Navegando por Autor "Araujo, Nathalia Kelly de"
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Dissertação Produção de enzimas quitosanolíticas utilizando Paenibacillus ehimensis e Paenibacillus chitinolyticus para obtenção de quitoologossacarídeos(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2011-03-21) Araujo, Nathalia Kelly de; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; ; http://lattes.cnpq.br/2929963416385218; ; http://lattes.cnpq.br/3502393944021960; Assis, Cristiane Fernandes de; ; http://lattes.cnpq.br/0034694007210837; Rocha, Maria Valderez Ponte; ; http://lattes.cnpq.br/0639546287060338A obtenção de oligossacarídeos a partir da quitosana tem sido alvo de diversas pesquisas na área farmacêutica, bioquímica, alimentar e médica, devido às propriedades funcionais destes compostos. Este trabalho teve o objetivo de potencializar a produção de quitooligossacarídeos (QOS), através da otimização da produção e caracterização de enzimas quitosanolíticas secretadas pelos microrganismos Paenibacillus chitinolyticus e Paenibacillus ehimensis, e avaliação do potencial antioxidante dos produtos obtidos. No processo de otimização da produção de quitosanases foram empregadas as estratégias de Planejamento Experimental Fatorial Fracionado e Delineamento Central Composto Rotacional. Os resultados encontrados identificaram a quitosana, a peptona e o extrato de levedura como os componentes que mais influenciaram na produção de quitosanases por estes microrganismos. Com a otimização dos meios de cultivo foi possível obter um aumento de aproximadamente 8,1 vezes (de 0,043U.mL-1 para 0,35U.mL-1) e de 7,6 vezes (de 0,08U.mL-1 para 0,61U.mL-1) na atividade enzimática de quitosanases produzidas pelos P. chitinolyticus e P. ehimensis, respectivamente. Os complexos enzimáticos mostraram alta estabilidade nas faixas de temperatura entre 30ºC e 55ºC, e de pH entre 5,0 e 9,0. Foi vista a ação de solventes orgânicos, íons bivalentes e outros agentes químicos sobre a atividade destas enzimas, demonstrando alta estabilidade destes complexos brutos e dependência de Mn2+. Os QOS gerados mostraram habilidade de seqüestro do radical DPPH, atingindo uma taxa máxima de seqüestro de 61% e 39% quando estes foram produzidos com enzimas do P. ehimensis e P. chitinolyticus, respectivamente. A utilização dessas enzimas na forma bruta poderá facilitar seu uso para aplicações industriaisTese Produção e purificação de enzimas quitosanolíticas produzidas por microrganismo isolado no Nordeste Brasileiro(2015-03-23) Araujo, Nathalia Kelly de; Santos, Everaldo Silvino dos; ; http://lattes.cnpq.br/4330639792072559; ; http://lattes.cnpq.br/3502393944021960; Assis, Cristiane Fernandes de; ; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; ; Kamimura, Eliana Setsuko; ; Vaz, Michelle Rossana Ferreira;Uma cepa produtora de quitosanase foi isolada e identificada como Bacillus cereus C-01. A partir disso a purificação da enzima e sua caracterização bioquímica foram estudadas. Para purificação foi utilizado a resina da linha streamline Dietilaminoetil (DEAE) e coluna de vidro (2,6 cm x 30,0 cm) em sistema de Adsorção em Leito Expandido (ALE). As condições para a purificação da quitosanase foram otimizadas estatisticamente através de um Planejamento Composto Central. As variáveis que influenciaram significativamente os parâmetros fator de purificação (P) e rendimento da enzima (Y) foram determinadas. As análises estatísticas mostraram que as melhores condições para o máximo P foram 150 cm.h-1 (velocidade de aplicação da amostra/carga), 6,0 cm de altura do leito fixo e 7,36 cm de altura do distribuidor. Em condições otimizadas, a enzima mostrou ligar-se a resina na mesma medida usando caldo clarificado e não clarificado (0,32 e 0,3 U/g adsorvente, respectivamente). A fração recuperada após a eluição exibiu 31% de rendimento com um aumento de 1,35 vezes na atividade específica em relação ao inicial. Se analisada apenas fração eluída com NaCl 0,3 M é possível encontrar um fator de purificação de 1,75. A enzima purificada apresentou estabilidade entre as temperaturas de 30-55ºC durante 60 minutos, pH de 5-8 por 24 horas, e apresentou máxima atividade em pH 5,5 e temperatura de 55ºC. Os íons de Cu2+, Fe2+ e Zn2+ foram inibitórios para a quitosanase. Em contraste, a enzima foi significativamente ativada por Mn2+. Os resultados demonstraram que é possível purificar múltiplas proteínas, a partir de um extrato bruto sem qualquer pré-tratamento, com um processo de purificação econômico e de um único passo.