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Análise estrutural e avaliação do efeito condroitim sulfato extraído de tilápia (Oreochromis niloticus) em modelo de peritonite aguda
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2015-03-13) Pinto, Lívia de Lourdes de Sousa; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; Souza, Giulianna Paiva Viana de Andrade; ; http://lattes.cnpq.br/9747224552107070; ; http://lattes.cnpq.br/9951316929526841; ; http://lattes.cnpq.br/7408789571996642; Dore, Celina Maria Pinto Guerra; ; http://lattes.cnpq.br/2279068301048550; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; ; http://lattes.cnpq.br/2929963416385218
Condroitim sulfato (CS) é um glicosaminoglicano natural presente na matriz extracelular de tecidos conectivos, podendo ser extraído e purificado desses tecidos. O CS está envolvido em diversas funções biológicas, o que pode estar relacionado à variabilidade estrutural que possui, apesar da simplicidade da cadeia linear dessa molécula. Pesquisas na área biotecnológica e farmacológica com rejeitos provenientes da aquicultura vem sendo desenvolvidas no Brasil. Nas últimas décadas, a tilápia (Oreochromis niloticus), peixe nativo da África, tem sido uma das espécies mais cultivadas em várias regiões do mundo, inclusive no Brasil. A tilapicultura é uma atividade economica cujo principal inconveniente é a grande quantidade de resíduos que são descartados pelos produtores. Entende-se que o material descartado pode ser aproveitado em pesquisas como fonte de moléculas com importante aplicação biotecnológica, o que também contribui na redução de impactos ambientais e favorece o desenvolvimento dessa atividade de maneira ecologicamente correta. Dessa forma, vísceras de tilápias nilótica foram submetidas à proteólise, em seguida os glicosaminoglicanos foram complexados com resina de troca iônica (Lewatit), fracionados com volumes crescentes de acetona e purificados através da cromatografia de troca iônica DEAE-Sephacel. Na sequência, a fração foi analisada através de eletroforese em gel de agarose e ressonância magnética nuclear (RMN). O perfil eletroforético do composto, a análise dos espectros 1H de RMN e a correlação do HSQC permitem afirmar que o composto corresponde a uma molécula de condroitim sulfato. O ensaio de MTT foi utilizado para avaliação da viabilidade celular na presença do CS isolado de tilápia e mostrou que o composto não é citotóxico a células normais provenientes do fibroblasto de embrião de camundongos (3T3). Então, o composto foi testado quanto a capacidade de reduzir o influxo de leucócitos em modelo de peritonite aguda (in vivo) induzida por tioglicolato de sódio. Nesse contexto, foi realizada a contagem total e diferencial de leucócitos do sangue e líquido peritoneal coletadas, respectivamente, da veia cava e do lavado peritoneal de cada animal submetido ao experimento. O condroitim sulfato, pela primeira vez isolado de tilápia (CST ), foi capaz de reduzir a migração de leucócitos à cavidade peritoneal de camundongos inflamados em até 80,4% na dose de 10µg/kg. Os resultados mostram ainda que houve redução significativa (p<0,001) da população de polimorfonucleares do lavado peritoneal nas três doses testadas (0,1µg/kg; 1µg/kg e 10µg/kg) quando comparado ao controle positivo (apenas tioglicolato). Portanto, uma vez que a estrutura e o mecanismo de ação do CST tenham sido totalmente elucidados, esse composto pode apresentar potencial para uso terapêutico em doenças inflamatórias.
Aspectos estruturais, farmacológicos e biológicos de fucanas da alga marrom sargassum vulgare
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2012-10-15) Dore, Celina Maria Pinto Guerra; Leite, Edda Lisboa; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783254U6&dataRevisao=null; ; http://lattes.cnpq.br/2279068301048550; Cruz, Ana Katarina Menezes da; ; http://lattes.cnpq.br/9810605697247961; Farias, Eduardo Henrique Cunha de; ; http://lattes.cnpq.br/0933304924768138; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; ; http://lattes.cnpq.br/9951316929526841; Carvalho, Maria Goretti Freire de; ; http://lattes.cnpq.br/8934375314306198
O presente estudo analisa a composição química e seus efeitos sobre os radicais livres, inflamação, angiogênese, coagulação, VEGF e proliferação celular dos polissacarídeos de uma alga Sargassum vulgare. O polissacárido sulfatado foi extraído a partir de algas marrons por proteólise com a enzima maxataze. A presença de proteínas e açúcares foram observados no cru de polissacarideos. Fracionamento do o extrato bruto foi feito com concentrações crescente de acetona (0,3-1,5 v), produzindo quatro grupos de polissacarideos. Estes compostos aniônicos da alga S. vulgare, foram fracionados (SV1) e purificados (PSV1) exibindo com alta açúcares totais e sulfatecontent e nível muito baixo de proteínas.A fucana SV1 contém baixos níveis de proteína e de hidratos de carbono e alto teor de sulfato. Este polissacarídeos prolongou o tempo de tromboplastina parcial activada (aPTT) a 50 ug (>240 s). não foi observado qualquer efeito de SV1 sobre o tempo de protrombina (PT), que corresponde a via extrínseca da coagulação. SV1 exibiu alta ação antitrombótica in vivo, com uma concentração 10 vezes maior do que a heparina. SV1 promoveu a actividade de inibição enzimática direta da trombina e estimulou a atividade enzimática do FXa. Mostrou também, atividade inibidora optima de trombina (50,2 ± 0,28%) a uma concentração de 25 ug / mL. A sua acção anti-oxidante de radicais scavenging por DPPH foi de (22%), indicando que o polímero não tem qualquer ação citotóxica (hemolítica) em tipos de sangue ABO e Rh, em diferentes grupos de eritrócitos e exibindo alta ação anti-inflamatória em edema de pata de ratos Wistar em todas as concentrações testadas induzida por carragenina. Tal processo foi demonstrado por edema e infiltração celular. A angiogenese é um processo dinâmico de proliferação e diferenciação. Ele requer proliferação endotelial, migração, e a formação do tubo. Neste contexto, as células endoteliais são um alvo preferido para muitos estudos e terapias. A eficácia antiangiogenico de polissacarídeos foi examinada in vivo na membrana corioalantóica pinto (CAM) usando-se ovos fertilizados. Diminuições na densidade dos capilares foram avaliados e pontuados. Os resultados mostraram que SV1 e PSV1 tem um efeito inibidor da angiogenese. Estes resultados foram também confirmados por tubulogenesis inibição na célula endotelial da aorta de coelho (RAEC) em matrigel. Células RAEC quando foram incubadas com SV1and PSV1 demonstraram inibição da secreção de VEGF, a 25, 50 e 100 ug/mL. A secreção de VEGF com a linha de células RAEC durante 24 h, foi mais eficaz para PSV1 a 50 ug / mL (71,4%) do que SV1 100 ug / mL (75,9%). SV1 e PSV1 posuiram uma acção antiproliferativa (47%) contra as células tumorais tipo HeLa. Estes compostos foram avaliados também, no ensaio de apoptose (anexina V - FITC / PI) e a viabilidade celular pelo ensaio de MTT de RAEC. Estes polissacarídeos não afetaram a viabilidade e não tiveram ação apoptótica ou necrótica. Nossos resultados indicam que estes polissacarídeos sulfatados têm ações antiangiogênica e antitumoral e constituem um importante alvo biológico e farmacológico
Atividade anticoagulante, antioxidante e antitumoral de heterofucanas da alga Dictyopteris delicatula (Lamouroux, 1809)
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2011-12-02) Magalhaes, Kaline Dantas; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799567J8&dataRevisao=null; ; http://lattes.cnpq.br/8056545175678333; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; ; http://lattes.cnpq.br/9951316929526841; Farias, Eduardo Henrique Cunha de; ; http://lattes.cnpq.br/0933304924768138
No presente estudo, seis populações de polissacarídeos sulfatados foram obtidas a partir da alga Dictyopteris delicatula (Lamouroux, 1809) e suas atividades anticoagulante, antioxidante e antitumoral avaliadas. Deste modo, as seis frações (F0.5v, F0.7v, F1.0v, F1.3v, F1.5v e F2.0v) foram obtidas por proteólise seguida por fracionamento de acetona e gel filtração molecular Sephadex G-100. Todas as frações apresentaram atividade anticoagulante frente ao ensaio de aPTT, mas não sobre o ensaio de PT. As heterofucanas exibiram atividade antioxidante total, capacidade em sequestrar radicais superóxido e propriedade de quelar ferro. As análises químicas demonstraram que todos os polissacarídeos contêm heterofucanas composta principalmente por fucose, xilose, glicose, galactose, ácido urônico, e sulfato. Nenhuma das frações alterou o PT. Entretanto, todas as frações foram capazes de dobrar o aPTT de uma maneira dose dependente. As heterofucanas F0.7v e F1.0v demonstraram baixa atividade anticoagulante, enquanto a F1.5v apresentou a maior atividade anticoagulante e quando comparada com Clexane®, uma heparina de baixo peso molecular, em mesma concentração, apresentou antividade anticoagulante semelhante. As fucanas F0.5v e F0.7v a 1,0 mg/mL mostraram alta atividade de quelação ferica (~ 45%), enquanto a fucana F1.3v (0,5 mg/mL) mostrou considerável potencial redutor, cerca de 53,2% da atividade da vitamina C. A melhor atividade antitumoral foi encontrada nas fucanas F1.3v e F0.7v. No entanto, a atividade F1.3v foi muito superior a F0,7v, quase 100% de inibição da proliferação de células HeLa (célula de câncer de colo de útero). Estas fucanas foram selecionadas para novos estudos sobre caracterização estrutural, bem como em experimentos in vivo, que já estão em andamento
Avaliação das atividades antinociceptiva e anti-inflamatória de uma heterofucana da alga Dictyota menstrualis
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-12-13) Albuquerque, Ivan Rui Lopes de; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799567J8&dataRevisao=null; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4762946P4; Farias, Eduardo Henrique Cunha de; ; http://lattes.cnpq.br/0933304924768138; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; ; http://lattes.cnpq.br/9951316929526841; Silva, Marcelo Sousa; ; Oliveira, Moacir Franco de; ; http://lattes.cnpq.br/8843113233262619
Fucana é um termo que define uma família de hetero e homopolissacarídeos que contem L-fucose em sua estrutura. Neste trabalho uma hererofucan F 2,0v da alga Dictyota menstrualis foi avaliada como agente antinociceptivo e antiinflamatório. A fucana F 2,0v inibiu a migração de leucócitos em até 100% (20.0 mg/kg) para a cavidade peritoneal após estimulo químico, porém, não alterou a expressão das interleucinas IL-1β, IL-6 e de TNF-α. Com relação a sensação dolorosa a F 2,0v (20.0 mg/kg) possui atividade antinociceptiva periférica com potência semelhante à dipirona. Por outro lado não apresentou efeito no teste da placa quente. Análises de microscopia confocal e citometria de fluxo mostram que a F 2,0v se liga a superfície dos leucócitos. O conjunto de resultados apresentados pela fucana F 2,0v sugerem que o mecanismo de ação está relacionado com sua capacidade de inibir a migração de leucócitos para o local da injúria tecidual. Em resumo os dados mostram que F 2,0v apresenta grande potencial como composto antinociceptivo e antiinflamatório. Estudos futuros serão realizados para caracterizar melhor o mecanismo de ação da F 2,0v
Caracterização estrutural e atividades farmacológicas do alginato obtido da alga Dictyopteris delicatula (J.V. Lamouroux., 1809) e seu derivado sulfatado
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2015-10-28) Florentin, Kahena de Quevedo; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; ; http://lattes.cnpq.br/9951316929526841; ; http://lattes.cnpq.br/6626673701209719; Lima, Jailma Almeida de; ; http://lattes.cnpq.br/9077722100091492; Santos, Marilia da Silva Nascimento; ; http://lattes.cnpq.br/0186671965714500
Alginate is a linear polymer compound of D-mannuronic acid(M) linked (1 → 4) at its epimer in C-5 of L-guluronic acid (G). An alginate was isolated and partially purified from brown seaweed D. delicatula (DYN). DYN was chemically sufated (DYS). DYS showed 22% of sulfation and the rate of total sugars was around 66 and 59% for DYN and DYS respectively. DYN DYS and showed a ratio M G of 0.86 and 1.1, respectively. IR signals at 1221cm-1 confirmed the sulfation of DYS. DYN presented anticoagulant activity about intrinsic coagulation pathway, while DYS did not alter the clotting times for aPTT and PT. DYN and DYS also showed antioxidant properties especially ferric chelation where DYN reached about 97% and the OH sequestration where both averaged 85%. In 3T3 cells, DYN indicated proliferation in 24h and 48h of incubation and no cytotoxicity. For tumor lines HeLa and b16, and DYN and DYS decreased significantly the cell viability, especially after 48 hours (about 71% of inhibition). Given the results obtained in this study, it is clear that the sulfation is not decisive for the activity of D. delicatula alginate. In general, DYS and DYN shown as potential compounds to be used pharmacologically, and also in the food industry for revealing be great antioxidant.
Caracterização estrutural e avaliação das atividades farmacológicas da fucana B extraída da alga Dictyota menstrualis
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2014-02-06) Costa, Thiago Gomes; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; ; http://lattes.cnpq.br/9951316929526841; ; http://lattes.cnpq.br/7247666615071279; Dore, Celina Maria Pinto Guerra; ; http://lattes.cnpq.br/2279068301048550; Abreu, Luiz Roberto Diz de; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723470U6
Algas marinhas são uma das principais fontes de compostos biologicamente ativos. Na matriz extracelular desses organismos existem os polissacarídeos sulfatados que funcionam como componente estrutural prevenindo-a contra desidratação. A fração 0,9 (FucB) rica em fucanas sulfatadas obtida da alga marrom Dictyota menstrualis foi caracterizada quimicamente e avaliada quanto a atividade farmacológica por meio de ensaios de atividade anticoagulante, ação estimulatória sobre a síntese de heparam sulfato antitrombótico, atividade antioxidante e seus efeitos na proliferação celular. Os principais componentes da FucB foram carboidratos (49,80 ± 0,10%) e sulfato (42,30 ± 0,015%), apresentando compostos fenólicos (3,86 ± 0,016%) e baixa contaminação protéica (0,58 ± 0,001%). FucB mostrou perfil polidisperso e sinais na análise de infravermelho em 1262, 1074 e 930 e 840 cm-1 atribuídos a ligações S=O de ésteres de sulfato, presença de ligação C-O de 3,6-anidrogalactose, β-D-galactose não sulfatada e sulfato na posição axial do C4 da fucose, respectivamente. FucB exibiu moderada atividade anticoagulante, este polissacarídeo prolongou o tempo de tromboplastina parcial activada (aPTT) a 200 ug (>90s) não foi observado qualquer efeito de FucB sobre o tempo de protrombina (PT), que corresponde a via extrínseca da coagulação. Esta fração promoveu estimulação cerca de 3,6 vezes na síntese de heparam sulfato (HS) pelas células endoteliais da aorta de coelho (RAEC), em cultura, quando comparadas com as células não tratadas com FucB. Esta também demonstrou competir pelo sítio de ligação com a heparina. A fração rica em fucanas sulfatadas exibiu forte ação antioxidante sobre os ensaios de antioxidante total (109,7 e 89,5% comparados com padrões BHT e Ácido ascórbico), poder redutor (71% comparado ao Ácido ascórbico) e quelação férrica (71,5% comparando com ácido ascórbico). A fração dessa alga mostrou atividade citostática sobre as células RAEC revelando que o aumento da síntese de heparan sulfato não está relacionado à proliferação. FucB apresentou ação antiproliferativa sobre linhagens celulares modificadas como Hela e Hep G2 pelo ensaio de MTT. Esses resultados sugerem que FucB de Dictyota menstrualis tem potencial anticoagulante, antitrombótico, antioxidante bem como uma possível ação antitumoral, promovendo a estimulação da síntese de HS antitrombótico pelas células endoteliais, sendo útil na prevenção da trombose, devido também a sua ação inibitória sobre as espécies reativas do oxigênio (ROS) em alguns sistemas in vitro, estando envolvidos na promoção de estado de hipercoagulabilidade
Commercial fucoidans from Fucus vesiculosus can be grouped into antiadipogenic and adipogenic agents
(MDPI, 2018-06-04) Oliveira, Ruth Medeiros; Câmara, Rafael Barros Gomes da; Monte, Jessyka Fernanda Santiago; Viana, Rony Lucas Silva; Melo, Karoline Rachel Teodosio; Queiroz, Moacir Fernandes; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; Oyama, Lila Missae; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira
Fucus vesiculosus is a brown seaweed used in the treatment of obesity. This seaweed synthesizes various bioactive molecules, one of them being a sulfated polysaccharide known as fucoidan (FF). This polymer can easily be found commercially, and has antiadipogenic and lipolytic activity. Using differential precipitation with acetone, we obtained four fucoidan-rich fractions (F0.5/F0.9/F1.1/F2.0) from FF. These fractions contain different proportions of fucose:glucuronic acid:galactose:xylose:sulfate, and also showed different electrophoretic mobility and antioxidant activity. Using 3T3-L1 adipocytes, we found that all samples had lipolytic action, especially F2.0, which tripled the amount of glycerol in the cellular medium. Moreover, we observed that FF, F1.0, and F2.0 have antiadipogenic activity, as they inhibited the oil red staining by cells at 40%, 40%, and 50%, respectively. In addition, they decreased the expression of key proteins of adipogenic differentiation (C/EBPα, C/EBPβ, and PPARγ). However, F0.5 and F0.9 stimulated the oil red staining at 80% and increased the expression of these proteins. Therefore, these fucoidan fractions have an adipogenic effect. Overall, the data show that F2.0 has great potential to be used as an agent against obesity as it displays better antioxidant, lipolytic and antiadipogenic activities than the other fucoidan fractions that we tested
Um dermatam sulfato antitrombótico do camarão Litopenaeus vanammei inibe a inflamação e angiogênese
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2016-03-29) Palhares, Lais Cristina Gusmão Ferreira; Chavante, Suely Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/3440814329803472; ; http://lattes.cnpq.br/5860779216293603; Santos, Elizeu Antunes dos; ; http://lattes.cnpq.br/6762251930590306; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; ; http://lattes.cnpq.br/9951316929526841; Brito, Adriana da Silva; ; http://lattes.cnpq.br/0887305061762326; Clemente, Tatjana Keesen de Souza Lima;
A inflamação é composta de uma reação vascular e outra celular, conferindo diferentes reações de tecidos e células, tanto do ambiente intravascular, como o do ambiente extravascular. À medida que o processo inflamatório ocorre, proteases da coagulação, em especial a trombina (FIIa), são capazes de desencadear diversas respostas celulares na biologia vascular e por isso, frequentemente é observada a ativação de outros sistemas biológicos, levando à complicações durante um evento inflamatório, como a trombose e a angiogênese. Assim, moléculas antagonistas desses eventos são modelos interessantes para o desenvolvimento de novos fármacos anti-inflamatórios. Neste contexto, destacam-se os glicosaminoglicanos (GAGs), os quais interagem com diversas proteínas envolvidas em processos biológicos importantes, incluindo inflamação e coagulação. Por essa razão, o presente trabalho teve por objetivo avaliar os potenciais anti-inflamatórios, antitrombótico, antiangiogênico, bem como anticoagulante de GAGs do tipo dermatam sulfato (DS) extraídos do cefalotórax do camarão Litopenaeus vannamei. O composto foi obtido após proteólise e purificação por cromatografia de troca-iônica. Após total digestão por liases que digerem compostos tipo DS (condroitinase ABC), sua natureza do tipo DS foi revelada, sendo então denominado DSL. O composto do camarão mostrou reduzido efeito anticoagulante pelo ensaio de TTPa, porém apresentou alta atividade anti-IIa, diretamente e via Cofator II da heparina. Sobre a inflamação, o composto apresentou significativo efeito inibitório com redução de citocinas pró-inflamatórias. Potenciais inibitórios foram relatados no ensaio antitrombótico e antiangiogênico, sendo este último dose-dependente. Quanto à atividade anti-hemostática, o polissacarídeo não induziu efeito hemorrágico significativo. Assim, os resultados exibidos pelo composto tipo DS isolado do camarão, apontam este glicosaminoglicano como alvo biotecnológico com perspectivas para o desenvolvimento de novas drogas multipotentes.
Efeito da salinidade da água do mar no rendimento, composição e atividades biológicas de frações polissacarídicas da Chlorophyta Caulerpa cupressoides var. flabellata
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2010-03-19) Costa, Mariana Santana Santos Pereira da; Nascimento, Hugo Alexandre Dantas do; ; http://lattes.cnpq.br/2920005922426876; ; http://lattes.cnpq.br/6295062398594903; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; ; http://lattes.cnpq.br/9951316929526841; Pavão, Mauro Sérgio Gonçalves; ; http://lattes.cnpq.br/8860464897886961
Polissacarídeos sulfatados de algas marinhas têm sido descritos por apresentarem diversas atividades farmacológicas. No entanto, nada se sabe a respeito da influência da salinidade da água do mar na estrutura de polissacarídeos sulfatados de algas verdes e nas atividades farmacológicas por eles desempenhadas. Por isso, objetivo principal deste trabalho foi avaliar o efeito da salinidade da água do mar no rendimento e na composição de frações polissacarídicas da alga verde Caulerpa cupressoides var. flabellata, coletada em duas praias de diferentes salinidades do litoral do Rio Grande do Norte, bem como verificar se as alterações provocadas pela salinidade se refletiriam em atividades biológicas das frações. Extraiu-se quatro frações ricas em polissacarídeos sulfatados da C. cupressoides coletada na praia de Camapum (denominado CCM F0.3, F0.5, F1.0, F2.0), a qual a água tem maior salinidade, e na praia de Búzios (denominados CCB F0.3; F0.5, F1.0, F2.0). Diferente do observado para outras algas, a composição centesimal da C. cupressoides não se alterou em função desta crescer em ambiente de maior da salinidade. Além disso, interessantemente, a C. cupressoides têm altas quantidades de proteínas, maior até do espécies de algas comestíveis. Não houve diferença significativa (p> 0,05) entre o rendimento das frações polissacarídicas da CCM e das suas correlatas na CCB, o que indica que a salinidade não interfere no rendimento das frações polissacarídicas. No entanto, houve uma diferença significativa na razão sulfato/açúcar da F0.3 (p <0,05) e F0.5 (p <0,01) (a razão sulfato/açúcar da CCM F0.3 e da CCB F0.5foram maiores do que suas correlatas), enquanto a razão sulfato/açúcar da F1.0 e F2.0 não se alterou significativamente (p> 0,05) com a salinidade. Este resultado sugere que a diferença observada na razão sulfato/açúcar entre as frações da CCM e CCB, não é, meramente, função da salinidade, mas provavelmente está relacionada com a função biológica destes biopolímeros nas algas marinhas. Além disso, a variação de salinidade entre os locais de coleta não influenciou a composição monossacarídica, a mobilidade eletroforética ou os espectros de infravermelho das frações polissacarídicas, demonstrando que a salinidade não altera a composição de polissacarídeos sulfatados de C. cupressoides. Houve diferenças nas atividades antioxidantes e anticoagulantes entre a CCM e CCB. CCB F0.3 (mais sulfatada) apresentou maior capacidade antioxidante total que CCM F0.3, já a habilidade quelante da CCM F0.5 foi mais potente que a CCB F0.5 (mais sulfatada). Estes dados indicam que, provavelmente, as atividades biológicas das frações polissacarídicas da CCM e CCB dependem do padrão de distribuição espacial dos grupos sulfatos no polímero e que não é, meramente, um efeito da densidade de carga. Polissacarídeos de C. cupressoides também exibiram atividade anticoagulante na via intrínseca (aPTT) e via extrínseca (teste PT). CCB F1.0 e CCM F1.0 mostraram diferenças significantes (p <0,001) no aPTT, já F0.3 e F0.5 não mostraram diferença (p> 0,05) entre a CCM e CCB, corroborando o fato de que a razão sulfato/açúcar não é um fator determinante para a atividade biológica, mas sim, a distribuição do sulfato ao longo da cadeia do polissacarídeo. Além disso, F0.3 e F0.5 apresentaram atividade no teste de aPTT semelhante a clexane®, medicamento anticoagulante. Adicionalmente, as F0.5 mostraram atividade no PT. Estes resultados sugerem que a salinidade pode ter criado sutis diferenças na estrutura dos polissacarídeos sulfatados, como por exemplo, na distribuição dos grupos sulfatos, o que ocasionaria as diferenças nas atividades biológicas entre as frações da CCM e da CCB
Extração e Quantificação de polissacarídeos Sulfatados da microalga nannochloropis oculuta e avalição da atividade antioxidante in vitro
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2021-09-17) Quieregati, João Pedro Bauman; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/4731846046742457; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; Paiva, Weslley de Souza
Grande parte da extensão do planeta terra é coberto por águas marinhas ou doces, e nesta existem diversos organismos desde os mais simples até os mais complexos, dentre os muitos pode-se destacar as algas. As microalgas marinhas possuem a capacidade de sintetizar durante seu período de vida carotenóides, ácidos graxos insaturados de cadeia longa, polissacarídeos, em alguns raros casos polissacarídeos sulfatados (PS). Todavia, esses PS oriundos de microalgas costumam apresentar diversas atividades farmacológicas. Dentre desse contexto, pode-se citar a microalga Nannochloropsis oculata, cuja capacidade sintetizar PS foi demonstrada em 2019 (Pandeirada et al. 2019). Foi demonstrado também que um extrato rico em polissacarídeos de N. oculata apresenta atividade antioxidante, mas não se identificou se essa atividade adivinha dos PS. Portanto, com intuito de preenche esta lacuna, nesse trabalho teve-se como objetivo extrair PS de N. oculata e avaliá-los como agentes antioxidantes em diferentes in vitro. Para tal, a alga liofilizada foi delipidada com metanol:clorofórmio (1:2 v/v) e posteriormente, macerada (NaCl, 0,25 M, 4 h, 65 °C). Após centrifugação (8000 x g, 4 °C, 20 min), o sobrenadante obtido foi liofilizado e denominado de extrato bruto (EB). Esse foi submetido a cromatografia de troca iônica (resina TKSgel DEAE- 5PW) e foram obtidas 4 frações. Dosagens químicas e eletroforese em gel de agarose confirmaram a presença dos PS na fração 1,0M. A atividade antioxidante da amostra foi avaliada em 4 testes in vitro: quelação de ferro; quelação de cobre; poder redutor, capacidade antioxidante total (CAT). Nos três primeiros testes a amostra mostrou baixa atividade. Porém, no teste de CAT, 1 g da amostra apresentou um atividade equivalente a aproximadamente 118 mg de ácido ascórbico. Pelo que se sabe esta é a maior atividade de CAT já descrita para um PS. Espera-se futuramente caracterizar quimicamente o PS de N. Oculata, assim como, a sua(as) atividade(s) antioxidante in vivo.
Extração, caracterização estrutural parcial e atividades farmacológicas do olginato obtido da alga marrom Lobophora variegata (Lamouroux) Oliveira Filho, 1977
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2014-02-28) Almeida, Hugo Wescley Barros; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; ; http://lattes.cnpq.br/9951316929526841; ; http://lattes.cnpq.br/2428831383858362; Dore, Celina Maria Pinto Guerra; ; http://lattes.cnpq.br/2279068301048550; Souza, Giulianna Paiva Viana de Andrade; ; http://lattes.cnpq.br/9747224552107070
Os ácidos algínicos ou alginatos são polissacarídeos ácidos presentes em algas marrons amplamente utilizadas na indústria de alimentos, estética, médica e farmacêutica. Este trabalho propõe a extração, caracterização química e verificação das atividades farmacológicas da alga marinha marrom Lobophora variegata. O alginato foi extraído da alga Lobophora variegata e parte foi sulfatado para fins comparativos. O extrato nativo apresentou 42% de açúcar total, 65% de ácido urônico, 0,36% de proteína e 0% de sulfato, enquanto a sulfatada apresentou 39%, 60%, 0,36% e 27,92% respectivamente. A presença do grupo sulfato pode ser verificada através da metacromasia com o corante azul de toluidina no sistema de eletroforese e vibração característica em 1262,34 cm-1 na espectroscopia de infravermelho, atribuído a ligações S=O. Observou-se a formação de filmes e esferas de alginato nativo, onde a solução mais concentrada 6%, resultou em um filme mais espesso e consistente. O alginato nativo apresentou atividade proliferativa nas concentrações (25 e 50μg), (50 μg) e (100 μg) em linhagem celular 3T3 em 24h, 48h e 72h, respectivamente, já o sulfatado em (100 μg) em 24h. Apresentou também atividade antiproliferativa ou citotóxica em células da linhagem HeLa, com (25 e 100 μg), (25 e 100 μg) e (25, 50 e 100 μg), para o nativo, já para a sulfatada nas concentrações (100 μg) em 24h, (25, 50 e 100 μg) em 48h, e (50 e 100 μg) 72h. Quanto a atividade antioxidante, os alginatos sulfatados apresentam melhor atividade antioxidante total chegando a 29% de atividade enquanto o nativo 7,5% de atividade. Para o radical hidroxila o AS apresentou alta inibição (entre 77-83%) nas concentrações testadas, porém o AN superou estes números na ordem de 78-92% de inibição. O poder redutor de AN e AS variou entre 39-82%. Na metodologia de quelação férrica, o NA chegou a 100% de quelação, enquanto o AS permaneceu em um platô oscilando em 6,5%. Contudo, neste trabalho, pudemos constatar alginatos com promissoras atividades farmacológicas, com uso nas diversas indústrias como um composto antioxidante/antitumoral
Fucanas extraídas da alga Dictyota menstrualis com atividade antioxidante, antiproliferativa e anticoagulante
(2018-06-26) Araújo, Thiago Laurentino; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; Lima, Jailma Almeida de; ; ; ; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; ; Santos, Marilia da Silva Nascimento;
Fucanas constituem um grupo de polissacarídeos sulfatados encontrados na matriz mucilaginosa de algas marrons constituídas por fucose sulfatada e uma porcentagem variada de outros monossacarídeos. Diante da grande demanda por novos medicamentos as fucanas se destacam devido ao seu potencial farmacológico, cujo repertório de propriedades inclui atividades anticoagulante, antioxidante, antiinflamatória, antiproliferativa, antinociceptiva, hepato e neuroprotetora. A fucana FDM1,0 da alga Dictyota menstrualis obtida em estudo anterior foi escolhida por apresentar o melhor rendimento para ser purificada. FDM1,0 foi fracionada por massa molecular resultando em 7 subfrações (F1 a F7) as quais foram caracterizadas quimicamente. O maior peso seco adquirido foi de F1 com rendimento de 61,34%, fato que motivou seu uso nos ensaios de avaliação das atividades farmacológicas. FDM1,0 e F1 foram comparadas quanto ao seu efeito em ensaios de atividade antioxidante, anticoagulante, na antiproliferação e morte celular. FDM1,0 e F1 apresentaram 48,6 e 51,8% de açúcares totais, 2,3 e 6,1% de sulfato e baixa contaminação proteica, respectivamente. A análise de infravermelho de FDM1,0 e F1 mostrou sinais característicos de polissacarídeos. Ambas FDM1,0 e F1 apresentaram elevada inibição de radicais superóxido (76 e 61%) e radicais DPPH (74 e 68%). Não foi observada atividade quelante de íons de ferro, mas obteve-se leve quelação de cobre para FDM1,0 e F1. F1 apresentou o mesmo efeito que heparina comercial de baixo peso molecular, no ensaio de aPTT, na concentração de 66,7µg/ml, enquanto FDM1,0 na concentração de 83,3µg/ml. No ensaio de PT nenhuma das frações apresentou atividade anticoagulante, indicando que o mecanismo de ação de FDM1,0 e F1 está voltado para a via intrínseca da coagulação. No ensaio de MTT (brometo de 3-[4,5- dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolium), 100µg de FDM1,0 inibiu B16-F10 (melanoma maligno murino) em 77%. FDM1,0 e F1 inibiram 92 e 100%, respectivamente, células da linhagem 786-O (adenocarcinoma de células renais humano) sob a massa de 100µg, quando tratadas por 24h. No ensaio de morte celular utilizando anexina-V e iodeto de propídio (PI), utilizando a mesma concentração, nenhuma fração provocou a morte das células 786-O. Esses resultados sugerem que as frações FDM1,0 e F1 apresentam elevada inibição sobre a redução de MTT a formazan em células 786-O, atividade antioxidante proeminente, especialmente sobre radicais superóxido, tornando-as potenciais antioxidantes a serem explorados. A elevada atividade anticoagulante observada sobre a via intrínseca da coagulação sugere que os polissacarídeos sulfatados de D. menstrualis podem ser uma fonte de possíveis agentes anticoagulantes e a alta inibição de células 786-O no ensaio de MTT deve ser melhor investigada para verificação do seu elevado potencial de inibição sobre a linhagem celular cancerígena.
Polissacarídeos sulfatados da alga marrom Dictyota mertensii: avaliação do efeito antioxidante sinérgico em associação com o ácido ascórbico e purificação de uma fração
(2019-09-23) Silva, Cynthia Haynara Ferreira da; Costa, Leandro Silva; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; ; ; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; ; Telles, Cinthia Beatrice da Silva;
As macroalgas marinhas são organismos que possuem grande diversidade biológica e ampla distribuição geográfica. Por causa dessa disponibilidade, elas são importantes para diversas áreas de conhecimento, como área ambiental, econômica e científica. As macroalgas sintetizam diversos compostos orgânicos com funções bioativas e, dentre esses, estão os polissacarídeos sulfatados (PS). Os PS de algas marrons (fucanas e fucoidans) apresentam diversas atividades, inclusive atividade antioxidante, e esta pode ser potencializada com o uso em conjunto de outros antioxidantes. O potencial antioxidante de PS obtidos da Dictyota mertensii já é relatado na literatura, entretanto, este se apresenta abaixo do encontrado com outros PS de macroalgas. Desse modo, objetivou-se avaliar o efeito sinérgico da atividade antioxidante de PS obtidos da macroalga D. mertensii em combinação com o ácido ascórbico. Espécimes da alga foram coletados do litoral potiguar e submetidos ao processo proteólise e fracionamento diferencial com acetona para obtenção dos PS, o que levou a obtenção de 6 frações (F0.3; F0.5; F0.7; F1.0; F1.5; F2.1). Essas frações polissacarídicas foram submetidas análises químicas e físicas para determinar sua composição e como resultado, observou-se que a D. mertensii sintetiza PS estruturalmente diversos. Observou-se que as frações são ricas em heteropolissacarídeos, em que há predominância dos monossacarídeos fucose, ácido glucurônico e xilose nas frações F0.3, F0.5, F1.0, F1.5 e F2.1. Além desses monossacarídeos, foi observado predominância de glicose e galactose em F1.0 e F1.5. A fração F0.7 é composta principalmente por fucose e ácido glucurônico. Foram observados três padrões de migração eletroforética nas frações: um perfil mais lento foi observado nas frações F0.3, F0.5 e F0.7; um perfil intermediário na F1.0 e um perfil mais rápido nas frações F1.5 e F2.1. Observou-se também valores diferenciados para a quantificação de açúcares totais e sulfato nas frações. Destaca-se as frações F0.7 e F0.5 com percentuais de açúcares de 85% e 66%, respectivamente em relação ao sulfato, destaca-se as frações F1.0 e F0.7, com 40,2% e 32% , respectivamente. As frações foram ainda avaliadas quanto ao potencial antioxidante em combinação com o ácido ascórbico em testes in vitro e em cultura de células. Como resultado, observou-se um aumento do potencial antioxidante proveniente do efeito sinérgico dos PS e do ácido ascórbico em todas as frações, com destaque para a F0.7, na qual foi observado potencialização de mais de 100% na capacidade antioxidante total e 40% na atividade de poder redutor. Com a análise de viabilidade celular em células epiteliais renais de cachorro (MDCK), por meio do ensaio de redução do brometo de 3-(4,5- dimetil-tiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT), foi possível observar diminuição da viabilidade celular apenas com o uso das fração F1.5, e F1.0 e F2.0 na concentração de 1 mg/mL. O potencial efeito sinérgico na atividade antioxidante em cultura de células foi avaliado pelo modelo de estresse oxidativo induzido por peróxido de hidrogênio em células MDCK. Como resultado, foi observado efeito protetor somente com as frações F0.5, F0.7 e F1.0, avaliadas isoladamente. A fração F0.7 foi escolhida para os passos de purificação e após a utilização de dispositivos de ultracentrifugação, cromatografia de troca iônica e cromatografia de gel filtração (HPLC), as análise demonstraram que a F0.7 é composta por três populações principais de PS. Os dados aqui encontrados abrem caminho para continuação dos estudos para a proposição da estrutura de pelo menos um PS, bem como entender melhor o efeito sinérgico desses polissacarídeos com o ácido ascórbico.

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