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https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/28174| Título: | Efeito da fotobiomodulação na proliferação e viabilidade de células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) |
| Autor(es): | Albuquerque, Diego Filgueira |
| Orientador: | Barboza, Carlos Augusto Galvão |
| Palavras-chave: | Irrradiação a laser de baixa intensidade;Células endoteliais;Viabilidade celular;Proliferação celular;Proteína Ki67 |
| Data do documento: | 30-Ago-2019 |
| Referência: | ALBUQUERQUE, Diego Filgueira. Efeito da fotobiomodulação na proliferação e viabilidade de células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC). 2019. 65f. Dissertação (Mestrado em Biologia Estrutural e Funcional) - Centro de Biociências, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2019. |
| Resumo: | O objetivo do presente estudo foi avaliar, através de experimentos in vitro, o efeito da fotobiomodulação com laser de baixa intensidade na proliferação e viabilidade de células endoteliais humanas. Células endoteliais da veia do cordão umbilical humano (HUVEC) foram cultivadas e divididas em quatro grupos: C - controle (sem irradiação) e grupos L1, L4 e L7.5 – células irradiadas com doses de 1; 4; e 7,5 J/cm², respectivamente, de laser diodo (InGaAlP; comprimento de onda de 660 nm; potência de 30 Mw, em dose única). A atividade metabólica das células foi avaliada nos intervalos de 24, 48 e 72 horas após a irradiação, através do ensaio do Alamar Blue. A viabilidade e a proliferação celular também foram avaliadas no intervalo de 72h, através dos ensaios de Live/Dead, Annexin V/PI, análise das fases do ciclo celular e imunomarcação da proteína Ki67. Os dados do ensaio do Alamar Blue mostraram que no intervalo de 72h todos os grupos irradiados exibiram percentuais de redução significativamente maiores do que o grupo controle não irradiado (p<0,01), sendo a diferença ainda mais evidente em L4 e L7.5 (p<0,001). A análise da viabilidade celular por Live/Dead demonstrou um grande número de células viáveis em todos os grupos, o que também foi observado através da imunomarcação por Annexin V/PI, que mostrou alta porcentagem de viabilidade celular nos grupos estudados (C: 95,2%; L1: 96,1%; L4: 96,1%; L7.5: 96,9%). A avaliação das fases do ciclo celular mostrou que os grupos irradiados exibiram aumento gradativo do percentual de células nas fases proliferativas do ciclo (S e G2/M), de modo dose-dependente (C: 36,9%; L1: 38,0%; L4: 38,3%; L7.5: 40.4%). A irradiação promoveu um aumento significativo na expressão da proteína nuclear Ki67, com resultado mais acentuado quando comparado o grupo G7.5 com os demais grupos. Em conjunto, os resultados do presente estudo demonstraram que a fotobiomodulação, principalmente na dose de 7,5 J/cm², promoveu aumento da proliferação e viabilidade de células HUVEC, o que pode sugerir o uso potencial do laser nos parâmetros estudados como estimulo à endotelização nas técnicas de engenharia tecidual vascular. |
| Abstract: | The aim of this study was to evaluate, through in vitro experiments, the effect of photobiomodulation using low-level laser irradiation on the proliferation and viability of human endothelial cells. Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were cultured and divided into four groups: C - control (without irradiation) and L1, L4 and L7.5 groups - cells irradiated with doses of 1, 4, and 7.5 J/cm², respectively, of diode laser (InGaAlP, wavelength of 660 nm, power of 30 Mw, in a single dose). The metabolic activity of the cells was assessed at the 24, 48 and 72 h after irradiation by the Alamar Blue assay. Cell viability and proliferation were also evaluated at 72 h through the Live/Dead, Annexin V/PI assays, cell cycle phase analysis and Ki67 protein immunostaining. Data from the Alamar Blue assay showed that at 72 h all irradiated groups exhibited significantly greater reduction percentages than the non-irradiated control group (p <0.01), the difference being even more evident in L4 and L7.5 (p <0.001). The analysis of cell viability by Live/Dead demonstrated a large number of viable cells in all groups, which was also observed through Annexin V/PI immunostaining, which showed a high percentage of cell viability in the studied groups (C: 95.2%, L1: 96.1%, L4: 96.1%, L7.5: 96.9%). The evaluation of the phases of the cell cycle showed that the irradiated groups exhibited a gradual increase of the percentage of cells in the proliferative phases of the cycle (S and G2/M), in a dosedependent manner (C: 36.9%, L1: 38.0 %, L4: 38.3%, L7.5: 40.4%). Irradiation promoted a significant increase in Ki67 nuclear protein expression, with a more pronounced result when the G7.5 group was compared with the other groups. Taken together, the results of this study demonstrated that photobiomodulation, especially at a dose of 7.5 J/cm², promoted increased proliferation and viability of HUVEC cells, which may suggest the potential use of the laser in the parameters studied as a stimulus to endothelialization in the vascular tissue engineering techniques. |
| URI: | https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/28174 |
| Aparece nas coleções: | PGBIOEF - Mestrado em Biologia Estrutural e Funcional |
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