Navegando por Autor "Menezes, Yamara Arruda Silva de"
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Tese Avaliação estrutural e atividades antiproliferativa, antiviral, antiparasitária e antibacteriana dos peptídeos Stigmurina e TsAP-2 presentes na peçonha do escorpião Tityus stigmurus(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2020-12-17) Silva, Alessandra Daniele da; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; ; http://lattes.cnpq.br/2929963416385218; ; http://lattes.cnpq.br/1245062709759151; Cilli, Eduardo Maffud; ; http://lattes.cnpq.br/9424346762460416; Sousa Júnior, Francisco Canindé de; ; http://lattes.cnpq.br/3721560802857426; Araújo, Josélio Maria Galvão de; ; http://lattes.cnpq.br/6430774978643765; Menezes, Yamara Arruda Silva de; ; http://lattes.cnpq.br/7170864281352930A resistência a fármacos convencionais em doenças de origem infecciosa e neoplásica consiste em um grave problema de saúde pública mundial, apresentando elevada morbidade e mortalidade, levando a incessante busca por novas moléculas terapêuticas em diferentes fontes naturais. Nesse contexto, a peçonha de escorpiões constitui um rico arsenal de moléculas bioativas, sendo os peptídeos sem pontes dissulfetos (PSPDs) alvo de estudos devido as suas ações multifuncionais. Stigmurina (FFSLIPSLVGGLISAFK-NH2, 1795,2 Da) e TsAP-2 (FLGMIPGLIGGLISAFK-NH2, 1733,2 Da) são PSPDs identificados no transcriptoma da glândula de peçonha do escorpião Tityus stigmurus. Considerando a ação multifuncional de PSPDs, neste estudo foi elucidado a estrutura tridimensional da Stigmurina por ressonância magnética nuclear e avaliadas as atividades antiproliferativa, imunomoduladora, antiparasitária, antiviral, antioxidante e antibiofilme dos peptídeos sintéticos Stigmurina e TsAP-2. Os efeitos cicatrizante e antibiótico de ambos os peptídeos foram avaliados no modelo de infecção bacteriana de feridas in vivo, bem como expandido o potencial antibacteriano in vitro do TsAP-2. Stigmurina em trifluoroetanol: água (40:60%) apresentou uma conformação randômica na região N-terminal, com uma estrutura helicoidal a partir do sétimo resíduo de aminoácido, sendo o primeiro PSPD antimicrobiano presente na peçonha de escorpiões do gênero Tityus com estrutura tridimensional elucidada. Stigmurina e TsAP-2 revelaram ação antiproliferativa sobre as células neoplásicas em concentração não tóxica para célula normal, modulando a liberação de nitrito em macrófagos murinos estimulados por lipopolissacarídeo. Stigmurina e TsAP-2 não demonstraram efeito leishmanicida sobre a forma amastigota de Leishmania braziliensis. No entanto, o TsAP-2 revelou uma elevada ação tripanocida sobre as formas epimastigota e tripomastigota de Trypanosoma cruzi, e amplo espectro de ação antibacteriano em microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos. Um efeito protetor nas células epiteliais renais de primatas contra a infecção pelo vírus do Zika foi demonstrado no ensaio de pré-tratamento com ambos os peptídeos, revelando uma elevada ação virucida sobre o vírus do herpes simples tipo 1, com atividade antiviral no ensaio de pós-infecção. Além disso, Stigmurina e TsAP-2 foram capazes de sequestrar o radical hidroxila in vitro na concentração de 10 µM e 5 µM, respectivamente, reduzindo sua ação em concentrações elevadas, sugerindo a formação de aglomerados. Ambos os peptídeos demonstraram atividade antibiofilme, bem como apresentaram ação antibacteriana no modelo de infecção de ferida de pele, aumentando a velocidade de retração da lesão, sugerindo a capacidade de indução do reparo tecidual. Na análise histológica, TsAP-2 promoveu o aumento da neovascularização e reepitelização, reduzindo a necrose na ferida cirúrgica. Os dados sugerem que Stigmurina e TsAP-2 constituem peptídeos multifuncionais promissores para utilização como protótipo na obtenção de novos agentes terapêuticos.Tese Caracterização proteômica e biológica da peçonha de escorpiões do gênero Tityus(2018-09-14) Menezes, Yamara Arruda Silva de; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; ; ; Souza, Gustavo Antonio de; ; Pena, Lindomar José; ; Monteiro, Norberto de Kassio Vieira; ; Moreira, Susana Margarida Gomes;Escorpiões do gênero Tityus pertencem a família Buthidae e são responsáveis pela maioria dos acidentes por envenenamentos no Brasil. O envenenamento geralmente é caracterizado por sintomas locais como dor, parestesia, edema e eritema, ocasionados por uma variedade de moléculas (peptídeos e proteínas tóxicas) presentes na peçonha de escorpiões. O estudo da composição tóxica da peçonha de escorpiões é importante no desenvolvimento de tratamentos para casos de escorpionismo. Adicionalmente, toxinas são moléculas que podem apresentar potencial aplicação farmacológica e biotecnológica. Nesse estudo, é apresentado a caracterização proteômica e funcional da peçonha dos escorpiões brasileiros Tityus stigmurus, Tityus neglectus e Tityus pusillus, espécies amplamente distribuídas na região Nordeste do país. T. stigmurus é reconhecido como o principal responsável pelos envenenamentos com importância médica na região Nordeste. Embora já tenham sido relatados estudos para essa espécie, um grande número de componentes da peçonha ainda permanece desconhecido. Tityus neglectus e Tityus pusillus não apresentam estudos de caracterização química ou biológica da peçonha. Nesse contexto, a caracterização proteômica da peçonha desses escorpiões foi realizada por proteômica bottom-up usando cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas em tandem (LC-MS/MS) utilizando LTQ (“Linear Quadrupole Ion Trap”) Orbitrap Velos. A pesquisa de correspondência de espectro peptídico (PSM) foi realizada usando a plataforma PatternLab, e o sequenciamento de novo usando PEAKS Studio 8.0. Os bancos de dados contendo todas as entradas de proteínas para a ordem Scorpiones foram provenientes dos bancos UniProtKB (UniPro Knowledgebase) e NCBI (National Center for Biotechnology Information), e a quantificação de proteínas foi realizada utilizando o fator de abundância espectral (NSAF). Para a caracterização biológica e funcional foram realizados ensaios enzimáticos como fosfolipase A2, hialuronidase e fibrinogenolítico, testes de tempo de protrombina (TP) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa), atividade antimicrobiana, western blot, ensaios de viabilidade celular, produção de óxido nítrico (NO), determinação de letalidade e avaliação dos efeitos do envenenamento in vivo. As análises do proteoma para T. stigmurus revelaram a presença de 2 novas famílias de toxinas, serina proteases e fosfolipases A2, descritas pela primeira vez nesta peçonha. Os peptídeos moduladores de canais iônicos respondem por aproximadamente 70% dos peptídeos identificados, delineando a importância das neurotoxinas. Nas peçonhas de T. neglectus e T. pusillus foram identificadas famílias de proteínas como NaTx, KTx, CRISPs, AMPs, hipotensinas, inibidores do tipo serpina, serina proteases, metaloproteases, fosfolipases A2 e hialuronidases. As três peçonhas apresentaram atividade hialuronidásica e fibrinogenolítica, esta última com a participação proeminente de enzimas da classe metaloprotease. A atividade antimicrobiana não foi positiva, e a ação de fosfolipases foi detectada apenas na peçonha de T. neglectus. Atividade citotóxica foi verificada em células embrionárias de rim humano (Hek) para as peçonhas de T. stigmurus e T. neglectus. T. neglectus ainda demonstrou citotoxicidade para células de macrófagos (RAW 264.7) e fibroblastos (3T3) de camundongos, bem como efeito modulador da produção de NO. A peçonha de T. stigmurus mostrou alta toxicidade para camundongos BALB/c (DL50 = 0,575 mg/kg) e os efeitos do envenenamento foram descritos. Os testes biológicos associados a tecnologia de análise proteômica contribuíram para uma melhor elucidação da composição e caracterização da peçonha de T. stigmurus. A abordagem apresentada nesse estudo compreendeu a descrição mais completa do repertório molecular para o escorpião T. stigmurus que, conjuntamente a T. neglectus e T. pusillus, constituem fontes de moléculas com potencial aplicação farmacológica e/ou biotecnológica.Dissertação Extração, caracterização e atividades biológicas de proteínas da espécie cnidoscolus urens (L.) Arthur(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-07-04) Menezes, Yamara Arruda Silva de; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; ; http://lattes.cnpq.br/2929963416385218; ; http://lattes.cnpq.br/7170864281352930; Assis, Cristiane Fernandes de; ; http://lattes.cnpq.br/0034694007210837; Pereira, Wogelsanger Oliveira; ; http://lattes.cnpq.br/4661963400736302A extração, caracterização química e estrutural de uma grande diversidade de compostos derivados de plantas tem sido uma fonte importante de moléculas bioativas. Diversas proteases têm sido isoladas no reino vegetal, com inúmeras aplicações farmacológicas e biotecnológicas. Dentre as proteases isoladas de plantas, estão as fibrinogenolíticas, com relevante aplicação no tratamento de distúrbios na cascata da coagulação, além do uso em potencial como ferramenta em laboratórios clínicos. Neste trabalho, além de avaliar os efeitos do extrato protéico de Cnidoscolus urens (L.) Arthur, pertencente à família Euphorbiaceae, na cascata de coagulação, também se investigou a presença de atividade antimicrobiana e caracterizou a atividade proteolítica detectada neste extrato, tendo como objetivo determinar sua potencial aplicação farmacológica e biotecnológica. Desse modo, extratos protéicos brutos obtidos das folhas de C. urens em tampão Tris-HCl 0,05M, NaCl 0,15M, pH 7,5, foram precipitados em diferentes concentrações de acetona, e avaliados quanto a presença de atividade proteolítica em azocaseína e fibrinogênio. A fração mais ativa (F1.0) nestes testes foi escolhida para realização de avaliação de atividade biológica e caracterização bioquímica. As cadeias Aα e Bβ do fibrinogênio foram completamente clivadas na concentração de 0.18 μg/μL de proteína da fração em 4 minutos. A atividade fibrinogenolítica apresentou inibição total em presença de E-64 e parcial em presença de EDTA. A fração demonstrou atividade coagulante sobre o plasma e reduziu o tempo de tromboplastina parcial ativada, indicando atuar sobre os fatores da via intrínseca e comum da coagulação, não exercendo efeitos sobre o tempo de protrombina. A atividade fibrinolítica sobre o coágulo de plasma foi detectado apenas em SDS-PAGE em concentrações elevadas da fração, e apesar da atividade fibrin(ogen)olítica, não foi observada atividade defibrinogenante in vivo. Apesar de várias proteases de plantas e animais peçonhentos serem classicamente tóxicas, a fracção F1.0 não expressou atividade hemorrágica nem hemolítica. A fração F1.0 também não demonstrou atividade antimicrobiana. Na avaliação da atividade proteolítica sobre a azocaseína, o pH ótimo de reação foi 5.0, e a temperatura ótima igual a 60ºC. A atividade enzimática demonstrou ser sensível à presença dos sais testados, com inibição para todos os compostos. O tensoativo triton não influenciou a atividade enzimática, porém o tween-20 e SDS inibiram tal atividade. Em presença de agentes redutores ocorreu aumento da atividade enzimática, característica típica de enzimas pertencentes à classe das cisteíno proteases. Diversas bandas protéicas com atividade proteolítica foram detectadas em zimograma, na região de elevada massa molecular, que foram inibidas por E-64. Neste trabalho, foi revelado que C. urens apresenta fração enriquecida com cisteíno-proteases que apresentam atividade fibrinogenolítica e procoagulante, que podem ser isoladas, com potencial aplicação no tratamento de distúrbios hemorrágicos, como trombolítico e em laboratório clínico