Navegando por Autor "Coutinho, Leonam Gomes"
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Dissertação Análise do estresse oxidativo e morte celular por material particulado da queima da Amazônia e compostos isolados(2016-09-19) Peixoto, Milena Simões; Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de; Alves, Nilmara de Oliveira; ; http://lattes.cnpq.br/7763292684638407; ; http://lattes.cnpq.br/5882662534904226; ; http://lattes.cnpq.br/6072610047748378; Coutinho, Leonam Gomes; ; http://lattes.cnpq.br/1909294735239579; Lajus, Tirzah Braz Petta; ; http://lattes.cnpq.br/9979644969955564A poluição atmosférica é um fator de risco ambiental, e consequentemente, um problema a saúde. Diversas substâncias são lançadas diariamente por meio de atividades antropogênicas ou naturais, tornando o ar impróprio e nocivo ao bem-estar de seres humanos e prejudicial à fauna e à flora. Na região amazônica, os desmatamentos e as queimadas têm causado prejuízos para a população exposta. Estudos demonstram que essas partículas presentes no ar causam sérios problemas respiratórios e cardiovasculares, incluindo danos ao DNA. Diante disso, o objetivo desse estudo foi avaliar o estresse oxidativo, a integridade mitocondrial e morte celular desencadeados por compostos orgânicos do material particulado menor que 10 μm (MP10) oriundos da queima de biomassa da floresta Amazônica, assim como os efeitos do reteno, marcador de queima de biomassa, em células epiteliais do pulmão humano (A549). Para tal, foi avaliado a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO) com os corantes DCF e MitoSOX e o processo de autofagia por expressão e distribuição das isoformas da proteína LC3, marcadora de autofagossomo maduro, em células A549 expostas a 200 μg/mL e 400 μg/mL de MP10 nos tempos de 24 h e 72 h. Da mesma forma, foi analisado os efeitos do reteno sobre estresse oxidativo nas concentrações de 3,3 ng/mL, 10 ng/mL e 30 ng/mL. Também foi observado a função mitocondrial com TMRM e Mitotracker e o processo de morte celular via marcação por anexina e iodeto de propídeo. Com relação à fração orgânica do material particulado, esta induziu um aumento da produção de ERO intracelulares e de superóxido mitoncondrial. Além disso, a exposição ao MP10 desencadeou a formação de autofagossomos, sugerindo o aumento da autofagia. Nas análises biológicas com o reteno, os dados mostraram que este composto levou ao aumento de ERO e de superóxido mitocondrial, a hiperpolarização da membrana mitocondrial, assim como o aumento do conteúdo mitocondrial em todos os tempos testodos. Porém, o reteno só foi capaz de induzir a morte celular na maior concentração utilizada e no período de 72 h. Com esses resultados, é importante enfatizar a necessidade de redução da emissão de poluentes por queima de biomassa, buscando políticas de controle. Além disso, a toxicidade apresentada pelo reteno levanta um alerta em relação a inclusão desse composto, marcador de queima de biomassa, na avaliação de risco dos hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPA).Dissertação Ativação local da rota da quinurenina por moduladores inflamatórios durante a meningite bacteriana(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2008-03-18) Coutinho, Leonam Gomes; Lima, Lucymara Fassarela Agnez; http://lattes.cnpq.br/1083882171718362; http://lattes.cnpq.br/1909294735239579; Checchinato, Cátia Mendes Pereira; http://lattes.cnpq.br/4124165196694369; Jerônimo, Selma Maria Bezerra; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785584A3&dataRevisao=nullA ativação da rota da quinurenina por moduladores do sistema imune tem sido observada durante diversas doenças neurológicas. Neste trabalho foi avaliado a associação entre os níveis de citocinas e quimiocinas com a concentração dos metabólitos da rota da quinurenina ( Kynurenine pathway KP) em amostras de líquor e plasma de pacientes com meningite bacteriana. Todas as amostras foram coletadas de 42 pacientes hospitalizados com o diagnóstico de meningites bacteriana aguda, tuberculósica, asséptica e pacientes cujo diagnóstico excluiu infecção no sistema nervoso central. As concentrações dos metabólitos da quinurenina foram avaliadas pela cromatografia líquida de alta pressão enquanto os níveis de citocinas e quimiocinas foram medidos pelo Bio-plex 200 suspension array system. Concentrações de quinurenina e ácido quinurênico foram significativamente mais elevadas no líquor de pacientes com meningite bacteriana aguda do que nos outros grupos. Ainda no líquor, os níveis de triptofano, ácido antranílico, 3-hidroxiquinurenina e ácido 3-hidroxiantranílico não mostraram significância estatística, embora alguns deles apresentaram um bom acúmulo durante meningite bacteriana aguda. No líquor dos pacientes com meningite bacteriana foram observados níveis mais elevados de TNF-alfa, IL-6, IL-1beta, IFN-gama, IL-10, IL-1Ra, MIP-1alpha, MIP-1beta, MCP-1 e G-CSF do que os outros grupos infectados. Em todas as amostras, as concentrações de IL-2, IL-12(p70), IL-4, IL-8 e GM-CSF não variaram significativamente. No grupo com meningite bacteriana aguda foram também observadas elevadas concentrações de IL-6, IL-10, IL-1Ra e MCP-1 no plasma. Baseado na comparação das concentrações dos metabólitos da via quinurenina no líquor e no plasma, conclui-se que a ativação desta via metabólica durante a meningite ocorre primordialmente dentro do cérebro. O aumento na concentração dos metabólitos da quinurenina durante a infecção deve-se ativação da enzima idoleamina 2,3 dioxigenase por proteínas da resposta imune hospedeira principalmente pelo IFN-gama, IL1beta e TNF-alfa.Tese Characterization of RadA/Sms from Chromobacterium violaceum and discovery of a new episome(2016-09-23) Lima, Daniel Chaves de; Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de; ; ; Theodoro, Raquel Cordeiro; ; Souza, Jorge Estefano Santana de; ; Coutinho, Leonam Gomes; ; Farias, Sávio Torres de;Chromobacterium violaceum is a ß-proteobacteria commonly found around tropical and subtropical regions throughout the globe. It produces many metabolites with biotechnological properties such as antitumoral peptides, antibiotics and polymers that have potential to replace the oil-based ones. Although it has been extensively studied over the past 40 years, there are many aspects of C. violaceum that remains unclear until today. We have conducted a biochemical study on the homologous recombination (HR) machinery of C. violaceum, mainly in RecA and its paralog, RadA/Sms. We performed in vitro assays from initial and late steps of HR such as D-loop formation and branch migration, respectively, with their corresponding molecular actors and how RadA/Sms influenced each one. We observed cvRadA/Sms influences negatively D-loop formation promoted by cvRecA and through pull-down assay we have observed an interaction between these two proteins. We also observed the DNA-binding preference of cvRadA/Sms and cvRecA and observed that this protein binds preferentially to dsDNA instead ssDNA, unlike cvRecA. No involvement of cvRadA/Sms on branch migration reactions was detected. In this work, we also described, for the first time, the isolation, sequencing and annotation of a new plasmid from C. violaceum, which we named ChVi1 and has 44,236 base pairs, 39 predicted open reading frames (ORFs) and, possibly, two origins of replication. Most of the ORFs codes for hypothetical and structural bacteriophage proteins. By using restriction digestion and Next-generation sequencing (NGS) we also looked for the presence of a similar plasmid in other seven C. violaceum strains isolated from amazon region. Our analysis suggest the presence of a plasmid similar to ChVi1 in two of these strains. The present work describes for the first time a biochemical characterization of RadA/Sms and RecA from C. violaceum which have different roles in HR. Moreover, the discovery of ChVi1 opens a path to further explore C. violaceum’s biology.Artigo Chemical inhibition of Apurinic-apyrimidinic endonuclease 1 Redox and DNA repair functions affects the inflammatory response via different but overlapping mechanisms(Frontiers, 2021) Oliveira, Thais Teixeira; Fontes-Dantas, Fabrícia Lima; Oliveira, Rayssa Karla de Medeiros; Pinheiro, Daniele Maria Lopes; Coutinho, Leonam Gomes; Silva, Vandeclecio Lira da; Souza, Sandro José de; Agnez-Lima, Lucymara FassarellaThe presence of oxidized DNA lesions, such as 7,8-dihydro-8-oxoguanine (8-oxoG) and apurinic/apyrimidinic sites (AP sites), has been described as epigenetic signals that are involved in gene expression control. In mammals, Apurinic-apyrimidinic endonuclease 1/Redox factor-1 (APE1/Ref-1) is the main AP endonuclease of the base excision repair (BER) pathway and is involved in active demethylation processes. In addition, APE1/Ref-1, through its redox function, regulates several transcriptional factors. However, the transcriptional control targets of each APE1 function are not completely known. In this study, a transcriptomic approach was used to investigate the effects of chemical inhibition of APE1/Ref-1 redox or DNA repair functions by E3330 or methoxyamine (MX) in an inflammatory cellular model. Under lipopolysaccharide (LPS) stimulation, both E3330 and MX reduced the expression of some cytokines and chemokines. Interestingly, E3330 treatment reduced cell viability after 48 h of the treatment. Genes related to inflammatory response and mitochondrial processes were downregulated in both treatments. In the E3330 treatment, RNA processing and ribosome biogenesis genes were downregulated, while they were upregulated in the MX treatment. Furthermore, in the E3330 treatment, the cellular stress response was the main upregulated process, while the cellular macromolecule metabolic process was observed in MX-upregulated genes. Nuclear respiratory factor 1 (NRF1) was predicted to be a master regulator of the downregulated genes in both treatments, while the ETS transcription factor ELK1 (ELK1) was predicted to be a master regulator only for E3330 treatment. Decreased expression of ELK1 and its target genes and a reduced 28S/18S ratio were observed, suggesting impaired rRNA processing. In addition, both redox and repair functions can affect the expression of NRF1 and GABPA target genes. The master regulators predicted for upregulated genes were YY1 and FLI1 for the E3330 and MX treatments, respectively. In summary, the chemical inhibition of APE1/Ref-1 affects gene expression regulated mainly by transcriptional factors of the ETS family, showing partial overlap of APE1 redox and DNA repair functions, suggesting that these activities are not entirely independent. This work provides a new perspective on the interaction between APE1 redox and DNA repair activity in inflammatory response modulation and transcriptionDissertação Crescimento inicial e morfologia foliar em plantas de Enterolobium contortisiliquum (Vell.) Morong. E Erythrina velutina Mart. ex Benth, sob estresse hídrico(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2014-03-28) Dantas, Sebastião Gilton; ; http://lattes.cnpq.br/6609231229691480; ; http://lattes.cnpq.br/8355446507340141; Santana, José Augusto da Silva; ; http://lattes.cnpq.br/8350660868401388; Coutinho, Leonam Gomes; ; http://lattes.cnpq.br/1909294735239579A Caatinga é o tipo vegetacional predominante no semiárido do Brasil, onde muitos habitantes dependem do extrativismo para sobrevivência, obtendo recursos para: alimentação humana e animal, medicina popular, produção madeireira, etc. É o ecossistema seco com maior densidade populacional no mundo. Os estádios iniciais de desenvolvimento são os mais críticos durante o ciclo de vida de um vegetal, sendo primordiais para seu estabelecimento em ambientes sujeitos a estresse hídrico. Informações, sobre adaptações do crescimento das espécies, correlacionadas com estudos de sua distribuição no Seridó Oriental potiguar, são importantes do ponto de vista ecológico e econômico, pois fornecem subsídios para o desenvolvimento de técnicas de cultivo, para programas de exploração sustentável e de recuperação de áreas degradadas. Este trabalho teve por objetivo estudar o crescimento inicial e a morfologia foliar em plantas de Enterolobium contortisiliquum (Vell.) Morong. (tamboril) e Erythrina velutina Mart. ex Benth (mulungu), espécies de ocorrência na Caatinga, sob estresse hídrico. Após a semeadura e emergência, as plântulas foram submetidas a três regimes hídricos: 450 (controle), 225 (estresse moderado) e 112,5 (estresse severo) mm de lâmina de água por 40 dias. A semeadura ocorreu em sacos de 5 kg e após o estabelecimento das plântulas, foi realizado desbaste deixando uma plântula por saco. No início as regas ocorreram diariamente com água destilada, passando a serem em dias alternados após o desbaste. Vinte e quarenta dias após o desbaste foram realizadas coletas de plântulas para serem feitas análises de crescimento e partição de biomassa. Quando comparadas ao grupo controle, os tratamentos com estresse hídrico apresentaram redução no crescimento da parte aérea, crescimento da maior raiz, fitomassa seca total, número de folhas e folíolos e área foliar em ambas as espécies, sendo que em geral, este efeito foi mais marcante para E. velutina. Quanto à partição de biomassa, ocorreram poucas alterações ao longo do experimento. As alterações morfológicas nas folhas em função do estresse não foram significativas, porém, houve uma tendência, em ambas as espécies, de produção de folhas mais estreitas, que facilitam a perda de calor para o meio. Não foi possível estabelecer uma relação positiva entre inibição do crescimento e distribuição das espécies, visto que E. velutina é espécie de ocorrência mais comum no Seridó Oriental. Desta forma, outros aspectos devem ser levados em consideração ao se estudar a adaptação das espécies a ambientes secos, tais como: salinidade, presença de metais pesados, velocidade do vento, etcTese Estudo do papel da proteína multifuncional APE1/Ref-1 sobre a resposta inflamatória na meningite bacteriana(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-03-19) Coutinho, Leonam Gomes; Lima, Lucymara Fassarela Agnez; ; http://lattes.cnpq.br/1083882171718362; ; http://lattes.cnpq.br/1909294735239579; Jerônimo, Selma Maria Bezerra; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785584A3&dataRevisao=null; Lajus, Tirzah Braz Petta; ; http://lattes.cnpq.br/9979644969955564; Machado, Carlos Renato; ; http://lattes.cnpq.br/6306925202374274; Leite, Edda Lisboa; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783254U6&dataRevisao=nullA meningite bacteriana (MB) é uma doença infecciosa que permanece com altas taxas de mortalidade e morbidade em todo o mundo, principalmente em países subdesenvolvidos, apesar dos avanços na antibioticoterapia. Um dos principais mecanismos associados às sequelas durante a MB é a elevada resposta inflamatória, que promove uma exacerbada quantidade de espécies reativas de oxigênio (ERO) levando às células a apoptose ou necrose. A ativação de enzimas de reparo de DNA durante o estresse oxidativo tem sido demonstrada nas mais diversas desordens. Uma importante enzima envolvida neste processo é a endonuclease apurínica/apirimidinica1/fator redox-1 (APE1/Ref-1). Ela é uma proteína multifuncional envolvida no reparo de DNA e na redução de fatores envolvidos com a resposta inflamatória, tais como o fator nuclear kappa B (NFkB) e proteína ativadora 1 (AP-1). Este estudo teve como objetivo identificar o envolvimento de APE1/Ref-1 na resposta inflamatória visando a possibilidade de sua utilização como alvo terapêutico na redução de sequelas durante a MB. Para isto, inicialmente foi realizado uma análise no perfil de expressão de citocinas em líquor de pacientes com meningite causada por Streptococcus pneumoniae e Neisseriae meningitidis visando selecionar moduladores inflamatórios de interesse para ensaios em cultura de célula subsequentes. Em seguida, utilizando um modelo celular de indução com LPS foi avaliado o efeito da inibição da atividade de reparo e redox de APE1 sobre a expressão de citocinas inflamatórias. Por fim, foi observada a expressão de APE1 no córtex (CX) e hipocampo (HC) de ratos com MB frente a uma terapia adjuvante com vitamina B6. Nossos resultados mostraram um perfil de moduladores inflamatórios muito semelhante no líquor dos pacientes com MB causada pelos patógenos estudados, embora interferon gama (IFNy) tenha sido VI significativamente mais expresso em pacientes com S. pneumoniae do que N. meningitidis. Quanto ao uso dos inibidores das funções, redox e de reparo, de APE1/Ref-1 no modelo in vitro, houve redução significativa na expressão de algumas citocinas, principalmente o fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α). Além disso, os inibidores demonstraram uma redução nos níveis de ERO nas células estimuladas com LPS. No modelo animal, a expressão protéica de APE1/Ref-1, no CX e HC dos ratos, foi modulada após introdução da vitamina B6. Portanto, esses dados fornecem um novo olhar para a fisiopatologia da MB, em que citocinas como IFNy podem ser usadas em um diagnóstico diferencial entre meningites causadas por S. pneumoniae e N. meningitidis. A proteína de reparo de DNA, APE1/Ref-1, parece ser um alvo potencial na modulação da resposta inflamatória e do estresse oxidativo, bem como a terapia adjuvante com vitamina B6 mostra ter um papel sobre a expressão de APE1/Ref-1. Consequentemente, o conhecimento obtido neste estudo pode ser importante na melhoria do prognóstico da MB, além de contribuir para entender a associação entre o reparo de DNA e inflamaçãoArtigo Resveratrol decreases the expression of genes involved in inflammation through transcriptional regulation(2018-10-24) Pinheiro, Daniele Maria Lopes; Oliveira, Ana Helena Sales de; Coutinho, Leonam Gomes; Fontes, Fabrícia Lima; Oliveira, Rayssa Karla de Medeiros; Oliveira, Thais Teixeira; Faustino, André Luís Fonseca; Silva, Vandeclécio Lira da; Campos, Julliane Tamara Araújo de Melo; Lajus, Tirzah Braz Petta; Souza, Sandro José de; Agnez-Lima, Lucymara FassarellaOxidative stress generated during inflammation is associated with a wide range of pathologies. Resveratrol (RESV) displays anti-inflammatory and antioxidant activities, being a candidate for the development of adjuvant therapies for several inflammatory diseases. Despite this potential, the cellular responses induced by RESV are not well known. In this work, transcriptomic analysis was performed following lipopolysaccharide (LPS) stimulation of monocyte cultures in the presence of RESV. Induction of an inflammatory response was observed after LPS treatment and the addition of RESV led to decreases in expression of the inflammatory mediators, tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), interleukin-8 (IL-8), and monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), without cytotoxicity. RNA sequencing revealed 823 upregulated and 2098 downregulated genes (cutoff ≥2.0 or ≤−2.0) after RESV treatment. Gene ontology analysis showed that the upregulated genes were associated with metabolic processes and the cell cycle, consistent with normal cell growth and differentiation under an inflammatory stimulus. The downregulated genes were associated with inflammatory responses, gene expression, and protein modification. The prediction of master regulators using the iRegulon tool showed nuclear respiratory factor 1 (NRF1) and GA-binding protein alpha subunit (GABPA) as the main regulators of the downregulated genes. Using immunoprecipitation and protein expression assays, we observed that RESV was able to decrease protein acetylation patterns, such as acetylated apurinic/apyrimidinic endonuclease-1/reduction-oxidation factor 1 (APE1/Ref-1), and increase histone methylation. In addition, reductions in p65 (nuclear factor-kappa B (NF-κB) subunit) and lysine-specific histone demethylase-1 (LSD1) expression were observed. In conclusion, our data indicate that treatment with RESV caused significant changes in protein acetylation and methylation patterns, suggesting the induction of deacetylase and reduction of demethylase activities that mainly affect regulatory cascades mediated by NF-кB and Janus kinase/signal transducers and activators of transcription (JAK/STAT) signaling. NRF1 and GABPA seem to be the main regulators of the transcriptional profile observed after RESV treatment.