Navegando por Autor "Leitão, Ana Laura Oliveira de Sá"
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Dissertação Avaliação de métodos de rompimento celular e de diferentes metais imobilizados em resina Streamline Chelating para purificação do antígeno 503 de Leishmania i. chagasi(2017-02-08) Leitão, Ana Laura Oliveira de Sá; Santos, Everaldo Silvino dos; Sousa Júnior, Francisco Canindé de; ; http://lattes.cnpq.br/3721560802857426; ; http://lattes.cnpq.br/4330639792072559; ; http://lattes.cnpq.br/0020829098344940; Macedo, Gorete Ribeiro de; ; http://lattes.cnpq.br/3324083094904117; Bresolin, Igor Tadeu Lazzarotto; ; http://lattes.cnpq.br/5750111176589237Com o desenvolvimento da indústria biotecnológica, é crescente o interesse por antígenos recombinantes purificados para obtenção de vacinas. Porém, para essa aplicação esses antígenos precisam apresentar um elevado grau de pureza, e por isso é de grande relevância o desenvolvimento de técnicas que permitam a redução do número de operações unitárias necessárias ao processo de purificação, permitindo ainda uma elevada recuperação e proporcionando uma maior economia na obtenção dos bioprodutos. A Adsorção em Leito Expandido (ALE) vem se destacando como uma alternativa propícia para o downstream processing, pois é uma técnica cromatográfica de modo simples e de baixo custo, que integra as etapas de clarificação, concentração, purificação em uma única operação. Neste contexto, o presente trabalho tem como objetivo avaliar os métodos de rompimento celular e os diferentes metais imobilizados em resina Streamline chelating para purificação do antígeno 503 de Leishmania i. chagasi por ALE bem como remover os lipopolissacarídeos (LPS) liberados durante a etapa de rompimento celular. Primeiramente, foi avaliado qual o melhor método de rompimento celular para obtenção da proteína intracelular. As estratégias estudadas utilizando lisozima, pérolas de vidro, ureia e EDTA foram avaliadas através de quatro planejamentos experimentais. Em seguida, foram realizados testes de adsorção em batelada, utilizando-se cinco íons metálicos (Cu2+, Ni2+, Zn2+, Co2+ e Fe3+) nas concentrações de 0,1, 0,5 e 0,8 mol/L acoplados na resina Streamline chelating, escolhendo-se o metal que apresentou melhor adsorção do antígeno para os ensaios usando ALE. Posteriormente, foi estimada a quantidade mínima de tensoativo Triton X-114 necessária na etapa de lavagem da ALE para remoção do LPS, a fim de obter-se o antígeno 503 livre desse contaminante. E por fim, foram realizados ensaios de ALE visando recuperar e purificar a proteína de interesse. Para os ensaios usando ALE utilizou-se uma coluna de 2,6 cm de diâmetro por 30 cm de altura, acoplada a uma bomba peristáltica. Com os planejamentos experimentais realizados para avaliação do rompimento celular, observou-se que maiores quantidades de proteínas totais e do antígeno 503 liberadas foram obtidas para o método da ureia e que o único fator significativo para esse planejamento foi a concentração, correspondente a 8,0 M. Como resultado para a triagem do íon metálico, o cobre (Cu2+) foi o metal que apresentou maior capacidade de adsorção do antígeno 503, apresentando valores de capacidade de adsorção de 0,102, 0,128 e 0,111 mg/mL de adsorvente para as concentrações de 0,1, 0,5 e 0,8 mol/L, respectivamente. Tem-se ainda que para as três condições analisadas (0,01, 0,05 e 0,1 % de Triton X-114) na etapa de lavagem da ALE o percentual de remoção de LPS foi elevado e que a concentração mínima utilizada (0,01 %) já foi suficiente para a remoção de 99,70 % deste contaminante. Para o teste de ALE utilizando eluição isocrática (0,6 M de imidazol) os resultados obtidos mostraram baixa recuperação (3,0 %) do antígeno 503. Avaliou-se então a eluição em degrau, inicialmente em dois passos, aplicando-se 0,6 mol/L e, em seguida, 1,0 mol/L de imidazol. Porém, esta estratégia ainda não foi eficiente para recuperar a proteína de interesse. Um novo ensaio foi realizado, com um total de três passos de eluição, utilizando 0,3 e 0,6 mol/L. Esse último teste mostrou uma recuperação de 15,0 % da proteína de interesse e um fator de purificação de, aproximadamente, 3,0. Portanto, a técnica cromatográfica de afinidade por íons metálicos imobilizados (IMAC) mostrou ser uma alternativa eficiente na recuperação e purificação do antígeno 503 a partir do homogeneizado de E. coli não clarificado.Artigo Production of lignocellulolytic enzymatic complex using pretreated carnauba straw as carbon source and application on sugarcane bagasse hydrolysis(Springer Nature Switzerland, 2020-06-18) Santos, Everaldo Silvino dos; Silva, Francinaldo Leite da; Magalhães, Emilianny Rafaely Batista; Leitão, Ana Laura Oliveira de SáLignocellulolytic enzymes have a great biotechnological potential. Their commercial exploitation has been considerably increased in recent years. However, its industrial application in the conversion of lignocellulosic biomass to biofuels depends on the development of more economical processes and technologies for the lignocellulolytic enzyme production. In this study, the improvement of cellulases and xylanases by Trichoderma reesei CCT-2768 production induced by pretreated carnauba straw with alkaline hydrogen peroxide (A-HP) was performed and its crude extract produced was applied in the enzymatic hydrolysis of sugarcane bagasse. Herein, three conditions were carried out consisting of changing solid loading, pretreatment time, and hydrogen peroxide concentration. The FPase, CMCase, xylanase, and β-glucosidase activities of produced crude extracts were measured. Pretreated carnauba straw had a higher production of total cellulase (2.4 U/g dry substrate) and xylanase (172 U/g dry substrate) enzymes. The low cellulases (8.0 U/g dry substrate) and high xylanase charges (544 U/g dry substrate) present in the produced extract and applied into pretreated sugarcane bagasse hydrolysis allowed a hydrolysis efficiency of 86.96%. The in situ lignocellulolytic enzyme production can represent a relevant advance in the future in overall cost reducing enzymatic hydrolysis process of lignocellulosic materialsArtigo Use of plasmids for expression of proteins from the genus Leishmania in Escherichia coli: current state and perspectives(Springer-Verlag GmbH Germany, 2020-03-25) Santos, Everaldo Silvino dos; Ribeiro, Vitor Troccoli; Leitão, Ana Laura Oliveira de Sá; Vasconcelos, Luan Tales Costa de Paiva; Oliveira Filho, Marcos Antônio; Martins, Daniella Regina Arantes; Sousa Júnior, Francisco Canindé deLeishmaniosis is caused by the protozoa of the genus Leishmania with a wide spectrum of clinical and epidemiological manifestations which are characterized into four clinical groups: cutaneous, mucocutaneous, diffuse cutaneous, and visceral. American visceral leishmaniosis (AVL) or visceral leishmaniosis (VL) has been known as the most severe form of the disease. However, despite the growing number of people exposed to the infection risk and the great effort done by the scientific community worldwide to significantly increase the knowledge about these diseases, there is no vaccine capable of preventing VL in humans. In this short review, we present some of the plasmids used for the expression of recombinant protein by Escherichia coli strains used mainly for the second generation of vaccines for leishmaniosis. It can be emphasized that currently, these vectors and hosts play an important role in developing vaccine strategies against the disease. Indeed, use of the E. coli BL21 (DE) strain is remarkable mainly due to its characteristics for being a stable protein producer as well as the use of histidine tags for antigen purification