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Avaliação das taxas de sucesso e segurança das técnicas empregadas em tratamento de reprodução humana assistida
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-07-14) Almeida, Layla Paiva de; Morais, Danielle Barbosa; http://lattes.cnpq.br/1768180848750009; Nascimento, Renata Swany Soares do; http://lattes.cnpq.br/6385207984942429; Ferreira, Délis de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/7235544487334911
O emprego das técnicas de Reprodução Humana Assistida (RHA) vem crescendo cada vez mais, uma vez que houve, nos últimos anos, popularização do planejamento familiar, maior conhecimento acerca das possibilidades de tratamento de RHA, e o incremento de pesquisas que demonstraram o sucesso dos procedimentos. Embora consideradas seguras, essas técnicas podem apresentar uma porcentagem de falha resultando em abortos ou malformações congênitas, e estas alterações constituem um vasto campo a ser investigado. Neste sentido, o objetivo desse estudo foi avaliar a saúde da prole obtida após realização de tratamento de RHA, no Centro de Reprodução Assistida (CRA) da Maternidade Escola Januário Cicco, Natal-RN. Mediante aprovação pelo Comitê de Ética em Pesquisa da UFRN, foram analisados os prontuários de pacientes que consentiram no acesso aos dados referente ao atendimento por elas recebido no CRA. Foram coletados dados biométricos e clínicos, tais como índice de massa corporal (IMC), idade, fator de infertilidade conjugal presente, técnica de RHA empregada, tipo de transferência embrionária realizada e características dos oócitos e embriões. Obteve se um total de 13 variáveis, as quais foram investigadas quanto à existência ou não de associação com o aparecimento de gestações gemelares, abortamentos ou malformações congênitas, pelo teste do qui-quadrado ou por regressão logística. Destas, 12 não apresentaram associação significativa com gestação gemelar ou abortamento, as quais foram: o tipo de contracepção utilizada; o IMC; a idade materna; bem como o tipo de gestação obtida (única ou gemelar); o histórico de abortamento; o número de oócitos e embriões obtidos; a técnica de RHA utilizada; o tipo, a presença e o fator de infertilidade. Em contrapartida, o tipo de transferência embrionária realizada demonstrou associação significativa com o aparecimento de abortamento, na qual a transferência a fresco teve maior número de abortos como resultado. Dos prontuários que compuseram a amostra deste estudo, em apenas um foi relatada a ocorrência de malformação congênita. Estes dados confirmam a segurança dos tratamentos de RHA quanto à ocorrência de distúrbios na prole.
Avaliação do potencial toxicológico e teratogênico do extrato aquoso das cascas do cajueiro (Anacardium occidenale) utilizando-se peixe zebra (Danio rerio) como modelo experimental
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2020-08-18) Ferreira, Délis de Oliveira; Morais, Danielle Barbosa; Luchiari, Ana Carolina; ; ; ; Langassner, Silvana Maria Zucolotto; ; Silva, Priscila Fernandes;
O cajueiro (Anacardium occidentale) é um vegetal nativo da região Nordeste do Brasil comumente utilizado na medicina popular devido às suas propriedades anti-inflamatória, adstringente e cicatrizante. No entanto, é utilizado também para indução clandestina ao aborto, não havendo evidências científicas quanto aos efeitos relacionados ao seu uso durante a gestação, sendo escassas também as informações sobre a composição química de extratos aquosos. Considerando-se que o uso de extratos vegetais no período gestacional pode ocasionar toxicidade tanto materna quanto fetal, objetivou-se neste estudo caracterizar fitoquimicamente o extrato aquoso das cascas de A. occidentale, além de avaliar os seus possíveis efeitos tóxicos e teratogênicos, utilizando-se o peixe zebra (Danio rerio) como modelo experimental. Os testes de toxicidade aguda em embriões e fêmeas de D. rerio seguiram as recomendações da Organização para a Cooperação e Desenvolvimento Econômico. Procedeu-se a preparação do extrato vegetal e caracterização fitoquímica por Cromatografia Líquida Acoplada à Espectrometria de Massas, seguido de testes para determinar a Dose Letal Mediana nos embriões e fêmeas, testes de comportamento, avaliação de deformações no desenvolvimento, teste de anormalidades no DNA, estimativa da taxa de fertilidade nas progenitoras, e análises microscópicas dos embriões e larvas expostos ao extrato aquoso. Os resultados da caracterização fitoquímica indicaram a presença de compostos fenólicos, como derivados ácidos fenólicos e taninos. Os testes de toxicidade sugerem efeito tóxico em fêmeas adultas com alteração no seu perfil comportamental e uma tendência a diminuição de alterações à nível de DNA comparado com o grupo controle, não sendo verificado efeito do extrato na fertilidade. Nos embriões expostos às 6, 12, 24 e 48 horas pós fertilização à doses subletais do extrato, verificou-se poucas alterações teratogênicas. Entretanto, quando expostos a doses mais elevadas, observou-se deformação na membrana coriônica e retardo na eclosão, indicando efeitos tóxicos do extrato. Embora os principais metabólitos especializados encontrados nessa espécie apresentem atividade antioxidante, sabe-se que extratos são misturas complexas de substâncias químicas. Contudo, pôde-se concluir que o extrato aquoso das cascas de A. occidentale além de apresentar indícios de teratogenicidade ao peixe zebra em doses subletais, apresentou evidências de toxicidade em doses mais elevadas, tanto para embriões quanto em fêmeas adultas.
Caracterização de marcadores moleculares com potencial para triagem seminal: vírus e doenças metabólicas
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-11-10) Albuquerque, Beatriz Helena Dantas Rodrigues de; Lanza, Daniel Carlos Ferreira; https://orcid.org/0000-0002-1341-4814; http://lattes.cnpq.br/6851351991421755; https://orcid.org/0000-0002-0140-9356; http://lattes.cnpq.br/4873609583978445; Morais, Danielle Barbosa; https://orcid.org/0000-0003-3277-1857; http://lattes.cnpq.br/1297766314966746; Campos, Julliane Tamara Araujo de Melo; https://orcid.org/0000-0002-8501-5521; http://lattes.cnpq.br/3504274193684794; Mota, Kyvia Bezerra; http://lattes.cnpq.br/6175130067753726
A infertilidade é uma condição que afeta milhões de casais em idade reprodutiva em todo o mundo, envolvendo tanto o sistema reprodutor masculino quanto o feminino. Embora os fatores masculinos contribuam para metade dos casos de infertilidade, uma parcela significativa desses casos permanece sem uma causa identificada. Isso sugere a possibilidade da existência de fatores etiológicos não caracterizados, que não são adequadamente avaliados pelas atuais investigações diagnósticas. Nesse contexto, o estudo realizado teve como objetivo a caracterização de marcadores moleculares e vírus associados à saúde masculina e à qualidade do sêmen. O primeiro capítulo apresenta uma revisão abrangente do viroma seminal humano. Foi observado que o número de pesquisas que investigam vírus que ocorrem no sêmen humano tem aumentado e, até o momento, esses estudos têm sido em sua maioria prospectivos ou relacionados a achados clínicos específicos. Através da análise conjunta de todos esses artigos, foram listados os vírus relacionados à piora dos parâmetros seminais e proposto um novo painel com os principais vírus já descritos que possivelmente afetam a fertilidade e a saúde masculina. Este painel pode auxiliar na avaliação da qualidade do sêmen e servir como ferramenta de investigação em casos de infertilidade. O segundo capítulo, teve por objetivo identificar genes relevantes para o diagnóstico e a detecção precoce de distúrbios metabólicos hereditários, usando bancos de dados renomados, como OMIM e Orphanet. Foram identificados 228 genes associados a distúrbios metabólicos, referidos aqui como GADM. Notavelmente, esses genes se distribuem por quase todos os cromossomos, com uma ausência notável no cromossomo Y. Em termos de variantes genéticas, o gene APOB destacou-se com o maior número registrado. Aprofundando na prevalência de fenótipos, os distúrbios do metabolismo dos aminoácidos emergiram como a categoria mais prevalente. Também foi observado que o padrão autossômico recessivo era dominante em termos de herança. Através de uma análise meticulosa de interações proteína-proteína, revelou-se uma rede intricada que liga genes de fenótipos altamente prevalentes a outros menos frequentes. Esse mapeamento tem implicações significativas, pois indica os genes-chave para futuras investigações. A partir desta pesquisa, foram estabelecidos painéis direcionados de genes primários para a triagem e diagnóstico de doenças metabólicas em variados contextos. Este estudo reforça a necessidade de integrar dados de interações proteína-proteína para iluminar os mecanismos subjacentes de fenótipos metabólicos e potencialmente descobrir novos alvos terapêuticos ou biomarcadores para estas condições. Em suma, os resultados desta dissertação contribuem para o avanço das estratégias de diagnóstico da infertilidade do fator masculino, bem como para uma compreensão mais substancial para o aconselhamento genético e reprodutivo das doenças metabólicas
Desenvolvimento oocitário e embrionário de mulheres submetidas a tratamento de reprodução assistida e suas relações com a idade E, hábitos de vida materno e fator masculino
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-12-12) Souza, Gabriel Ribeiro de; Morais, Danielle Barbosa; http://lattes.cnpq.br/1768180848750009; http://lattes.cnpq.br/1449973527331259; Silva, Uaska Bezerra e; http://lattes.cnpq.br/9309987119591098
A infertilidade é um problema de saúde pública que afeta diversos casais ao redor do mundo. Inúmeros fatores podem alterar a quantidade e qualidade dos oócitos e também dos embriões produzidos em tratamentos de reprodução humana assistida, com destaque para a idade e obesidade na mulher, bem como para a presença de infertilidade no homem. Neste sentido, objetivou-se realizar uma análise observacional descritiva, transversal e retrospectiva, das relações entre o desenvolvimento oocitário e embrionário de pacientes submetidas a tratamento de reprodução assistida no Centro de Reprodução Assistida da Maternidade Escola Januário Cicco (CRA/MEJC), Natal/RN, entre 2013 e 2018, com idade e hábitos de vida femininos, e infertilidade por fator masculino. Para a idade das pacientes, foram encontradas correlações significativas com o número de oócitos captados, maduros e de blastocistos. Já para o índice de massa corporal (IMC), as correlações significativas foram com o número de oócitos descartados e taxa de clivagem. Em conjunto, idade e IMC foram estatisticamente significativos para prever o número de oócitos em grau 1 (vesícula germinativa) e de blastocistos. Em relação à presença de fator masculino e sua influência sobre o desenvolvimento embrionário, foram encontradas diferenças significativas para número de blastocistos e índices de betaHCG positivo. Os resultados deste estudo sugerem que a idade e os hábitos de vida da mulher podem afetar negativamente a fertilidade feminina, comprometendo o desenvolvimento oocitário e embrionário. Quando há presença de infertilidade por fator masculino, o desenvolvimento embrionário é afetado refletindo em um número menor de embriões que chegam ao estágio de blastocisto e consequentemente menores índices de beta-HCG positivo.
Efeito do ácido ascórbico sobre a espermatogênese de camundongos com distrofia muscular de Duchenne
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2015-06-29) Braz, Janine Karla França da Silva; Moura, Carlos Eduardo Bezerra de; Morais, Danielle Barbosa; ; http://lattes.cnpq.br/1768180848750009; ; http://lattes.cnpq.br/4717410137206021; ; http://lattes.cnpq.br/8667360972582108; Bezerra, Marcelo Barbosa; ; http://lattes.cnpq.br/4564055986199041; Morais, Danielle Barbosa; ; http://lattes.cnpq.br/1768180848750009
Objetivou-se avaliar as alterações na espermatogênese provocadas pela Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) e o efeito do tratamento com ácido ascórbico na prevenção dessas injúrias. Neste trabalho foram utilizados 24 camundongos, sendo 12 linhagem C57BL/10 (não-distróficos) e 12 C57BL/10Mdx (distróficos) divididos em seis grupos com 4 animais cada (C30 = Controle de 30 dias; D30 = Distrófico com 30 dias; C60 = Controle com 60 dias; D60 = Distrófico com 60 dias; CS = Controle com 60 dias suplementados com ácido ascórbico e; DS60 = Distrófico com 60 dias suplementados com ácido ascórbico. Os animais dos grupos C30 e D30 foram eutanasiados aos trinta dias de idade, enquanto que os animais dos demais grupos aos 60 dias de idade. A suplementação com ácido ascórbico foi ministrada na água na dosagem de 0,005g/dia durante 30 dias. Após eutanasiados, os testículos (direito e esquerdo) foram coletados, imediatamente, pesados e seccionados transversalmente, fixados em solução de Karnovysky, incluídos em resina histológica (análises morfológicas e morfométricas), submetidos a análise ultraestrutural e submentidos técnica de imunohistoquímica para caspase-3. Houve aumento significativo no percentual de túnica própria em D30 em relação a C30 e D60. As análises ultraestruturais indicaram indícios de apoptose mitocondrial das células de Sertoli que podem reduzir a eficiência espermática em CS60 e DS60. Verificou-se maior densidade de volume das células apoptóticas postivas para Caspase - 3 em D30 versus C30 e DS60 em relação a CS60. . Houve acentuada hipertrofia de células de Leydig entre D30 e D60. No entanto, com a suplementação observou-se reversão dessa alteração em DS60. Na ultraestrutura das células de Leydig observou-se a presença precoce de vesículas lipídicas no grupo distrófico pré-púbere (D30). Dessa forma, a DMD afetou a organização dos túbulos seminíferos e intertúbulos, no entanto, a suplementação de ácido ascórbico., nas condições experimentais utilizadas para o tratamento da DMD foi suficiente apenas para reduzir a hipertofia das células de Leydig.
Estudo comparativo da morfologia dos intestinos delgado e grosso do morcego frugívoro Artibeus planirostris (Chiroptera, Phyllostomidae, Stenodermatinae) e do morcego hematófago Diphylla ecaudata (Chiroptera, Phyllostomidae, Desmodontinae)
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2018-12-10) Silva, Carlos Henrique de Souza; Morais, Danielle Barbosa; Farias, Naisandra Bezerra da Silva; Sartori, Sirlene Souza Rodrigues
Apesar de estarem associados à transmissão do vírus da raiva, os morcegos também são reconhecidos por terem os mais diversos hábitos alimentares dentre os mamíferos, especialmente a família Phyllostomidae. Sendo assim, especializações a hábitos alimentares tão diversos exigem adaptações morfológicas nos órgãos digestivos, de modo que conhecer a sua morfologia permite uma melhor compreensão sobre a fisiologia digestiva destes animais e fornece subsídios para medidas de conservação. Porém, o frugívoro Artibeus planirostris e o hematófago Diphylla ecaudata carecem de informações sobre a morfologia completa do trato digestivo. Deste modo, este estudo objetivou analisar e comparar os aspectos morfológicos e morfométricos de seus intestinos delgado e grosso. Para isto, 5 animais de cada espécie foram capturados, eutanásiados, e seus intestinos foram removidos, processados e corados com Hematoxilina-Eosina (HE) e com o Ácido Periódico de Schiff (PAS). Foram obtidas medidas morfométricas das estruturas teciduais destes órgãos, e os resultados obtidos foram submetidos ao teste de normalidade (Shapiro- Wilk) e comparados entre as espécies ao teste t, considerando-se um nível de significância de 5% (p<0,05). Macroscopicamente não houve distinção entre os intestinos delgado e grosso. Além disso, poucos aspectos permitiram distinguir as três regiões do intestino delgado para ambas as espécies. A. planirostris apresentou vilosidades com altura aproximada de 1.231 µm, poucas glândulas de Brunner no duodeno e camada muscular externa mais espessa que a interna. O intestino grosso apresentou pregas circulares com muitas glândulas intestinais, significando uma intensa atividade de absorção de água. Já D. ecaudata revelou uma menor altura de vilosidades (527 µm). O intestino grosso, por sua vez, possuiu menor quantidade de glândulas intestinais e, em ambos os intestinos, a parede apresentou-se significativamente mais delgada quando comparada a A. planirostris, indicando uma adaptação ao hábito hematófago. Portanto, houveram diferenças marcantes entre os intestinos destas duas espécies, reflexo direto de adaptações às diferentes dietas, o que contribui para o sucesso evolutivo dos morcegos, permitindo-lhes reduzir o tempo de retenção do alimento no tubo digestório, diminuindo o peso corporal durante o voo.
Estudo do polimorfismo de 14 pb do Gene HLA-G em mulheres com infertilidade
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-12-13) Lima, Maysa Eunice Grigorio Bezerra; Freitas, Janaína Cristiana de Oliveira Crispim; http://lattes.cnpq.br/2644540835478572; Morais, Danielle Barbosa; http://lattes.cnpq.br/1768180848750009; Aderaldo, Janaína Ferreira; http://lattes.cnpq.br/4449032685703603
O Antígeno Leucocitário Humano - G (HLA-G) está envolvido no processo de gestação e modula a implantação do embrião semi-alogênico a partir de processos que envolvem tolerância imunológica na interface materno-fetal. O objetivo do presente estudo foi avaliar o polimorfismo de 14pb de INS/DEL da região 3’ não traduzida (3’ UTR) pertencente ao éxon 8 do gene HLA-G em mulheres com infertilidade submetidas a Fertilização in Vitro (FIV). As pacientes submetidas a FIV foram selecionadas para realizarem a punção venosa para extração de DNA genômico e realização do polimorfismo gênico do 14pb do gene HLA-G. A coleta por punção venosa foi obtido de 35 mulheres com diagnóstico de infertilidade atendidas no Centro de Reprodução Assistida do Hospital de Ensino. Todas as mulheres pesquisadas assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE). O método para amplificação do polimorfismo foi a Nested-PCR em gel de agarose 3%. Para ambos os SNPs, as condições de PCR foram padronizadas utilizando-se o MyCycler™ Thermal Cycler (Bio-rad, USA). Em relação ao genótipo heterozigoto (INS/DEL), os dados mostraram que as pacientes que apresentaram infertilidade tinham uma maior frequência desses genótipos quando comparados aos controles saudáveis, contudo esses dados não foram estatisticamente significantes (P>0,05). Em relação aos alelos ins/del (rs66554220) também não foram encontrados associação entre o gene de 14pb do gene HLA-G em mulheres com infertilidade quando comparadas ao controle saudável.
Estudo do processo espermatogênico nos morcegos hematófagos Desmodus rotundus e Diphylla ecaudata (Chiroptera: Phyllostomidae)
(2018-06-11) Silva, Soráia Fonsêca Marinho da; Morais, Danielle Barbosa; ; ; Menezes, Danilo José Ayres de; ; Magalhães, Marcela dos Santos;
Os morcegos hematófagos constituem os únicos mamíferos que se alimentam exclusivamente do sangue de mamíferos ou aves. Devido a esta particularidade e sua relação com a transmissão do vírus da raiva, despertam grande curiosidade, sendo necessário o desenvolvimento de medidas conservacionistas que permitam seu controle racional; o que requer o conhecimento de sua reprodução. Objetivamos, portanto, descrever a atividade testicular e a espermatogênese das espécies Desmodus rotundus e Diphylla ecaudata. Após eutanásia, seus testículos foram processados histologicamente para inclusão em historesina para análises morfológicas e morfométricas sob microscopia de luz, em resina Spurr para análise da ultraestrutura celular sob microscopia eletrônica de transmissão, bem como em parafina histológica para análise imuno-histoquímica da expressão de receptores para andrógeno, aromatase, FGF2 e BCL-2. D. rotundus apresentou percentual de epitélio seminífero, número de células de Leydig por grama de testículo e população de células de Sertoli e de espermatogônias do tipo A significativamente maiores na estação chuvosa, enquanto o índice mitótico, índice de células de Sertoli e rendimento geral da espermatogênese foram maiores na estação seca. D. ecaudata apresentou índice gonadossomático de 0,49% e comprimento de túbulos seminíferos por grama de testículo de 32,20 m. As fases pré-meiótica, meiótica e pós-meiótica representaram, respectivamente, 56,20%, 9,30% e 34,50% do seu ciclo do epitélio seminífero. A ultraestrutura da espermatogênese de ambas as espécies foi semelhante ao descrito nos demais mamíferos, e o perforatorium de acordo com nossas observações está ausente em seus espermatozoides. A análise imunohistoquímica revelou atividade da enzima aromatase nas células de Sertoli, de Leydig, espermatócitos e espermátides, e a presença de receptores de andrógeno nas células de Sertoli e de Leydig. A atividade do FGF2 foi mais evidente nos espermatócitos primários em zigóteno e em paquíteno, bem como em espermatócitos secundários e espermátides. Já a atividade da proteína pré-apoptótica BCL-2 foi mais evidente nos espermatócitos primários em paquíteno e espermátides arredondadas. Conclui-se que D. rotundus e D. ecaudata apresentaram padrão testicular semelhante ao de outros mamíferos, e características comuns às descritas em outras espécies de morcegos. O estudo sazonal da espermatogênese de D. rotundus sugere uma maior produção de espermatozoides na estação chuvosa na Caatinga nordestina. Este estudo constitui ainda o primeiro passo para o conhecimento da reprodução de D. ecaudata, sendo esta a primeira descrição acerca de sua espermatogênese.
Fertilidade masculina: mercado na América Latina e desenvolvimento de sistemas para detecção de patógenos no sêmen humano
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2024-04-15) Oliveira, Maryana Thalyta Ferreira Câmara de; Lanza, Daniel Carlos Ferreira; https://orcid.org/0000-0002-1341-4814; http://lattes.cnpq.br/6851351991421755; http://lattes.cnpq.br/8554649433942208; Silva Júnior, Edilson Dantas da; Morais, Danielle Barbosa; Aderaldo, Janaina Ferreira; Mota, Kyvia Bezerra
O tratamento da infertilidade tornou-se um grande negócio em todo o mundo. Uma especialidade médica que começou como uma atividade de pesquisa acadêmica e inovadora evoluiu para um serviço industrial e comercial que se expandiu muito além do tratamento. Os serviços de fertilidade podem faturar até US $31,59 bilhões em 2029 e o uso das tecnologias em reprodução assistida (TRA) tornou-se um negócio comercial próspero dentro dos serviços de fertilidade. Notou-se que o mercado de fertilidade tem presenciado crescimento expressivo tanto no Brasil quanto na América Latina. Especificamente no Brasil, observa-se um crescimento ao longo dos últimos anos, abrigando aproximadamente 40% das clínicas de reprodução assistida da América Latina e com receita girando em torno de R$1,3 bilhão. Estima-se que entre 2021 e 2025, cerca de 77.588 pacientes com até 35 anos serão tratados via TRA no país. Paralelamente, percebe-se que tanto políticas públicas quanto iniciativas do setor privado voltadas para fertilidade aumentam, sublinhando a relevância da fertilidade na vida das pessoas. O mercado de fertilidade masculina também tem apresentado um crescimento significativo à medida que se expande o mercado da fertilidade e reprodução assistida. De acordo com a avaliação dos relatórios de mercado, estima-se que o comércio global relacionado à fertilidade masculina tenha um valor expressivo em bilhões de dólares e apontam para a promessa de que alcance mais de US$ 6 bilhões até o ano de 2027. Foi a partir de estudos no sêmen que o número de evidências de que diferentes espécies de microrganismos podem impactar a qualidade seminal tem aumentado nos últimos anos. Alguns dos microrganismos já detectados no sêmen humano, incluem vírus e bactérias que possivelmente apresentam algum tipo de relação com a fertilidade, causando danos a órgãos e células por meio de mediadores inflamatórios. Nesse contexto, esta dissertação tem como objetivo caracterizar os principais tópicos relacionados ao mercado da fertilidade e reprodução assistida na América Latina e Brasil e enfatizar o crescimento do mercado da fertilidade masculina e os desafios enfrentados para o diagnóstico da infertilidade em homens com duas revisões de literatura. Além disso, foram desenvolvidos e validados in silico três painéis PCR-Multiplex para detecção dos principais patógenos que tenham importância clínica já descrita. Os sistemas foram obtidos através do alinhamento de sequências e desenho de primers para identificação de 13 patógenos em amostras de sêmen de pacientes com histórico de infertilidade. Essas descobertas ampliam a perspectiva atual acerca da infertilidade idiopática e indicam direções futuras para investigações, como a análise do papel dos microrganismos no sistema reprodutivo masculino. Todas as informações coletadas nesta dissertação contribuem para novas áreas de pesquisa nos âmbitos de mercado, melhoria de técnicas e diagnóstico de condições relacionadas à infertilidade masculina e saúde reprodutiva global.
Histomorfometria sazonal epididimária do morcego Artibeus planirostris (Chiroptera: Phyllostomidae)
(2016-12-12) Araújo, Rodrigo Serafim de; Morais, Danielle Barbosa; ; http://lattes.cnpq.br/1768180848750009; ; http://lattes.cnpq.br/3656817593631764; Moura, Carlos Eduardo Bezerra de; ; http://lattes.cnpq.br/4717410137206021; Matta, Sérgio Luis Pinto da; ; http://lattes.cnpq.br/1371023205737245
Considerando-se a importância ecológica do morcego Artibeus planirostris e a importância da avaliação epididimária para o entendimento de sua função reprodutiva, objetivou-se compreender os parâmetros reprodutivos desta espécie a partir da análise morfológica e morfométrica do epidídimo. Foram utilizados 16 animais adultos, coletados durante as estações seca (n=08) e chuvosa (n=08) de 2014. As capturas foram realizadas na cidade de Natal-RN (latitude 5°50’33.9”S e longitude 35°12’07.6” W) (autorização SISBIO no 25233-1), utilizando-se redes de neblina. Após anestesia e eutanásia por perfusão transcardíaca, foi realizada a coleta dos epidídimos (autorização CEUA/UFRN no 009/2012), seguido de processamento histológico para inclusão em historesina e análises sob microscopia de luz. Análises morfométricas dos componentes do parênquima epididimário foram realizadas a partir da captura de imagens das lâminas histológicas, utilizando-se o software Image-Pro Plus. Os resultados foram submetidos à ANOVA, sendo as médias comparadas pelo teste t de Student ao nível de significância de 5%, seguido do pós-teste de Tukey. Nas duas estações analisadas, a avaliação morfológica do epidídimo revelou que o órgão apresentou-se dividido em 4 regiões principais: segmento inicial, cabeça, corpo e cauda. O parênquima apresentou-se composto predominantemente por túbulos epididimários, sustentados por tecido conjuntivo intertubular. Ao longo das três porções epididimárias os túbulos ocuparam 75,07±2,94% do parênquima na estação chuvosa e 67,23±2,44% na estação seca, sendo seus percentuais nas regiões da cabeça e corpo significativamente maiores na estação chuvosa em relação à estação seca. O restante do parênquima foi representado pela região intertubular, que apresentou redução proporcional nas mesmas regiões entre as estações. Os túbulos foram constituídos por epitélio pseudoestratificado cilíndrico com estereocílios, apoiado sobre uma túnica própria, e lúmen. O epitélio epididimário foi o principal componente do túbulo epididimário, sendo que na região da cauda seu percentual foi maior na estação seca (27,58±8,33%) em relação à chuvosa (17,79±4,33%). Este epitélio apresentou-se composto pelas células principais (PR), basais (BA), estreitas (ES), halo (HA), claras (CL) e apicais (AP), sendo que a primeira e a última apresentaram, respectivamente, maior e menor distribuição em todas as regiões epididimárias nas duas estações. Tanto na região da cabeça quanto da cauda, as células PR foram as mais predominantes no epitélio epididimário na estação seca em relação à estação chuvosa, enquanto as células BA foram mais predominantes na estação chuvosa, tanto na cabeça quanto na cauda. As células AP apresentaram maior distribuição na cabeça do epidídimo durante a estação chuvosa, enquanto as células ES apresentaram maior distribuição no corpo do epidídimo na estação seca, sendo seu registro nessa porção epididimária constituiu um achado novo. Observou-se aumento gradativo em diversos parâmetros da cabeça em direção à cauda, tais como o diâmetro dos túbulos epididimários, do lúmen e percentual com espermatozoides e da camada de células musculares lisas ao redor dos túbulos epididimários, contrastando com a diminuição na altura do epitélio. Muitos destes parâmetros apresentaram maiores valores na estação chuvosa em relação à estação seca. Conclui-se que o epidídimo de A. planirostris apresentou-se, de um modo geral, semelhante ao descrito para outros mamíferos, com destaque para as células estreitas, registradas pela primeira vez na região do corpo. Foram encontrados espermatozoides no lúmen dos túbulos epididimários nas duas estações avaliadas, especialmente na região da cauda, mostrando assim um padrão reprodutivo anual contínuo, com picos de reprodução na estação chuvosa.
Histomorfometria testicular e processo espermatogênico do morcego Artibeus planirostris (Chiroptera: Phyllostomidae)
(2016-12-14) Costa, Kadigna Carla Silva; Morais, Danielle Barbosa; ; http://lattes.cnpq.br/1768180848750009; ; http://lattes.cnpq.br/1180622552053420; Moura, Carlos Eduardo Bezerra de; ; http://lattes.cnpq.br/4717410137206021; Matta, Sérgio Luis Pinto da; ; http://lattes.cnpq.br/1371023205737245
Os morcegos atuam de diversas maneiras na regulação dos ecossistemas. Dentre seus representantes, Artibeus planirostris é uma espécie frugívora, que atua tanto como dispersora de sementes quanto como polinizadora. Diante da escassez de estudos sobre a biologia reprodutiva de morcegos, sobretudo em machos, e da carência de informações sobre a reprodução dos indivíduos da ordem quiróptera no Nordeste do Brasil, este estudo teve por objetivo quantificar o processo espermatogênico de A. planirostris, bem como sua variação sazonal, através de análises morfológicas e morfométricas dos testículos. Os animais foram coletados nos anos 2013 e 2014, entre as estações seca (n=10) e chuvosa (n=10), no campus central da Universidade Federal do Rio Grande do Norte (Natal-RN). Após eutanásia os testículos foram coletados e processados histologicamente para inclusão em historesina e analise sob microscopia de luz. As lâminas histológicas foram fotografadas e a morfometria foi realizada utilizando-se o software Image-Pro Plus. Os resultados obtidos quanto à morfometria e biometria foram comparados pelo teste de Kruskall Wallis ou pelo teste de Student, considerando-se um nível de significância de 5% (p<0,05). Considerando-se as duas estações, os animais apresentaram índice gonadossomático médio de 0,54%. Os túbulos seminíferos representaram cerca de 92% do parênquima testicular, sendo o restante representado pelo intertúbulo. Os túbulos seminíferos foram compostos por cerca de 27% de lúmen, 60% de epitélio seminífero e 4% de túnica própria. Dentre os parâmetros morfométricos analisados, apenas o lúmen apresentou variação significativa entre as estações, de modo que o maior percentual foi encontrado na estação chuvosa, com cerca de 29%. O diâmetro tubular e a altura do epitélio seminífero apresentaram médias de 142 μm e 43 μm, respectivamente. Obteve-se comprimento tubular médio por grama de testículo de 64,7 m e índice tubulossomático de 0,47 %. A população celular do epitélio seminífero mostrou-se composta por espermatogônias, espermatócitos primários na transição de pré-leptóteno para leptóteno, em zigóteno e em paquíteno, espermátides arredondadas e alongadas e células de Sertoli. Apenas a população de espermatócitos primários em pré-leptóteno/leptóteno apresentou variação entre as estações, com maiores valores na estação seca. Obteve-se índice mitótico anual de 14%, índice meiótico de 3%, rendimento geral da espermatogênese de 51 células e índice de células de Sertoli de 6 células. A análise da frequência dos estádios do ciclo do epitélio seminífero mostrou que os estádios mais e menos frequentes foram, respectivamente, o 1 e o 6. Os estádios 1 e 4 variaram estatisticamente entre as estações, sendo que o estádio 1 foi mais frequente na estação chuvosa e o estádio 4 foi mais frequente na estação seca. O intertúbulo foi composto predominantemente por células de Leydig, as quais apresentaram maiores percentuais no parênquima testicular na estação seca, assim como a proporção volumétrica dos vasos linfáticos. Os demais componentes intertubulares não variaram estatisticamente entre as estações, bem como os parâmetros analisados quanto à morfometria das células de Leydig. Estas células apresentaram número por grama de testículo com média anual de 5,63x107células, e índice Leydigossomático de 0,005%. Observou-se grande investimento em túbulos seminíferos, com baixa capacidade de suporte pelas células de Sertoli, e grande investimento em células de Leydig no parênquima testicular, sobretudo na estação seca, bem como na população de espermatócitos primários em pré-leptóteno/leptóteno indicando padrão espermatogênico anual contínuo no Nordeste do país em A. planirostris.
Identification of telocytes in dystrophic mice testis
(Instituto Israelita de Ensino e Pesquisa Albert Einstein, 2021) Gomes, Vilessa Lilian de Araújo; Braz, Janine Karla França da Silva; Martins, Gabriel Moura; Clebis, Naianne Kelly; Oliveira, Moacir Franco de; Morais, Danielle Barbosa; Moura, Carlos Eduardo Bezerra de
Telocyte (Tc) is a new type of classic interstitial cells, described by Popescu et al., in the human pancreas. Telocytes are found in several organs, including the human testis. They are long, thin cells , with small cell bodies, a nucleus containing heterochromatin and presence of mitochondria in the periphery, in addition to a scarcely evident nucleolus. They differ from other interstitial cells by their long moniliform cytoplasmic extensions, called telopodes (Tp), and are usually identified through their ultrastructure by transmission electron microscopy (TEM)
Infertilidade e reprodução assistida: mercado global, avaliação de tecnologias para seleção espermática e prospecção da microbiota seminal
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-07-29) Aderaldo, Janaina Ferreira; Lanza, Daniel Carlos Ferreira; https://orcid.org/0000-0002-1341-4814; http://lattes.cnpq.br/6851351991421755; http://lattes.cnpq.br/4449032685703603; Morais, Danielle Barbosa; http://lattes.cnpq.br/1768180848750009; Cobucci, Ricardo Ney Oliveira; Oliveira, Rodrigo Vasconcelos de; Tilburg, Mauricio Fraga Van
A infertilidade é definida como o insucesso em obter uma gestação após 12 meses de relações sexuais regulares desprotegidas, ou como condições que incompatibilizam o encontro de gametas. A infertilidade é considerada um problema de saúde mundial, o mercado global em tecnologias em reprodução assistida (TRA) movimentou cerca de US$ 26 bilhões de dólares em 2019 e deve chegar a US$ 45 bilhões até 2025. Os principais fatores associados a esse mercado, bem como os elementos que podem infuenciar na eficiência dos procedimentos relacionados a fertilidade, ainda são pouco discutidos, e em muitos casos desconhecidos. Nesse contexto, essa tese teve como objetivo caracterizar os principais tópicos relacionados ao mercado global em reprodução humana assistida (RHA) e aprofundar a pesquisa em dois tópicos ainda pouco estudados: a eficiência do procedimento de microfluídica e a ocorrência de patógenos no sêmen. O primeiro capítulo apresenta uma revisão de escopo que teve como objetivo caracterizar o mercado de RHA. Foi aplicada a metodologia de modelagem de tópicos que possibilitou identificar os termos mais abordados em textos revisados por pares e literatura cinzenta relacionados ao tema. Com base nessa revisão foi possível observar que a grande maioria dos trabalhos aborda aspectos econômicos, regulatórios e geográficos e que temas relacionados à pesquisa, desenvolvimento e aprimoramento técnico sobretudo no que tange a fertilização in vitro (FIV) não são abordados. Desta forma, obsevamos a necessidade de aprofundar a análise de elementos de mercado que possam estar relacionados ao aumento da eficiência da FIV no campo técnico. Esse primeiro capítulo motivou o aprofundamento na investifação de tecnologias que estejam relacionadas ao aumento da eficiência da FIV. Dentre as tecnologias supracitadas, está em voga a utilização de microfluídica para a seleção espermática (MFSS). No segundo capítulo da tese apresentamos a primeira metanálise com objetivo de identificar potenciais benefícios na utilização deste dispositivo sobre as taxas de gravidez clínica e abortamento em TRA. Os resultados indicam discreto aumento na taxa de gravidez clínica e diminuição nas taxas de abortamento em relação às técnicas de seleção espermática por gradiente de densidade e swim-up; contudo, estes resultados não apresentaram significância estatística. Os indicadores de sucesso em TRA mais robustos permanecem sendo a idade materna, a reserva ovariana e a análise espermática quali-quantitativa. Nesse contexto de aprofundar o conhecimento sobre os tópicos menos estudados entro da RHA, o terceiro capítulo da tese apresenta o primeiro estudo que aplicou a abordagem metagenômica shotgun em amostras seminais. Apesar de ainda pouco estudada, a ocorrência de patógenos no sêmen pode ser considerada uma causa de infertilidade e a escolha da técnica se justifica pela possibilidade de identificação não-direcionada de todo o grupo de organismos existentes na amostra. Utilizamos um pool de amostras seminais disponibilizadas por voluntários na Unidade de Direitos Reprodutivos na Maternidade Escola Januário Cicco (MEJC). Encontramos 71,3% de domínio bacteriano, 27,6% eucariótico e 1,1% de comunidade viral. Esses achados ampliam a visão atual sobre a microbiota funcional e apontam futuras investigações como o papel de microrganismos não cultiváveis no sistema reprodutivo. Além disso, as famílias Herv identificadas em amostras seminais abrem uma nova linha para estudos com perspectiva funcional e evolutiva. Todos os dados levantados nessa tese contribuem para novas frentes de pesquisa nos níveis de mercado, aprimoramento de metodologias e diagnóstico de doenças relacionadas à fertilidade.
Morfologia dos ovários, tubas uterinas e útero de Pteronotus gymnonotus (Chiroptera: Mormoopidade)
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-04-06) Costa, Erich Fernando Espinelo; Morais, Danielle Barbosa; Menezes, Danilo José Ayres de; http://lattes.cnpq.br/4003577127443065; http://lattes.cnpq.br/1768180848750009; http://lattes.cnpq.br/1450544547404665; Dias, Fernanda Carolina Ribeiro; Magalhães, Marcela dos Santos
O presente estudo teve como objetivo caracterizar a morfologia ovariana, tubária e uterina no morcego insetívoro Pteronotus gymnonotus, em espécimes coletados no estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Após a eutanásia, tais órgãos foram processados histologicamente para inclusão em historesina para análises morfológicas e morfométricas sob microscopia de luz. A caracterização morfológica dos ovários teve como base o desenvolvimento do ovócito e crescimento do folículo, enquanto as tubas uterinas foram caracterizadas quanto a sua anatomia e divisão de suas partes em: infundíbulo, ampola e istmo, onde analisou-se a altura do epitélio tubário e espessura da camada muscular. Já a análise do útero foi baseada na formação e espessura de suas três camadas: endométrio, miométrio e perimétrio. As análises morfométricas foram realizadas através de capturas de imagens das lâminas histológicas em diferentes aumentos. As variáveis foram submetidas a análise descritiva, sendo os dados expressos em média e desvio-padrão. Foi observado que os ovários são bilaterais e ovais, apresentando um epitélio de revestimento pavimentoso a cúbico simples, formando o epitélio germinativo, certa estratificação quanto à localização dos folículos ovarianos, onde a maioria dos folículos primordiais se dispôs na região periférica do ovário, porém sendo possível identificar muitos folículos em vários estágios de maturação na região central; o útero é bicórneo e as camadas do útero e das tubas uterinas observadas seguem o mesmo padrão dos demais mamíferos eutérios. Estas informações são importantes para permitir comparações entre as espécies, visando o conhecimento acerca da morfologia reprodutiva em mamíferos, em especial daqueles pertencentes à ordem Chiroptera. Por isso, essa pesquisa é fundamental para subsidiar medidas conservacionistas que resguardem suas populações naturais, num esforço de manter o equilíbrio ecológico.
Paradigmas educacionais no ensino de embriologia para a formação inicial do profissional de enfermagem
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2025-04-23) Leopoldino, Samella Karine de Macedo; Morais, Danielle Barbosa; Camillo, Christina da Silva; https://orcid.org/0000-0003-3277-1857; http://lattes.cnpq.br/1768180848750009; http://lattes.cnpq.br/0976353769615041; Ramos, Deyla Moura; Cruz, Luciana Hoffert Castro
A Embriologia integra o eixo básico dos cursos de graduação da área biomédica. Em sua aplicação clínica destaca-se o papel dos Enfermeiros, responsáveis por assistir diretamente à mulher não gestante, gestante e/ou o neonato. Porém, seu ensino é desafiador e enfrenta entraves, como carga horária escassa e distanciamento com a prática clínica; o que relacionase a uma limitação na formação dos Enfermeiros. Objetivou-se, portanto, contribuir com a formação inicial do Enfermeiro, a partir da integração dos conhecimentos em Embriologia com a prática clínica. Realizou-se uma investigação descritiva de corte transversal com abordagem qualitativa, realizada nas etapas: levantamento das ementas de Embriologia para a Enfermagem, nos cursos de graduação do país; revisão da literatura acerca dos distúrbios do desenvolvimento comumente relacionados à prática clínica; pesquisa com Enfermeiros acerca da contribuição da Embriologia em sua prática clínica; e intervenção prática com discentes de Enfermagem através de oficinas. Os dados foram analisados por meio da estatística descritiva e da técnica de análise de conteúdo de Bardin. A análise de 63 ementas evidenciou que conteúdos importantes como distúrbios do desenvolvimento (67%) e desenvolvimento dos sistemas orgânicos (33%) são pouco contemplados. As intercorrências gestacionais e neonatais mais prevalentes na literatura incluíram distúrbios dos sistemas cardiovascular (16%), nervoso (12,8%), respiratório (12,8%) e digestório (7,7%). A Embriologia se faz presente na atuação dos Enfermeiros, principalmente na assistência à gestante (74%). Dos profissionais que responderam ao questionário, 36% considerou que desenvolvimento dos sistemas e más formações congênitas deveriam ter sido explorados durante sua graduação. Notou-se pouca implementação de metodologias ativas e escassez de aulas práticas. Aos graduandos de Enfermagem, a aplicação das oficinas potencializou confiança, segurança, interesse e aprendizado, e contribuíram para a integração teórico-prática do conteúdo, com alto grau de satisfação. Os resultados mostraram como o ensino da Embriologia integrado à prática clínica pode favorecer a atuação do Enfermeiro na saúde materno-fetal. Espera-se que estes possam contribuir para embasar novos estudos na área, que somem esforços para um novo olhar sobre a importância do ensino de Embriologia aliado à prática na Enfermagem, potencializando a formação destes futuros profissionais, com vistas à promoção de uma assistência à saúde da mulher e do neonato mais assertiva e resolutiva.
Preservação da fertilidade em pacientes oncológicos: métodos e aplicações
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-07-24) Cruz, Beatriz de Araújo; Morais, Danielle Barbosa; http://lattes.cnpq.br/1768180848750009; http://lattes.cnpq.br/3311056368974167; Silva, Lívia Christina Alves; http://lattes.cnpq.br/5154085020090977; Oliveira, Maryana Thalyta Ferreira Câmara; http://lattes.cnpq.br/8554649433942208
O câncer é uma doença mutagênica que necessita de tratamentos a base de alquilantes ou radiação ionizante para inibir a proliferação desordenada da malignidade, afetando também tecidos saudáveis do organismo. A incidência dessas terapias nos tecidos gonadais podem implicar em quadro de infertilidade. Nessa perspectiva, realizou-se uma revisão de literatura fazendo-se um levantamento das técnicas de preservação de fertilidade mais empregadas em pacientes oncológicos, bem como quanto aos benefícios aplicados ao quadro clínico de cada paciente. Foram utilizadas duas bases de dados, PubMed e Web of Science, selecionando estudos clínicos através de duas estratégias de busca “Fertility preservation” OR oncofertility AND “ovar*” para pacientes femininos e "Fertility preservation" OR "oncofertility" OR "cancer" AND "sperm*" OR "testicle" para pacientes masculinos, obtendo-se 9 e 6 resultados selecionados, respectivamente. Os resultados apontaram a criopreservação de oócitos como a técnica mais citada para pacientes femininos, sendo o câncer de mama o de maior incidência nestes estudos; e criopreservação de sêmen como a técnica mais citada para pacientes masculinos, sendo o câncer de testículo o de maior incidência nos pacientes avaliados. Os resultados desta revisão destacam ainda a importância da estimulação hormonal previamente à coleta dos oócitos a serem criopreservados, ao mesmo tempo em que se chama atenção quanto a possíveis efeitos adversos a pacientes com canceres hormônio-dependentes. Destaca-se ainda a dificuldade em se acompanhar os pacientes por longos prazos, o que pode explicar a ocorrência de desfechos distintos frente à aplicação das diferentes técnicas, quando se busca rastrear suas taxas de sucesso em se obter uma gestação ao término do tratamento oncológico. Fica evidente, portanto, a importância da associação de técnicas de reprodução assistida à preservação da fertilidade, visando diminuir os impactos sofridos pelo paciente oncológico durante um tratamento potencialmente gonadotóxico e proporcionar bem-estar e perspectivas futuras positivas a estes pacientes, quanto ao desejo de constituir uma família a partir de seus próprios gametas.
Testicular morphometry of rats with Walker 256 tumor supplemented with L-glutamine
(Colégio Brasileiro de Reprodução Animal (CBRA), 2021) Rocha, Nayara Rodrigues; Braz, Janine Karla França da Silva; Souza, Sara Raquel Garcia de; Fracaro, Luciane; Melo, Fabiana Cristina Silveira Alves de; Zanoni, Jacqueline Nelisis; Clebis, Naianne Kelly; Morais, Danielle Barbosa; Moura, Carlos Eduardo Bezerra de
Glutamine is often used to treat metabolic changes associated with anorexia-cachexia syndrome in patients with malignant neoplasms. Walker 256 tumor is an excellent model for studying these changes associated with cancer in different organs, including injuries in testicular functions. However, the effects of supplementing glutamine on testicular morphometry in this model have not yet been investigated. Thus, the objective of this study was to evaluate the effect of L-glutamine supplementation on testicular morphometry in rats transplanted with Walker 256 tumor cells. Forty puberty Wistar rats were divided into four groups: control without L-glutamine (C); control supplemented with L-glutamine (CG); inoculated with Walker 256 tumor cells (WT) and inoculated with Walker 256 tumor cells and supplemented with L-glutamine (WTG). The testicles were removed, weighed, fixed in Bouin, and included in paraffin for histomorphometric analysis. Walker 256 tumor caused quantitative changes in the tubular and intertubular compartments and tunica albuginea, with reductions in the percentages of lumen and tunica albuginea, number of Sertoli cells per gram of testis; number of Leydig cells; percentage of blood vessels and connective tissue in intertubule. However, glutamine supplementation prevented part of these changes caused by the tumor, presenting mainly a protective effect on the tunica albuginea and percentage of blood and lymph vessels in the intertubule. These results indicate the potential of L-glutamine was able to recover for testicular dysfunction associated with cancer

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