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Contribuição para a tecnologia de produção de corpos de oclusão do baculovírus spodoptera: análise das proteínas virais e caracterização matemática
(2015-05-29) Dantas, Graciana Clecia; Pedrini, Marcia Regina da Silva; Almeida, Andrea Farias de; ; ; ; Lobato, Ana Katerine de Carvalho Lima; ; Macedo, Gorete Ribeiro de; ; Oliveira, Jackson Araujo de; ; Macedo, Luciano Pacelli Medeiros de; ; Lucio, Paulo Sergio Marinho;
O uso de agrotóxicos em cultivo agrícola é cada vez maior. Os inseticidas químicos usados na agroindústria causam grandes preocupações como a contaminação ambiental e a falta de seletividade aos organismos. Uma alternativa para esse problema é a utilização de bioinseticidas. Os bioinseticidas são mais seguros que os agrotóxicos comuns e apresentam vantagens como menor toxicidade e alta especificidade. Ademais, podem ser utilizados em menor quantidade, decompõem-se mais rápido e sua utilização associada com os inseticidas sintéticos faz com que o uso de agrotóxicos seja menor, causando baixo impacto ambiental. Em particular, bioinseticidas do tipo baculovírus têm sido apontados como uma opção de substituição a estes inseticidas químicos na agricultura. Neste trabalho, foi realizada a produção in vitro do baculovírus Spodoptera frugiperda nucleopolyhedrovirus e o estudo do seu perfil eletroforético com base nas proteínas virais presentes nos vírus extracelulares deste baculovírus. As partículas de vírus extracelulares obtidas durante a passagem seriada do baculovírus foram analisadas por eletroforese em gel desnaturante e, como esperado, a poliedrina - proteína responsável pela formação do corpo de oclusão - com aproximadamente 30 kDa foi destaque em todas as passagens analisadas. Proteínas na região entre 14,4 e 97 kDa também foram detectadas. A análise do efeito da adição do hormônio β-ecdisona extraído do Ginseng brasileiro e do hormônio ecdisona sintético na produção do baculovírus Spodoptera foi realizada na terceira e quarta passagens em células Sf21, momento em que a formação dos corpos de oclusão foi reduzida. Os resultados mostraram que o hormônio ecdisona não influenciou na produção dos corpos de oclusão na terceira passagem. Porém, na quarta passagem ao se adicionar o hormônio ecdisona, tanto o sintético como o extraído do Ginseng brasileiro, houve um aumento aproximado de duas vezes na formação dos corpos de oclusão quando comparados à produção sem adição de ecdisona. Utilizando este processo de infecção, foi realizada uma modelagem e simulação matemática que representasse o mecanismo de produção do bioinseticida.
Efeito da adição de colesterol e ecdisona na produção in vitro do baculovírus spodoptera frugiperda MNPV
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2010-08-02) Dantas, Graciana Clecia; Pedrini, Márcia Regina da Silva; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4797345U9; ; Almeida, Andréa Farias de; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4762972A4; Murmann, Lisandra; ; http://lattes.cnpq.br/8640756170189745; Macêdo, Luciano Pacelli Medeiros de; ; http://lattes.cnpq.br/1760592154110947
Dentre as pragas que atacam a cultura do milho no Brasil, destaca-se a Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae), conhecida no estádio larval como lagarta-do-cartucho, considerada a praga chave da cultura, alimentando-se da planta em todas as suas fases de crescimento, principalmente dos cartuchos de plantas jovens. Para seu controle, tem-se empregado inseticidas químicos de amplo espectro, o que tem causado efeitos adversos ao homem e ao meio ambiente. Por essa razão, torna-se necessária a busca de alternativas mais eficientes, de baixo custo e de fácil utilização, como o uso de bioinseticidas, especialmente os baculovírus. Devido à instabilidade genética durante a passagem seriada de baculovírus em cultivo de células de inseto, o desenvolvimento da produção in vitro de bioinseticidas virais é o maior desafio para a sua produção massal. Passagens sucessivas de vírus usando vírus extracelulares (BVs), necessárias para o aumento de escala durante a produção de bioinseticida viral, leva ao aparecimento de formas aberrantes de vírus, processo conhecido como efeito de passagem . A principal consequência do efeito passagem é a diminuição da produção de corpos de oclusão (OB), inviabilizando economicamente sua produção pelo processo in vitro. Neste trabalho, foi realizada a passagem seriada do isolado 18 do baculovírus Spodoptera frugiperda multiple nucleopolyhedrovirus em células Sf21. Foi observada uma queda na produção de OB de 170 para 92 da terceira para quarta passagem. Um planejamento experimental fatorial (22) foi empregado para verificar a influência de duas variáveis de entrada, concentração de hormônio 20- Hidroxiecdisona (CH) e concentração de colesterol (CC), sobre os valores das variáveis de resposta do processo (produção volumétrica e produção específica de OB), procurando definir as faixas ótimas de operação para reverter ou minimizar o efeito passagem. O resultado deste planejamento indicou influência negativa da adição do colesterol e positiva na adição de hormônio, onde as faixas ótimas encontradas para as concentrações estudadas foram: 8 a 10μg/mL e 5 a 6,5μg/mL, para as concentrações de colesterol e hormônio, respectivamente. Novos experimentos foram realizados com a adição individual de hormônio e colesterol com a finalidade de verificar a influência destes adjuvantes na produção de OB de forma independente. No planejamento experimental obteve-se produção volumétrica de 9,4 x 107 OB/mL e específica de 128,4 OB/célula. Quando se adicionou 6 μg/mL de 20-Hidroxiecdisona, as concentrações elevaram-se para 1,9 x 108 OB/mL e 182,9 OB/célula, indicando que a adição do hormônio melhorou a eficiência da produção in vitro de produção de SfMNPV em cultivos de células Sf21

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