem avaliada, havendo uma carência na literatura de estudos com enfoque na elucidação do repertório molecular dos componentes deste veneno. Neste trabalho, realizamos uma abordagem transcriptômica para caracterizar o repertório molecular da glândula de veneno não-estimulada do escorpião Tityus stigmurus. Para tanto, uma biblioteca de cDNA foi construída e, à partir dela, 540 genes foram clonados e agrupados em 37 clusters com mais de um EST (expressed sequence tag) e 116 singlets (somente um EST). Do total de transcritos, 41% pertencem a sequências de toxinas conhecidas, sendo os peptídeos antimicrobianos (AMPs) os transcritos mais abundantes, seguido por α-KTX, β- KTX, β-NaTx e α-NaTx, respectivamente. Nossa análise revelou ainda que 34% são "possíveis toxinas", cujos transcritos correspondem a peptídeos aniônicos, peptídeos hipotéticos secretados, metaloproteases, peptídeos ricos em cisteína e lectinas. Quinze por cento dos ESTs são semelhantes a transcritos celulares. Transcritos sem similaridade com outras sequências do GenBank, foram chamadas de no hit e correspondem a 11% do total. Este trabalho apresenta a primeira visão global de cDNAs das glândulas venenosas do escorpião Tityus stigmurus. Esta abordagem permite a caracterização de um grande número de moléculas componentes da glândula de veneno, que pertencem a tipos conhecidos ou atípicos de peptídeos e proteínas do veneno da família Buthidae
Análise estrutural e avaliação do efeito condroitim sulfato extraído de tilápia (Oreochromis niloticus) em modelo de peritonite aguda
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2015-03-13) Pinto, Lívia de Lourdes de Sousa; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; Souza, Giulianna Paiva Viana de Andrade; ; http://lattes.cnpq.br/9747224552107070; ; http://lattes.cnpq.br/9951316929526841; ; http://lattes.cnpq.br/7408789571996642; Dore, Celina Maria Pinto Guerra; ; http://lattes.cnpq.br/2279068301048550; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; ; http://lattes.cnpq.br/2929963416385218
Condroitim sulfato (CS) é um glicosaminoglicano natural presente na matriz extracelular de tecidos conectivos, podendo ser extraído e purificado desses tecidos. O CS está envolvido em diversas funções biológicas, o que pode estar relacionado à variabilidade estrutural que possui, apesar da simplicidade da cadeia linear dessa molécula. Pesquisas na área biotecnológica e farmacológica com rejeitos provenientes da aquicultura vem sendo desenvolvidas no Brasil. Nas últimas décadas, a tilápia (Oreochromis niloticus), peixe nativo da África, tem sido uma das espécies mais cultivadas em várias regiões do mundo, inclusive no Brasil. A tilapicultura é uma atividade economica cujo principal inconveniente é a grande quantidade de resíduos que são descartados pelos produtores. Entende-se que o material descartado pode ser aproveitado em pesquisas como fonte de moléculas com importante aplicação biotecnológica, o que também contribui na redução de impactos ambientais e favorece o desenvolvimento dessa atividade de maneira ecologicamente correta. Dessa forma, vísceras de tilápias nilótica foram submetidas à proteólise, em seguida os glicosaminoglicanos foram complexados com resina de troca iônica (Lewatit), fracionados com volumes crescentes de acetona e purificados através da cromatografia de troca iônica DEAE-Sephacel. Na sequência, a fração foi analisada através de eletroforese em gel de agarose e ressonância magnética nuclear (RMN). O perfil eletroforético do composto, a análise dos espectros 1H de RMN e a correlação do HSQC permitem afirmar que o composto corresponde a uma molécula de condroitim sulfato. O ensaio de MTT foi utilizado para avaliação da viabilidade celular na presença do CS isolado de tilápia e mostrou que o composto não é citotóxico a células normais provenientes do fibroblasto de embrião de camundongos (3T3). Então, o composto foi testado quanto a capacidade de reduzir o influxo de leucócitos em modelo de peritonite aguda (in vivo) induzida por tioglicolato de sódio. Nesse contexto, foi realizada a contagem total e diferencial de leucócitos do sangue e líquido peritoneal coletadas, respectivamente, da veia cava e do lavado peritoneal de cada animal submetido ao experimento. O condroitim sulfato, pela primeira vez isolado de tilápia (CST ), foi capaz de reduzir a migração de leucócitos à cavidade peritoneal de camundongos inflamados em até 80,4% na dose de 10µg/kg. Os resultados mostram ainda que houve redução significativa (p<0,001) da população de polimorfonucleares do lavado peritoneal nas três doses testadas (0,1µg/kg; 1µg/kg e 10µg/kg) quando comparado ao controle positivo (apenas tioglicolato). Portanto, uma vez que a estrutura e o mecanismo de ação do CST tenham sido totalmente elucidados, esse composto pode apresentar potencial para uso terapêutico em doenças inflamatórias.
Análise evolutiva do sistems antioxidante gênico de Arabidopsis thaliana
(2017-03-17) Oliveira, Raffael Azevedo de Carvalho; Dalmolin, Rodrigo Juliani Siqueira; Lanza, Daniel Carlos Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/6851351991421755; ; http://lattes.cnpq.br/4065178015615979; ; http://lattes.cnpq.br/7034881822577095; Scortecci, Katia Castanho; ; http://lattes.cnpq.br/4808910380593455; Pasquali, Matheus Augusto de Bittencourt; ; http://lattes.cnpq.br/2819075769518114
As espécies reativas de oxigênio (EROs) são conhecidos subprodutos do metabolismo aeróbio e apesar de ter função sinalizadora, sua produção exacerbada pode levar a dano celular. As plantas desenvolveram um sistema antioxidante complexo, formado por componentes enzimáticos e não-enzimáticos, para se proteger contra a superprodução de EROs. Porém, a evolução desse sistema antioxidante ainda não está clara. Aqui o objetivo do trabalho foi descrever uma rede gênica que modela o sistema antioxidante de Arabidopsis thaliana e também investigar sua origem evolutiva. Primeiramente foram obtidos os genes a partir de bancos de dados públicos como Gene Ontology, que tivessem uma relação direta com a remoção de EROs dos sistemas, bem como alguns substratos/produtos. Então, foi modelada uma rede de interação proteína-proteína para A. thaliana. Posteriormente, utilizando informação de ortologia de 238 espécies anotadas no STRING, pudemos inferir a raiz evolutiva de cada um dos genes a fim de reconstruir a história evolutiva da rede gênica antioxidante de A. thaliana. Na rede construída, dois grupos interconectados foram encontrados, sendo um formado por proteínas SOD, tiol-redox e peroxidases; outro formado unicamente por peroxidases classe III. Cada um dos grupos provavelmente teve sua origem em momentos diferentes da escala evolutiva, porém as peroxidases classe III se mostraram os componentes mais recentes da rede. De acordo com nossos resultados, esse grupo de genes continua em expansão ao longo da evolução das plantas.
Análise filogenética e funcional de dois genes de reparo homólogos a AP endonuclease em cana-de-açúcar: ScARP1 e ScARP3
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2014-03-21) Medeiros, Nathalia Maira Cabral de; Scortecci, Kátia Castanho; ; http://lattes.cnpq.br/4808910380593455; ; http://lattes.cnpq.br/1130922293513012; Sluys, Marie-anne Van; ; http://lattes.cnpq.br/5131787064674647; Theodoro, Raquel Cordeiro; ; http://lattes.cnpq.br/0977453259767928
O genoma de todos os organismos sofre constantemente a influência de fatores mutagênicos que podem ser de origem endógena e/ou exógena, estes podem resultar em danos ao material genético. Se esses danos não forem corrigidos pode levar ao aparecimento de mutações. As plantas por serem organismos sesseis estão continuamente expostas a estes fatores. Considerando isto, os organismos (animais e vegetais) possuem diferentes vias de reparo de DNA para manter a integridade do material genético. Dentro destas vias, há a via de Reparo por Excisão de Bases (BER) que é composta por diferentes enzimas, e dentro dessa via há a enzima AP endonuclease que é alvo deste estudo. Trabalhos anteriores em cana-de-açúcar identificaram duas sequências de cDNA homólogas a esta proteína que foram denominadas ScARP1 e ScARP3. Com isso, o objetivo deste trabalho foi caracterizar estas duas sequências por meio de análises filogenéticas utilizando sequências presentes dentro do reino Plantae, e de análises estruturais dos genes de AP endonuclease por análise in silico e por plantas transgênicas contendo cassetes de super-expressão. Além disso, foi realizado transformações e a obtenção plantas transgênicas de Nicotiana tabacum contendo cassetes de super-expressão em orientação anti-senso. Foi também analisado a relação filogenética de genes DNA ligase I presentes no organismo vegetal de estudo. Os resultados obtidos permitiram verificar que as sequências ScARP1 e ScARP3 correspondem a uma duplicação, provavelmente devido a um processo de duplicação do genoma como um todo (WGD) que deve ter ocorrido no grupo das gramíneas (Poaceae). Reforçando estes dados, foi verificado um possível direcionamento da proteína para organelas diferentes, sendo que a ScARP1 pode ser encontrada no núcleo e a ScARP3 em mitocondrias e/ou cloroplasto. Com relação as plantas transgênicas contendo o cassete em orientação anti-senso foi observado que estas apresentaram crescimento lento quando comparado com a planta selvagem (não transformada). Além disso, seu fenótipo abrange alterações morfológicas no crescimento foliar, baixa estatura e diminuição na produção de sementes. Entretanto, ainda se faz necessário a obtenção da linhagem homozigota para aprofundar essas observações. Desta forma, estes resultados permitem compreender um pouco melhor do possível papel da enzima AP endonuclease em cana-de-açúcar e em plantas
Análise toxicológica in vitro e in vivo de uma fucana antitrombótica da alga marrom Spatoglossum schdöederi
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2009-06-18) Lima, Jailma Almeida de; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799567J8&dataRevisao=null; ; http://lattes.cnpq.br/9077722100091492; Leite, Edda Lisboa; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783254U6&dataRevisao=null; Farias, Wladimir Ronald Lobo; ; http://lattes.cnpq.br/4935381715547123
Fucana é um termo usado para denominar uma família de polissacarídeos sulfatados ricos em L-fucose. São extraídos principalmente da matriz extracelular de algas marrons e equinodermas. A alga marrom Spatoglossum schröederi (Dictyotaceae) possui três heterofucanas nomeadas de fucanas A, B e C. Tem sido proposto o uso de fucanas como alternativas para anticoagulantes. Nosso grupo de pesquisa extraiu uma heterofucana não anticoagulante da alga S. schröederi que tem uma elevada atividade antitrombótica in vivo. No entanto, a sua toxicidade in vitro e in vivo ainda não foi determinada. Para os resultados obtidos na toxicidade in vitro, observou-se que a fucana A nas concentrações de 20, 500 e 1000 μg/placa não mostram atividade mutagênica em teste Kado (Microsuspensão) utilizando a cepas bacterianas TA97a, TA98, TA100 e TA102, com e sem S9. No ensaio do cometa a presença da fucana A não provocou nenhum efeito genotóxico nas concentrações testadas de 20, 500 e 1000 μg/mL. Não houve dano no DNA dessas células, como evidenciado pelo tail lenght e tail moment, sendo semelhantes ao encontrado para o controle negativo. A fucana A da alga Spatoglossum schröederi quando administrada nos animais durante o período de dois meses, não provocou alteração dos parâmetros hematológicos, bioquímicos, morfologia e tamanho dos órgãos analisados. Esse teste não demonstrou que a fucana, na dose que apresenta atividade antitrombótica, apresenta toxicidade. Os dados do trabalho indicam que esta fucana é um composto com potencial farmacológico que não apresenta toxidade, esse fato da segurança para que testes futuros com esse polímero sejam realizados, inclusive testes em humanos
Análises estruturais e atividades biológicas de exopolissacarídeo extraído do fungo comestível pleurotus Sajor-Caju e de seu derivado sulfatado quimicamente
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2010-02-11) Telles, Cinthia Beatrice da Silva; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799567J8&dataRevisao=null; http://lattes.cnpq.br/4315200203874942; Abreu, Luiz Roberto Diz de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723470U6; Furlan, Sandra Aparecida; http://lattes.cnpq.br/0832413079467673
Os exopolissacarídeos são compostos extracelulares produzidos por algumas espécies de fungos e bactérias. É sugerido que estas moléculas, inclusive quando na forma de complexo polissacarídeo-peptídeo, são as principais moléculas bioativas de vários fungos. Muitas das atividades biológicas apresentadas por esses compostos podem ser acentuadas e outras podem surgir quando se adiciona quimicamente aos polissacarídeos grupamentos polares ou apolares. O corpo de frutificação de Pleurotus sajor-caju produz um heteropolissacarídeo com atividade antioneoplásica e antimicrobiana, contudo outras atividades biológicas desse polímero ainda não foram avaliadas. Neste trabalho o exopolissacarídeo de Pleurotus sajor-caju foi sulfatado quimicamente e caracterizado estruturalmente. Também foram avaliadas as atividades antiproliferativa, antioxidante e anticoagulante do exopolissacarídeo nativo (PN) e de seu derivado sulfatado (PS). Eletroforese em gel de agarose, espectroscopia de infravermelho e ressonância magnética nuclear (¹³C) comprovaram o sucesso na sulfatação de PN para a obtenção de PS. Análise por cromatografia gasosa acoplada a espectroscopia de massa mostrou que PN e PS são constituídos de manose, galactose, 3-O-metil-galactose e glicose na proporção percentual de 44,9:16,3:19,8:19 e 49,7:14,4:17,7:18,2, respectivamente. O percentual de sulfato encontrado em PS foi de 22,5%. Testes antioxidantes revelaram que o processo de sulfatação influencia de forma diferente nas atividades do exopolissacarídeo. Enquanto a capacidade antioxidante total, a capacidade de seqüestro de radical superóxido e a quelação férrica não foram influenciadas pela sulfatação, essa potencializou a atividade seqüestradora de radicais hidroxila e o poder redutor do exopolissacarídeo. Após o processo de sulfatação o exopolissacarídeo passou a apresentar atividade anticoagulante de forma dose-dependente, triplicando o tempo de coagulação em relação ao controle numa concentração de aproximadamente 2 mg/mL. O exopolissacarídeo não apresentou atividade antiproliferativa frente às células tumorais HeLa, porém após sulfatação ele passou a apresentar essa atividade de forma tempo- ependente, chegando a inibir em 60% a taxa de proliferação das células com 2 mg/mL, após 72 h de exposição. Os resultados aqui obtidos mostraram que a sulfatação do exopolissacarídeo potencializou algumas de suas atividades.
Anticorpos anti-trypanosoma cruzi como preditivos de infecção por leishmania infantum
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-02-01) Oliveira Filho, Jethe Nunes de; Ximenes, Maria de Fátima Freire de Melo; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786307T7&dataRevisao=null; ; http://lattes.cnpq.br/8122892811158486; Nascimento, Eliana Lúcia Tomaz do; ; http://lattes.cnpq.br/3995803872021711; Carvalho, Maria Goretti Freire de; ; http://lattes.cnpq.br/8934375314306198
Leishmania infantum e Trypanosoma cruzi são tripanossomatídeos de importância médica e são, respectivamente, os agentes etiológicos da leishmaniose visceral (LV) e da doença de Chagas (DC) no Brasil. Pessoas infectadas por L. infantum ou por T. cruzi podem evoluir de forma assintomática, possibilitando a transmissão destes patógenos através de transfusão sanguínea e/ou órgãos. A avaliação da infecção por T. cruzi está contemplada entre os exames realizados para triagem de doadores no Brasil, no entanto, não há disponibilidade de exames para Leishmania. Os testes sorológicos para T. cruzi são muito sensíveis, mas não específicos, podendo apresentar reações cruzadas com outros microorganismos. Desta forma, o objetivo desse estudo foi determinar a prevalência da infecção por Leishmania em doadores de sangue e avaliar se os teste sorológicos para T. cruzi detectam L. infantum. Dentre as 300 amostras de sangue de doadores, descartadas em 2011, 61 eram T. cruzi positivas, 203 eram de doadores com outras infecções e 36 eram oriundas de bolsas com baixo volume de sangue, mas sem infecção. Foram também avaliadas 144 amostras de doadores sem infecções e aptos a doarem sangue, totalizando 444 voluntários. DNA foi extraído do sangue de todas as amostras para realizar PCR quantitativa (qPCR) a fim de detectar DNA de Leishmania. O creme leucocitário obtido de todas as amostras foi cultivado em meio Schneider e NNN suplementado. Todas as amostras foram avaliadas quanto a presença de anticorpo anti-Leishmania. Os resultados sorológicos apontam um percentual de 22% de infecção por Leishmania nas amostras de sangue obtidas das bolsas descartadas. Um total de 60% das amostras positivas no ELISA para T. cruzi foram negativas na RIFI, teste usado como confirmatório, ou seja, 60% falso positivos para Chagas. Dentre essas amostras falso positivas para Chagas, 72% foram positivas no ELISA para Leishmania caracterizando a ocorrência de reação cruzada entre os ensaios sorológicos. Do total de 300 culturas realizadas, 18 cresceram parasitas que foram tipados por isoenzimas e qPCR específica, sendo encontrada a espécie Leishmania infantum nas culturas. Dentre as 18 culturas, 4 foram provenientes de bolsas expurgadas por baixo volume e negativas em todas as sorologias do banco de sangue, demonstrando assim que há um risco real de transmissão de Leishmania por via transfusional. Conclui-se que em área endêmica para leishmanioses no Brasil, diagnósticos sorológicos realizados para detectar infecção por T. cruzi em doadores de sangue podem identificar a infecção por L. infantum e, apesar de ocasionar resultados falso positivos para Chagas, essa reatividade cruzada reduz o risco de infecção por Leishmania via transfusão sanguínea, visto que não são aplicados testes específicos detecção desse parasita. Desde modo, persiste a necessidade de se discutir a implementação de um teste de triagem sorológica específico para Leishmania em países endêmicos como o Brasil
Atividade antibacteriana de magnetita (Fe3O4) isolada e associada a campos eletromagnéticos sobre Escherichia coli DH5a pVAX-1 (resistente à canamicina)
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2021-06-30) Santos, Sunamita da Silva Barbosa; Silva, Marcelo de Sousa da; http://lattes.cnpq.br/1295430560645312; http://lattes.cnpq.br/6988181736543670; Melo, Maria Celeste Nunes de; http://lattes.cnpq.br/0580551464788795; Barbosa, Júlio César Pereira; http://lattes.cnpq.br/0437190557200470
Devido ao aumento da resistência bacteriana nos últimos anos, tem tornado necessário a pesquisa e desenvolvimento de terapias antibacterianas alternativas e, nesse sentido, o uso de campo magnéticos tem sido explorados por tratar-se de uma terapia não farmacológica e, por isso, provavelmente isenta dos efeitos moleculares do fenômeno de resistência. Paralelamente, nanopartículas com propriedades magnéticas, em especial a magnetita (Fe3O4), são ainda pouco exploradas quanto ao potencial antibacteriano. Nesse contexto, o presente trabalho avaliou as propriedades antibacterianas intrínsecas de nanopartículas de magnetita, sintetizadas por moagem de alta energia, e da sua associação com um campo magnético externo variável de 70 mT a 10 Hz sobre Escherichia coli DH5α pVAX-1. Após a síntese, as nanopartículas foram caracterizadas quanto sua composição e tamanho primário, por difração de raio-X (DRX); quanto ao seu tamanho hidrodinâmico, por espalhamento dinâmico de luz (DLS) e quanto à sua carga superficial, por potencial zeta. Posteriormente, os ensaios in vitro foram realizados, nos quais foram investigadas alterações na curva de inibição bacteriana; na morfologia bacteriana, por meio de microscopia (MEV), e na carga de superfície bacteriana, utilizando potencial zeta. A associação entre o antibiótico canamicina e magnetita também foi avaliado quanto ao efeito potencializado entre as substâncias. A exposição à magnetita isolada, ou combinada ao campo magnético gerou efeitos bacteriostáticos significativos, além de alterações morfológicas na superfície bacteriana e aumento no potencial zeta da suspensão. O uso de nanopartículas de magnetita também potencializou o efeito inibitório do antibiótico canamicina, apontando para o uma segunda opção de uso, como coadjuvante na terapia antibiótica. Os resultados apresentados revelam potencial antimicrobiano importante e ensaios in vivo adicionais são necessários para comprovar a importância dos efeitos observados num sistema biológico.
Atividade antiinflamatória de uma heterofucana da alga marrom Padina gymnospora
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2007-09-05) Marques, Cybelle Teixeira; Leite, Edda Lisboa; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783254U6&dataRevisao=null; ; http://lattes.cnpq.br/7320948901041015; Chavante, Suely Ferreira; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786250T8
Fucanas, polissacarídeos sulfatados extraídos de alga marrom e alguns equinodermos, têm sido extensivamente estudadas devido as suas diversas atividades biológicas e pela sua interferência com mecanismos moleculares de reconhecimento celular, incluindo o tráfego de leucócitos dos vasos sanguíneos para o interior de sítios inflamatórios mediado pela família das moléculas de adesão denominada selectinas. Neste presente estudo, nós examinamos a estrutura de uma heterofucana extraída da alga marrom Padina gymnospora e seu efeito sobre a migração de leucócitos para o peritônio. Os polissacarídeos sulfatados foram extraídos da alga marrom por proteólise com a enzima proteolítica maxatase. A presença de contaminação por proteínas e ácido urônico foi detectada no extrato bruto dos polissacarídeos. Fracionamento do extrato bruto com concentrações crescentes de acetona produziu cinco frações com diferentes concentrações de fucose, xilose, ácido urônico, galactose, glicose e sulfato. A fração precipitada com 1,5 volume de acetona foi caracterizada por infravermelho e ressonância magnética nuclear, através das quais se pôde constatar a presença de grupos sulfato no C4 da -L-fucose. A ação antiinflamatória deste composto foi avaliada através do ensaio de peritonite induzida por tioglicolato de sódio e através da produção de óxido nítrico por macrófagos peritoneais utilizando-se o reagente de Griess. A fração F1,5 mostrou-se eficiente na redução do influxo leucocitário para a cavidade peritoneal quando utilizados 10 mg/Kg e 25 mg/Kg resultando em uma diminuição na ordem de 56 e 39 %, respectivamente. Uma diminuição na produção de óxido nítrico ocorreu quando altas concentrações de fucana foram usadas. A citotoxicidade do composto também foi avaliada utilizando-se como parâmetro a redução do 3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). A fração F1,5 não apresentou citotoxicidade quando utilizados 500 μg/ml da fração. Este estudo sugere o uso da fração F1,5 (heterofucana) como um antiinflamatório
Atividade antioxidante de fucanas e galactanas extraídas de algas marinhas
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2008-05-26) Souza, Micheline Cristiane Rocha de; Leite, Edda Lisboa; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783254U6&dataRevisao=null; ; http://lattes.cnpq.br/3111690738108138; Paiva, Patrícia Maria Guedes; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787593U2&dataRevisao=null; Abreu, Luiz Roberto Diz de; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723470U6
Estudos feitos com polissacarídeos de algas têm demonstrado que esses apresentam atividades biológicas e farmacológicas importantes. Estes compostos apresentaram atividade varredora de radicais livres, os quais são importantes na mediação do processo inflamatório e na patologia de diversas doenças. Recentemente, essa propriedade varredora tem levado alguns pesquisadores a avaliar a capacidade antioxidante de diversos polissacarídeos. Considerando o reduzido número de pesquisas com estes compostos e sabendo-se de seu largo emprego pela indústria farmacêutica e alimentícia, objetivamos neste trabalho, verificar as ações de fucanas e galactanas como antioxidantes. As fucanas são encontradas em algas marrons e as galactanas (carragenanas) em algas vermelhas. As fucanas foram obtidas da alga Padina gymnospora (frações F0,5 e F1,1), comum em nosso litoral, e uma outra fucana, o fucoidan, foi de origem comercial e extraído da alga Fucus vesiculosus. As carragenanas λ, κ e ι também foram comerciais. A atividade antioxidante foi testada em sistemas geradores de radicais superóxidos e hidroxilas, e pela inibição da peroxidação lipídica. Os resultados obtidos para inibição da formação de radicais superóxidos demonstraram que todos os polissacarídeos apresentaram atividade varredora de radicais superóxidos. O fucoidan, as frações F0,5 e F1,1 apresentaram IC50 de 0,058; 0,243 e 0,243 mg/mL, respectivamente; enquanto o IC50 das carragenanas λ, κ e ι foi de 0,046; 0,112 e 0,332 mg/mL, respectivamente. Os resultados para inibição da formação de radicais hidroxilas demonstraram que todas as amostras inibiram a formação destes radicais, exceto a F0,5. Para estes radicais o IC50 foi de 0,157 e 0,353 mg/mL para o fucoidan e F1,1, e de 0,357; 0,335 e 0,281 mg/mL para carragenanas λ, κ e ι, respectivamente. Todas as amostras foram capazes de inibir a peroxidação lipídica com IC50 de 1,250, 2,753 e 2,341 mg/mL para o fucoidan, F0,5 e F1,1, respectivamente. Já as carragenanas λ, κ e ι apresentaram o IC50 de 2,697, 0,323 e 0,830 mg/mL, respectivamente. Com estes achados, concluímos que os polissacarídeos usados neste estudo apresentam atividade antioxidante, e que o fucoidan e a carragenana λ exibem uma significante atividade varredora para os radicais superóxido e a carragenana κ uma significante atividade inibitória da peroxidação lipídica
Atividade antioxidante e antiproliferativa de extratos de folhas de Plukenetia volubilis L. (EUPHORBIACEAE)
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-03-18) Nascimento, Ana Karina de Lima; Scortecci, Kátia Castanho; ; http://lattes.cnpq.br/4808910380593455; ; http://lattes.cnpq.br/6810898162557545; Santos, Deborah Yara Alves Cursino dos; ; http://lattes.cnpq.br/3084343775765440; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799567J8&dataRevisao=null; Andrade Neto, Valter Ferreira de; ; http://lattes.cnpq.br/4863082845974813
Plukenetia volubilis conhecida popularmente como sacha incha ou amendoa lopo, é uma planta oleaginosa e trepadeira, pertecente a família Euphorbiaceae. Suas sementes apresentam alto valor nutritivo e suas folhas são utilizadas pela população amazônica para tratar doenças de pele, contudo essa ação não é comprovada cientificamente. Dentro deste contexto, o presente trabalho prevê uma prospecção química e biológica de diferentes extratos obtidos das folhas de P. volubilis. : extrato aquoso (EA), metanólito (EM), etanólico (EE), clorofórmico (EC) e hexânico (EH). A triagem fitoquímica foi realizada por meio de reações químicas de identificação e análise por cromatografia em camada delgada (CCD), utilizando diferentes eluentes e reveladores. Como parte das análises de constituição química dos extratos, foram realizadas dosagens de compostos fenólicos, açúcares totais e proteínas. Em relação às atividades biológicas, foi avaliada a capacidade antioxidante dos extratos e seus efeitos sob células tumorais e normais. Com os resultados obtidos foi possível detectar por meio das reacoes a presença de compostos fenólicos, flavonoides, saponinas e alcaloides. Por meio da análise por CCD foi possível verificar a presença de compostos com estruturas de terpenos, polifenóis e flavonóides. O extrato metanólico (EM) apresentou uma banda de coloração verde e Rf 0,65 similar ao padrão de flavonóide canferol. Com as metodologias de dosagem química foi observado uma elevada quantidade de açúcares totais nos extratos de P. volubilis. Os testes para avaliação da atividade antioxidante revelaram que todos os extratos apresentam capacidade antioxidante. No teste de capacidade antioxidante total (expresso como equivalente em ácido ascórbico, EEA/g), os extratos apresentaram valores que variaram entre 59,31 a 97,76 EAA/g. Para o teste de DPPH os valores de sequestro variaram de 88,3% a 62,8%. O teste de viabilidade celular, verificado por meio da redução do composto MTT possibilitou observar que os extratos foram capazes de diminuir a viabilidade das células cancerígenas HeLa e A549, sendo mais eficazes para linhagem HeLa. Os extratos EM e EH (250 µg/mL) apresentaram redução da proliferação de HeLa para 54,3 e 48,5%, respectivamente. Enquanto que os extratos EH e EA induziram de forma significativa a proliferação de fibroblastos normais 3T3, cerca de 70% a mais que o controle. Resultado semelhante foi observado em macrófagos Raw, onde foi verificado que a proliferação dessas células tratadas com os extratos EM, EC e EA foi a duas vezes mais que o controle. Nenhum efeito foi observado nas células CHO quando tratadas com os extratos. Outra abordagem utilizada foi a de citometria de fluxo de modo a avaliar marcadores de morte celular em células HeLa quando expostas aos extratos de P. volubilis. Os resultados destes ensaio mostraram que os extratos induziram a morte celular via apoptose. Portanto, esses resultados sugerem que os extratos das folhas de P. volubilis são potenciais alvos para serem utilizados futuramente no desenvolvimento de fármacos com ação antioxidante, proliferativa e antitumoral
Atividade bioinseticida e mecanismo de ação de vicilinas de sementes Erythrina velutina sobre moscas-das frutas Ceratitis capitata
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2008-09-21) Macedo, Leonardo Lima Pepino de; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/7934184974850346; Malavasi Filho, Aldo; ; http://lattes.cnpq.br/3571531847833437; Ximenes, Maria de Fátima Freire de Melo; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786307T7&dataRevisao=null
A mosca-da-fruta Ceratitis capitata é considerada a praga mais destrutiva da fruticultura mundial, para o seu controle vários programas de erradicação baseados em agroquímicos foram criados para permitir o comércio mundial de frutas. Soluções para a diminuição do uso de inseticidas sintéticos na agricultura estão baseadas no desenvolvimento de novos compostos alvos-específicos com menos persistência no meio ambiente, em especial proteínas vegetais com efeitos inseticidas. Neste trabalho o principal objetivo foi avaliar o efeito deletério de uma vicilina purificada de sementes de E. velutina (EvV) para larvas de C. capitata e propor o mecanismo de ação da proteína. EvV foi purificada, caracterizada e o seu efeito deletério foi testado em sistemas de bioensaios. O mecanismo de ação de EvV foi determinado por técnicas de imunodetecção e localização por fluorescência em estruturas quitinosas, presentes no sistema digestório de C. capitata. EvV é uma glicoproteína com afinidade a quitina cuja massa molecular foi de 216,57 kDa, determinado por cromatografia de gel filtração em sistema de FPLC. Por SDS-PAGE, EvV dissociouse em duas subunidades principais de 54,8 e 50,8 kDa, e quando foi submetida a eletroforese em condições nativas apresentou uma banda única de característica eletroforética ácida. Nos bioensaios a WD50 e a LD50 para as larvas foram de 0,13% e 0,14% (p/p). Os efeitos deletérios de EvV foram relacionados a sua ligação a estruturas quitinosas presentes na membrana peritrófica e no epitélio intestinal, associado com a baixa capacidade de C. capitata em digeri-la. Com esses resultados é possível propor a EvV como candidata a fazer parte de programas de manejo integrado de pragas, na composição de iscas tóxicas, como um potencial bioinseticida de natureza protéica.
Atividade citotóxica, bacteriostática e aglutinante para leishmania de ConM: uma lectina isolada das sementes do feijão de praia – Canavalia marítima (Aubl.) Thou. (1813)
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2015-06-26) Araújo, Jonalson Nogueira; Uchôa, Adriana Ferreira; Santos, Elizeu Antunes dos; ; http://lattes.cnpq.br/6762251930590306; ; http://lattes.cnpq.br/6644671747055211; ; http://lattes.cnpq.br/5561107181304291; Lima, Jailma Almeida de; ; http://lattes.cnpq.br/9077722100091492; Lima, João Paulo Matos Santos; ; http://lattes.cnpq.br/3289758851760692
Sementes de plantas são reservatórios de moléculas com grande potencial para elaboração de bioprodutos e por este motivo uma especial atenção tem sido direcionada na busca de proteínas bioativas com ação antimetabólica e propriedades farmacológicas. As lectinas de plantas são proteínas com atividades biológicas relacionadas a defesa, mas que podem ser utilizadas, heterologamente, como interferentes no metabolismo de outros organismos. Uma lectina das sementes de Canavalia maritima (CML) foi purificada em dois passos, pelo fracionamento com sulfato de amônio seguido pela cromatografia de afinidade em coluna Sephadex G- 50. CML foi analisada por SDS-PAGE e parte de sua sequência de aminoácidos determinada por espectrometria de massas. Os 20 resíduos identificados apresentaram 100% de identidade com ConM. ConM foi testada contra eritrócitos do sangue periférico humano e foi constatado a ausência de toxicidade quando incubados com até 1000 µg/mL da proteína. Já contra células mononucleares, a lectina não foi significativamente tóxica nas concentrações de 1, 2,5 e 5 µg/mL, mas o foi a partir da concentração 7 µg/mL e contra a linhagem RAEC a proteína não apresentou toxicidade significante com 25 µg/ml da proteína. Outros ensaios de citotoxicidade revelaram que a ConM é tóxica para as linhagens tumorais A549, 786- 0, HT-29 e HeLa no intervalo entre 24 e 72 horas, principalmente nas concentrações de 5, 7 e 10 µg/ml. ConM foi capaz de aglutinar as formas promastigotas de Leishmania spp na concentração de 6,25 µg/ml. Quanto a ação contra Candida spp, nenhuma das concentrações testadas (1 a 500 µg/ml) foi capaz de interferir no crescimento. Quando avaliada a atividade bacteriostática, a ConM nas concentrações variando de 0,39 a 400 µg/ml não inibiu o crescimento de Escherichia coli, já para Staphylococcus aureus a concentração de 25 µg/ml se mostrou ativa, reduzindo o crescimento em 75 %. Com base nos dados obtidos, a lectina isolada corresponde a uma isolectina do tipo ConA, e suas propriedades anti-tumoral, bacteriostático e aglutinante para Leishmania precisam ser melhor investigados para que seu potencial biotecnológico seja explorado.

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