Navegando por Autor "Moura, Andrew Douglas"
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Tese Potenciais vacinas e marcadores de diagnóstico para toxoplasmose baseados em peptídeos quiméricos(2018-03-28) Moura, Andrew Douglas; Salha, Daniella Regina Arantes Martins; Romero, Oscar Bruña; ; ; ; Silva Júnior, Arnóbio Antonio da; ; Rodrigues Neto, João Firmino; ; Bouillet, Leoneide Érica Maduro; ; Schriefer, Nicolaus Albert Borges;A Toxoplasmose é uma zoonose de distribuição mundial causada pelo protozoário Toxoplasma gondii (T. gondii), que pode infectar vários animais de sangue quente, incluindo humanos. Os sintomas mais graves geralmente são observados em indíviduos imussuprimidos, podendo ser fatal. Devido à grande diversidade biológica de isolados não-clonais de T. gondii circulantes no hemisfério sul do globo terrestre, complicações severas tais como encefalites, miocardites e danos oculares também podem ser observadas em indivíduos imunocompetentes. Recentemente, um estudo revelou que o T. gondii está associado no desencadeamento de doenças neurodegenerativas, e alguns tipos de câncer. Os avanços em imunoioinformática colaboram com estratégias para melhorar a busca e identificação de epítopos imunodominantes contidos em proteínas de microorganismos, os quais podem ser reconhecidos pelas células B e T hospedeira. O objetivo deste estudo foi mapear, analisar e selecionar epítopos de células B e T contidos nas proteínas AMA1, GRA7 e SAG1 de Toxoplasma gondii, assim como, construir peptídeos quiméricos formados pela junção de epítopos de células B e T, analisar seus potenciais imunogênico in silico e in vitro. Foram construídos quatro peptídeos quiméricos, os quais apresentaram afinidades de ligações com moléculas de MHC de murinos e humanos em análises in silico. Uma quimera multi-antigênica (TgAGS/BsT) composta por todos os epítopos dessas diferentes proteínas, foi construída, analisada in silico, e posteriormente obtida através da expressão em sistema recombinante. O pontencial como marcadores de diagnóstico foi confirmado através do reconhecimento de IgG em pacientes positivos para Toxoplasmose por ELISA (n=10). Através de estímulos antigênicos em cultura de PBMC de pacientes imunocompetentes IgG negativo e positivo para Toxoplasmose, foi induzida a expressão de CD25+ em células CD3+ no grupo de pacientes positivos com significância (p<0,05) quando comparados aos pacientes negativos. Além disso, foi verificada a produção de IFN- e IL-2 no sobrenadante de culturas estimuladas com os peptídeos quiméricos. Esses achados abrem perspectivas para o desenvolvimento de vacinas e reagentes de diagnóstico para Toxoplasmose através de produtos quiméricos formados por epítopos de células B e T.Dissertação Proteínas SAG1, SAG2, SAG3 de toxoplasma gondii como perspectivas para o desenvolvimento de protótipo vacinal contra a toxoplasmose(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-04-02) Moura, Andrew Douglas; Andrade Neto, Valter Ferreira de; Romero, Oscar Bruna; ; http://lattes.cnpq.br/2472508053117517; ; http://lattes.cnpq.br/4863082845974813; ; http://lattes.cnpq.br/3496257680467966; Genari, Solange Maria; ; http://lattes.cnpq.br/9786505264909374; Araújo, Joselio Maria Galvão de; ; http://lattes.cnpq.br/6430774978643765A toxoplasmose é uma zoonose de distribuição mundial causada pelo protozoário Toxoplasma gondi podendo desencadear graves complicações em pacientes imunossuprimidos e gestantes; bem como acarretando grande impacto econômico para a pecuária. Até o momento o controle da toxoplasmose é feito basicamente pela quimioterapia. Contudo, a maioria das drogas utilizadas na rotina apresentam alguma limitação. No intuito do controle dessa parasitose, diversos grupos de pesquisas, inclusive o nosso, vêm trabalhando para o desenvolvimento de uma vacina médico-veterinária com base em antígenos do parasito, vetores e protocolos para imunização. Nesse estudo foram implantadas e padronizadas metodologias para amplificação e clonagem de imunógenos em sistema recombinante visando o desenvolvimento de um protótipo vacinal, tendo como base os antígenos de superfície de T. gondii e adenovírus recombinante codificando esses antígenos. Os genes que codificam as proteínas BAG1, GRA2 e SAG1 foram amplificados. Foi estabelecida uma estratégia de clonagem dos genes SAG1, SAG2, SAG3 e TgAMA-1 em sistema recombinante. Os genes que codificam SAG1 e SAG2 foram clonados e suas sequências apresentaram grande similaridade com sequências depositadas no GenBank. A tradução virtual dessas proteínas apresentou polimorfismos no nível de aminoácidos, que poderão ser correlacionadas com níveis de antigenicidade. Paralelamente, foi realizada a expansão, purificação e caracterização dos adenovírus que codificam as SAGs (HAdSAGs). A imunização de camundongos C57BL/6, utilizando o sobrenadante viral, não foi suficiente para desencadear respostas imunológicas em altos níveis, sendo necessária a titulação dos HAdSAGs para futuras imunizações. Portanto, esse estudo permitiu a clonagem de dois genes importantes para o desenvolvimento de um protótipo vacinal, além de implementações de metodologias que permitirão avanços para o desenvolvimento de uma vacina contra a toxoplasmose usando adenovírus que expressem proteínas do parasito