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Title: Isolamento de microrganismos endofíticos de Lippia gracilis Schauer (Verbenaceae), avaliação do óleo essencial da planta e dos metabólitos dos endofíticos sobre a corrosão microbiologicamente induzida (CMI) em aço carbono AISI 1020
Authors: Viana, Marcelino Gevilbergue
Keywords: Corrosão microbiologicamente induzida;Metabólitos;Endofítícos;Achaetomium lippae;Óleo essencial;L. gracilis schauer;Biofilme
Issue Date: 31-Aug-2017
Citation: VIANA, Marcelino Gevilbergue. Isolamento de microrganismos endofíticos de Lippia gracilis Schauer (Verbenaceae), avaliação do óleo essencial da planta e dos metabólitos dos endofíticos sobre a corrosão microbiologicamente induzida (CMI) em aço carbono AISI 1020. 2017. 216f. Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2017.
Portuguese Abstract: A corrosão microbiologicamente induzida (CMI) atinge todos os setores de produção da indústria de petróleo e gás e demanda expressivos gastos e investimentos para prevenção e controle. O objetivo dessa tese foi avaliar as atividades biocida e antibiofouling de metabólitos de microrganismos endofíticos de Lippia gracilis Schauer como também do óleo essencial (puro e em sistema microemulsionado) dessa espécie sobre biofilmes microbianos em aço carbono 1020 AISI. Os experimentos utilizaram cupons de aço carbono 1020 AISI dispostos em Erlenmyers e em sistema dinâmico para a obtenção dos biofilmes. A avaliação biocida dos metabólitos deu-se pela quantificação microbiana pelas técnicas de absorbância, do número mais provável (NMP), antes e após os tratamentos. Os tratamentos consistiram em: 0, 100, 150 e 200 μg/L de cada metabólito sobre biofilmes nos tempos de contato zero, duas, três e quatro semanas, com três repetições por tratamentos. A ação antibiofouling foi realizada pelo contato dos metabólitos na maior concentração (200 μg/L) com os biocupons antes da obtenção dos biofilmes. A ação antimicrobiana do óleo essencial de L. gracilis Schauer na forma pura, e em sistema microemulsionado, foi avaliada pela quantificação de bactérias redutoras de sulfato (BRS), oxidantes de ferro (BOF), fungos, bactérias aeróbias e anaeróbias totais, pelas técnicas de NMP, plaqueamento pour plate, espectrofotometria de massa (EM) e análise de micrografias realizadas antes e após os tratamentos. A atividade anticorrosiva foi avaliada por impedância e polarização eletroquímicas, testes gravimétricos (perda de massa e quantificação de pites) bem como pela obtenção de micrografias da superfície do aço carbono. Amostras de L. gracilis Schauer foram coletadas no município de Mossoró - RN e foram isolados fungos e bactérias das raízes e folhas. Uma nova espécie de fungo foi descoberta e identificada como Achaetomium lippae. Foram obtidos três metabólitos: dois de fungos e um de bactéria. Os resultados mostraram que houve diferença da atividade biocida e antibiofouling entre os metabólitos de endofíticos de L. gracilis Schauer avaliados, sendo LGS-Rb1 o mais eficiente na maioria tipos microbianos testados, evitando a formação de biofouling e reduzindo a taxa de crescimento microbiano na maior concentração avaliada. Os ensaios eletroquímicos e gravimétricos mostraram que para todos os metabólitos houve variação na atividade anticorrosiva. O óleo essencial de L. gracilis Schauer avaliado in natura inibiu significativamente o crescimento in vitro de C. bifermentans e de fungos em biofilme, reduzindo sua taxa de crescimento a zero a partir de 20 μg.L-1. Os ensaios eletroquímicos e gravimétricos mostraram que a concentração de 60 μg.L-1 do óleo essencial foi eficiente na redução da corrosão. Nos ensaios usando o sistema microemulsionado o óleo essencial inibiu eficientemente o crescimento de BRS, BOF e fungos após 16 dias de contato e teve atividade antibiofouling após 96 horas de contato com os biocupons de aço carbono AISI 1020. Dessa forma os metabólitos de endofíticos de L. gracilis Schauer bem como seu óleo essencial mostram-se como novas alternativas de biocidas naturais eficientes no controle da corrosão microbiologicamente induzida.
Abstract: The corrosion microbiologically induced (CMI) reaches all the sectors of production of the industry in Petroleum oil and Gas and demands expressive expensive and investments for prevention and control. The goal of this thesis was to evaluate the biocide and antibiofouling activities of secondary metabolites obtained from endophytic microorganisms of Lippia gracilis Schauer as well of the essential oil (pure and in microemulsified system) from this species on microbial biofilms in 1020 AISI carbono steel. The experiments for biocide activity used 1020 AISI carbon steel plate arranged in Erlenmyers and dynamic system with forced circulation for obtaining of the total biofilms from water produced by oil. The assessment for biocide of the metabolites from endophytic of L. gracilis Schauer resulted of the quantification of these species of bacteria in the quantification techniques by absorbance in more probable numbers (MPN), before and after the treatments, had been identified by gas chromatography coupled the spectrophotometry in mass (CG-MS) and magnetic resonance imaging (MRI) just those who demonstrated activities. The treatments consisted in evaluating the concentrations 0, 100, 150 and 200 μg/L in each metabolites on biofilms in times contact to zero, two, three and four weeks, with three repetition by treatments. The antibiofouling action was made in the contact of the metabolites in the highest concentration (200 μg/L) with the bioplates before being inserted into the dynamic system. The antimicrobial action of the essential oil L. gracilis Schauer in the pure form and in a microemulsified system was evaluated by the quantification bacteria reducer of sulphate (BRS), oxidant of iron (BOI), fungi, aerobic bacteria and total anaerobes by the techniques of dilution, platingpourplate, spectrophotometry in mass (MS) and micrographs analysis made before and after the treatments. The anticorrosive activity of all bioproducts was evaluated by electrochemical impedance and polarization, gravimetric examinations of mass loss and quantification of pites, as well in the obtaining of micrographs of the carbon steel`s surface. Samples of L. gracilis Schauer were collected in the city of Mossoró - RN and were isolated fungi and bacteria from the roots and leaves. A new type of fungus was discovered and identified as Achaetomium lippae. Three metabolites were obtained: two fungi (LGS-Lf1 and LGS-Lf2, being "LGS" for L. gracilis Schauer, "L": leaf, ―f‖: fungus and "R" for root) and one of bacteria (LGS-Rb1, being "LGS" for L. gracilis Schauer, "R": root and "b": bacterium). The results showed that there was a difference in the biocide activity and antibiofouling between the metabolites from endophytic of L. gracilis Schauer assessed, being just the LGS-Lf1 being efficient over all the microorganisms tested, avoiding the formation of biofouling on the surface of the material and reducing the rate of microbial growth at zero after 96 hours of contact at the highest concentration evaluated. The electrochemical and gravimetric tests displayed that for all the metabolites occured change in the anticorrosive activity. The L. gracilis Schauer essential oil evaluated in the pure form inhibited significally the growth in vito of C. bifermentans and of fungi in biofilm, reducing their growth rate to zero as from 20 μg.L-1. The electrochemical and gravimetric tests showed that the concentration of 60 μg.L-1 of the essential oil was efficient in the reduction of corrosion. In the tests, using the microemulsified system, the essential oil inhibited the growth of BRS, BOF and fungi 16 days later in contact and had antibiofouling activity after 96 hours in contact with the AISI 1020 bioplates of carbon steel. Therefore, the metabolites from endophytic of L. gracilis Schauer as well its essential oil are shown as new alternatives of natural biocides efficient in the control of the corrosion microbiologically induced.
URI: https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/24516
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