Navegando por Autor "Andrade, Maria Lúcia Lira de"
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Dissertação Purificação e caracterização de uma ß-glucuroniodase extraída do molusco Mesogastropoda Ampularidae Pomacea sp(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2006-04-18) Andrade, Maria Lúcia Lira de; Sousa Filho, João Felipe de; ; http://lattes.cnpq.br/3978808975978828; ; http://lattes.cnpq.br/1232534928540545; Carvalho Júnior, Luiz Bezerra de; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783452P4&dataRevisao=null; Ximenes, Maria de Fátima Freire de Melo; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786307T7&dataRevisao=nullEsse trabalho estuda a via enzimática envolvida no metabolismo de glicosaminoglicanos sulfatados no molusco Pomacea sp. Foram identificadas atividades exo e endoglicosidásicas no extrato protéico do molusco Pomacea sp por meio de hidrólise do p-Nitrofenil-β-glucuronídeo e atividade em condroitim sulfato de cartilagem de baleia, respectivamente. O tecido obtido do molusco foi homogeneizado a 4ºC com tampão acetato de sódio, em seguida centrifugado a 8.000 x g e a proteína presente no sobrenadante foi submetida ao fracionamento com crescentes concentrações de sulfato de amônio, sendo a atividade glicosidásica maior visualizada na fração F2 (50-80%). A β-glucuronidase (F3) foi isolada em cromatografia de gel filtração Bio-gel A 1.5m, o grau de purificação de 6.362,5 vezes foi ratificado em Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) com um rendimento de 35,6%. A β-glucuronidase isolada neste trabalho apresenta uma massa molecular de 100 kDa, determinada por eletroforese em gel de poliacrilamida. A determinação dos parâmetros cinéticos ideais para a catálise do p-nitrofenil-ß-glucuronídeo pela β-glucuronidase, apresentou atividade ótima em pH 5,0 e temperatura de 65ºC por 4 horas e um Km aparente de 72 x 10-2 mM. São necessárias para a degradação total de 3mM de p-N-β-glucuronídeo, a quantidade de 1,2mg de β-glucuronidase. O BaCl2 aumentou a atividade da β-glucuronidase e a atividade foi inibida completamente pelos compostos SDS e NaH2PO4