Navegando por Autor "Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto"
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Artigo Anti-IIa activity and antitumor properties of a hybrid heparin/heparan sulfate-like compound from Litopenaeus vannamei shrimp(Elsevier, 2018-06-30) Brito, Adriana da Silva; Cavalcante, Rômulo S.; Cavalheiro, Renan P.; Palhares, Laís C. G. F.; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; Souza, Giulianna Paiva Viana de Andrade; Nader, Helena B.; Lima, Marcelo A.; Chavante, Suely FerreiraIn this present study, the anti-IIa activity and the antitumor properties of a hybrid heparin/heparan sulfate-like compound (sH/HS) from Litopenaeus vannamei shrimp heads are related. In addition to inhibiting 90.7% of thrombin activity at the lowest tested concentration (0.5 μg/mL), sH/HS compound stimulated the synthesis of antithrombotic heparan sulfate by endothelial cells in a dose-dependent manner. In vitro experiments demonstrated that the molecule from shrimp displayed a potent anti-angiogenic effect, reducing over 80% of the tubular structures formation at 50 and 100 μg/mL. In addition, sH/HS compound was able to inhibit the migration of B16F10 cells at all tested concentrations without affecting the cell viability. Although the studied compound had no effect on the proliferation of such cells during a period of 24 h, it had a significant long-term antiproliferative effect, reducing about 80% of colony formation and anchorage-independent growth at 50 and 100 μg/mL concentrations. When its effectiveness was tested in vivo, it was demonstrated that sH/HS promoted a reduction of more than 90% of tumor growth. In the context of thromboembolic disorders associated with cancer, such findings make the sH/HS compound an excellent target for studies on inhibiting of development and tumor progression, and the prevention of coagulopathiesArtigo Anticoagulant, antioxidant and antitumor activities of heterofucans from the seaweed Dictyopteris delicatula(MDPI, 2011-05-23) Magalhaes, Kaline Dantas; Costa, Leandro Silva; Fidelis, Gabriel Pereira; Oliveira, Ruth Medeiros; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; Dantas-Santos, Nednaldo; Câmara, Rafael Barros Gomes da; Albuquerque, Ivan Rui Lopes; Cordeiro, Sara Lima; Sabry, Diego Araujo; Costa, Mariana Santana Santos Pereira; Alves, Luciana Guimaraes; Rocha, Hugo Alexandre de OliveiraIn the present study, six families of sulfated polysaccharides were obtained from seaweed Dictyopteris delicatula by proteolytic digestion, followed by acetone fractionation and molecular sieving on Sephadex G-100. Chemical analyses demonstrated that all polysaccharides contain heterofucans composed mainly of fucose, xylose, glucose, galactose, uronic acid, and sulfate. The fucans F0.5v and F0.7v at 1.0 mg/mL showed high ferric chelating activity (~45%), whereas fucans F1.3v (0.5 mg/mL) showed considerable reducing power, about 53.2% of the activity of vitamin C. The fucan F1.5v presented the most prominent anticoagulant activity. The best antiproliferative activity was found with fucans F1.3v and F0.7v. However, F1.3v activity was much higher than F0.7v inhibiting almost 100% of HeLa cell proliferation. These fucans have been selected for further studies on structural characterization as well as in vivo experiments, which are already in progressArtigo Antioxidant fucoidans obtained from tropical seaweed protect pre-osteoblastic cells from hydrogen peroxide-induced damage(MDPI, 2019-08-28) Fidelis, Gabriel Pereira; Silva, Cynthia Haynara Ferreira; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; Medeiros, Valquíria Pereira; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; Costa, Leandro SilvaSome antioxidant compounds decrease the amount of intracellular reactive oxygen species (ROS) and consequently reduce the deleterious effects of ROS in osteoblasts. Thus, these compounds fight against osteoporosis. Brown seaweeds are a rich source of antioxidant fucose-containing sulfated polysaccharides (fucans and fucoidans). We obtained six fucoidans (FRFs)—F0.3, F0.5, F0.7, F1.0, F1.5, and F2.1—from Dictyota mertensii by proteolytic digestion followed by sequential acetone precipitation. Except for F0.3, all FRFs showed antioxidant activity in different in vitro tests. In pre- osteoblast-like cells (MC3T3-L1) exposed to H2O2-oxidative stress, caspase-3 and caspase-9 were activated, resulting in apoptosis of the cells. We also observed a decrease in superoxide dismutase (SOD) and alkaline phosphatase (ALP) activity. The antioxidant FRFs protected the cells from the oxidative damage caused by H2O2, decreasing intracellular ROS and caspase activation, and increasing SOD activity. The most effective protection against damage was provided by F0.7, F1.5, and F2.1. At 0.5 mg/mL, these FRFs also suppressed the H2O2-mediated inhibition of ALP activity. The data indicated that FRFs F0.7, F1.5, and F2.1 from D. mertensii were antioxidants that protected bone tissue from oxidative stress and could represent possible adjuvants for the treatment of bone fragility through counteracting oxidative phenomenaDissertação Câncer de mama e colo de útero: análise do acesso aos métodos de rastreio em Caicó(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-03-29) Boucas, Ana Rafaela Nascimento e; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; Braz, Janine Karla França da Silva; http://lattes.cnpq.br/8667360972582108; https://orcid.org/0000-0002-9570-6465; http://lattes.cnpq.br/2904787727374331; http://lattes.cnpq.br/4923472728099978; Medeiros, Kleyton Santos de; Maciel, Michelline do ValeSegundo o INCA, a estimativa para o Brasil para o triênio 2023 a 2025 aponta que ocorrerão 704 mil casos novos de câncer, 483 mil se excluídos os casos de câncer de pele não melanoma. Nas mulheres os cânceres de mama com 74 mil casos (10,5%); e de colo do útero com 17 mil casos (4,7%), figurarão entre os principais, com um risco de 16,47 mortes por 100 mil mulheres por câncer de mama e um risco de 6,12 mortes a cada 100 mil mulheres por câncer de colo de útero. Alguns tipos de cânceres possuem métodos de rastreio que podem diagnosticá-los em fases precoces, como o câncer de mama que o Ministério da Saúde recomenda o rastreio com mamografia, em mulheres entre 50 e 69 anos, e o câncer de colo de útero cuja recomendação é realizar o exame citopatológico em mulheres de 25 a 64 anos. Considerando que o câncer está no grupo das quatro doenças que mais mata precocemente, que sua incidência vem aumentando devido ao envelhecimento populacional, que nem todos os tipos possuem métodos eficazes de prevenção e que alguns possuem métodos de rastreio precoce, simples e baratos. O objetivo deste trabalho é avaliar a cobertura populacional dos métodos de rastreio disponíveis para câncer de mama e de colo de útero da população feminina preconizada para rastreio no município de Caicó/RN nos anos de 2014 a 2020. Neste município observou-se uma grande cobertura populacional dos exames de mamografia, sendo semelhante ao RN e ambas são superiores as demais regiões. Na associação entre o percentual de exames de mamografia realizados no período analisado e o percentual dos óbitos por câncer de mama em relação ao total mamografias realizadas, para as quatro regiões analisadas, identificou-se correlações estatisticamente significativas, inversamente proporcionais e forte entre essas variáveis, com r=-0,86 e valor-p de 0,02381 para a região de Caicó/RN. Estes resultados significam que, no período analisado, ao ocorrer aumento no percentual de exames realizados, houve a diminuição no percentual de óbitos por este tipo de câncer em relação ao total de mamografias realizadas. Os dados do rastreio para o câncer de colo de útero mostram que o município de Caicó apresenta uma média cerca de duas vezes acima dos cenários nacional, regional e estadual. Na associação entre o percentual de exames preventivos realizados e o percentual de óbitos por câncer de colo de útero em relação ao total citologias realizadas, para todas as regiões em estudo, identificou-se correlação significativa, inversamente proporcional e forte entre essas variáveis para o período analisado. Ou seja, a medida em que houve aumento no percentual de exames preventivos observou-se diminuição no percentual de óbitos por câncer de colo de útero. A população feminina compreendida nas faixas etárias preconizadas pelo Ministério da Saúde para o rastreio do câncer de mama e do câncer de colo de útero no município de Caicó têm cobertura adequada aos métodos disponíveis.Artigo A fucan of a brown seaweed and its antitumoral property on HT-29 and immunomodulatory activity in murine RAW 264.7 macrophage cell line(Springer, 2017-02-19) Pinheiro, Thuane de Sousa; Santos, Marilia da S. Nascimento; Castro, Luiza Sheyla E. P. Will; Paiva, Almino Afonso de O.; Alves, Luciana G.; Cruz, Ana Katarina M.; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; Alves, Monique Gabriela das Chagas Faustino; Leite, Edda LisboaPolysaccharides from algae are also proper candidates with therapeutic properties and immunomodulatory and antitumor effects. The brown seaweed Lobophora variegata synthesizes different groups of anionic polysaccharides with several biological properties. Sulfated polysaccharides were obtained by delipidation of seaweed, proteolysis, and fractionation with different volumes of acetone. A fraction of sulfated polysaccharides, fucans or fucoidans, was extracted with 0.8 v acetone and named L. variegata (LV). This fucan was assessed in the inflammatory process in rats, antitumor action on human colon adenocarcinoma (HT-29 cells), apoptosis, and its effect on the cell cycle. LV fraction, a galactofucan, exhibited a high ratio of total sugar/sulfate (1.5) and a very low level of proteins. This polysaccharide showed an antiinflammatory effect on two models of inflammation induced by croton oil and oxazolone in rats. LV was analyzed in cellular proliferation of HT-29. We also demonstrated the cytotoxic action against this cell line and induction in the apoptosis and decreased the cell cycle in phases S and G2/M and the accumulation of cells in the G1 phase. Our studies with LV showed a marked immunomodulatory action without and with lipopolysaccharide (LPS) on RAW 264.7 cells. Comparative studies of two fucans, LV and FV (Fucus vesiculosus), with different structures were assessed on viability in macrophages, RAW 264.7 cells. Both showed cytotoxicity in these cells. We observed high levels of nitric oxide (NO) production, interleukin-6 (IL-6), and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) when treated at 0.25, 0.5, and 1.0 mg mL−1 of LV. Data also suggest that LV has potential antitumor effects on HT-29 and antiinflammatory and immunomodulatory effects on RAW 264.7 cellsDissertação Fucana ativa via das Map quinases e inibe a proliferação de células de ovário de hamster chinês (CHO)(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2011-07-08) Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799567J8&dataRevisao=null; ; http://lattes.cnpq.br/2904787727374331; Scortecci, Kátia Castanho; ; http://lattes.cnpq.br/4808910380593455; Farias, Eduardo Henrique Cunha de; ; http://lattes.cnpq.br/0933304924768138Fucana é um termo utilizado para denominar polissacarídeos sulfatados ricos em L-Fucose. As fucanas têm sido estudadas devido suas atividades farmacológicas: antitrombótica, antiproliferativa e antioxidante. Nós extraímos três frações de fucanas da alga Spatoglossum schröederi. Essas fucanas, denominadas de Fuc B 1, Fuc B 1.5 e Fuc B 2, apresentam uma composição muito similar como demonstrado pela eletroforese em gel de agarose, e conteúdo de açúcar e sulfato. O efeito antiproliferativo foi determinado pelas metodologias de MTT e BrdU em células CHO. O efeito na inibição da proliferação das três frações foi de cerca de 40%. Assim, procedemos somente com a Fuc B 2 devido seu maior rendimento. Não houve indicação de apoptose usando a marcação com anexina V-FITC/ Iodeto de Propídeo. Identificamos uma parada na fase G1 do ciclo celular. Os ensaios de western blotting mostraram que PKC, pFAK e pERK 1/2 são ativadas quando as células são tratadas com Fuc B. O tratamento com o inibidor de MAPK PD98059 aboliu o efeito da fucana. Esses efeitos indicam que a fucana age via ERK para inibir a proliferação das células.Dissertação Fucanas extraídas da alga Dictyota menstrualis com atividade antioxidante, antiproliferativa e anticoagulante(2018-06-26) Araújo, Thiago Laurentino; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; Lima, Jailma Almeida de; ; ; ; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; ; Santos, Marilia da Silva Nascimento;Fucanas constituem um grupo de polissacarídeos sulfatados encontrados na matriz mucilaginosa de algas marrons constituídas por fucose sulfatada e uma porcentagem variada de outros monossacarídeos. Diante da grande demanda por novos medicamentos as fucanas se destacam devido ao seu potencial farmacológico, cujo repertório de propriedades inclui atividades anticoagulante, antioxidante, antiinflamatória, antiproliferativa, antinociceptiva, hepato e neuroprotetora. A fucana FDM1,0 da alga Dictyota menstrualis obtida em estudo anterior foi escolhida por apresentar o melhor rendimento para ser purificada. FDM1,0 foi fracionada por massa molecular resultando em 7 subfrações (F1 a F7) as quais foram caracterizadas quimicamente. O maior peso seco adquirido foi de F1 com rendimento de 61,34%, fato que motivou seu uso nos ensaios de avaliação das atividades farmacológicas. FDM1,0 e F1 foram comparadas quanto ao seu efeito em ensaios de atividade antioxidante, anticoagulante, na antiproliferação e morte celular. FDM1,0 e F1 apresentaram 48,6 e 51,8% de açúcares totais, 2,3 e 6,1% de sulfato e baixa contaminação proteica, respectivamente. A análise de infravermelho de FDM1,0 e F1 mostrou sinais característicos de polissacarídeos. Ambas FDM1,0 e F1 apresentaram elevada inibição de radicais superóxido (76 e 61%) e radicais DPPH (74 e 68%). Não foi observada atividade quelante de íons de ferro, mas obteve-se leve quelação de cobre para FDM1,0 e F1. F1 apresentou o mesmo efeito que heparina comercial de baixo peso molecular, no ensaio de aPTT, na concentração de 66,7µg/ml, enquanto FDM1,0 na concentração de 83,3µg/ml. No ensaio de PT nenhuma das frações apresentou atividade anticoagulante, indicando que o mecanismo de ação de FDM1,0 e F1 está voltado para a via intrínseca da coagulação. No ensaio de MTT (brometo de 3-[4,5- dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolium), 100µg de FDM1,0 inibiu B16-F10 (melanoma maligno murino) em 77%. FDM1,0 e F1 inibiram 92 e 100%, respectivamente, células da linhagem 786-O (adenocarcinoma de células renais humano) sob a massa de 100µg, quando tratadas por 24h. No ensaio de morte celular utilizando anexina-V e iodeto de propídio (PI), utilizando a mesma concentração, nenhuma fração provocou a morte das células 786-O. Esses resultados sugerem que as frações FDM1,0 e F1 apresentam elevada inibição sobre a redução de MTT a formazan em células 786-O, atividade antioxidante proeminente, especialmente sobre radicais superóxido, tornando-as potenciais antioxidantes a serem explorados. A elevada atividade anticoagulante observada sobre a via intrínseca da coagulação sugere que os polissacarídeos sulfatados de D. menstrualis podem ser uma fonte de possíveis agentes anticoagulantes e a alta inibição de células 786-O no ensaio de MTT deve ser melhor investigada para verificação do seu elevado potencial de inibição sobre a linhagem celular cancerígena.Artigo Heterofucan from Sargassum filipendula induces apoptosis in HeLa cells(MDPI, 2011-04-14) Costa, Leandro Silva; Telles, Cinthia Beatrice Silva; Oliveira, Ruth Medeiros; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; Dantas-Santos, Nednaldo; Câmara, Rafael Barros Gomes da; Costa, Mariana Santana Santos Pereira; Almeida-Lima, Jailma; Melo-Silveira, Raniere Fagundes; Albuquerque, Ivan Rui Lopes; Leite, Edda Lisboa; Rocha, Hugo Alexandre de OliveiraFucan is a term used to denominate a family of sulfated polysaccharides rich in sulfated L-fucose. Heterofucan SF-1.5v was extracted from the brown seaweed Sargassum filipendula by proteolytic digestion followed by sequential acetone precipitation. This fucan showed antiproliferative activity on Hela cells and induced apoptosis. However, SF-1.5v was not able to activate caspases. Moreover, SF-1.5v induced glycogen synthase kinase (GSK) activation, but this protein is not involved in the heterofucan SF-1.5v induced apoptosis mechanism. In addition, ERK, p38, p53, pAKT and NFκB were not affected by the presence of SF-1.5v. We determined that SF-1.5v induces apoptosis in HeLa mainly by mitochondrial release of apoptosis-inducing factor (AIF) into cytosol. In addition, SF-1.5v decreases the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 and increased expression of apoptogenic protein Bax. These results are significant in that they provide a mechanistic framework for further exploring the use of SF-1.5v as a novel chemotherapeutics against human cervical cancerArtigo Heterofucans from the brown seaweed Canistrocarpus cervicornis with anticoagulant and antioxidant activities(MDPI, 2011-01-24) Camara, Rafael Barros Gomes; Costa, Leandro Silva; Fidelis, Gabriel Pereira; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; Dantas-Santos, Nednaldo; Cordeiro, Sara Lima; Costa, Mariana Santana Santos Pereira; Alves, Luciana Guimaraes; Rocha, Hugo Alexandre de OliveiraFucan is a term used to denominate a family of sulfated polysaccharides rich in sulfated L-fucose. We extracted six fucans from Canistrocarpus cervicornis by proteolytic digestion followed by sequential acetone precipitation. These heterofucans are composed mainly of fucose, glucuronic acid, galactose and sulfate. No polysaccharide was capable of prolonging prothrombin time (PT) at the concentration assayed. However, all polysaccharides prolonged activated partial thromboplastin time (aPTT). Four sulfated polysaccharides (CC-0.3/CC-0.5/CC-0.7/CC-1.0) doubled aPTT with only 0.1 mg/mL of plasma, only 1.25-fold less than Clexane®, a commercial low molecular weight heparin. Heterofucans exhibited total antioxidant capacity, low hydroxyl radical scavenging activity, good superoxide radical scavenging efficiency (except CC-1.0), and excellent ferrous chelating ability (except CC-0.3). These results clearly indicate the beneficial effect of C. cervicornis polysaccharides as anticoagulants and antioxidants. Further purification steps and additional studies on structural features as well as in vivo experiments are needed to test the viability of their use as therapeutic agentsArtigo Immunomodulatory effects and antimicrobial activity of heterofucans from Sargassum filipendula(Springer, 2017-07-18) Telles, Cinthia Beatrice Silva; Mendes-Aguiar, Carolina; Fidelis, Gabriel Pereira; Frasson, Amanda Piccoli; Pereira, Wogelsanger Oliveira; Scortecci, Katia Castanho; Camara, Rafael Barros Gomes; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; Costa, Leandro Silva; Tasca, Tiana; Rocha, Hugo Alexandre de OliveiraParasitic diseases are a human health problem mainly in low-income areas. The drugs available for the treatment of these diseases are far from satisfactory due to high costs, toxicity, and drug resistance. Sulfated polysaccharides are a complex group of bioactive polymers and can be obtained from seaweeds. The heterofucans from Sargassum filipendula (SF) present strong antiproliferative and antioxidant activities. However, their immunomodulatory and antimicrobial capacity have not been evaluated until now. In this study, five sulfated fucose-rich fractions were isolated (named SF0.5V, SF0.7V, SF1.0V, SF1.5V, and SF2.0V). The chemical composition showed slight differences among polysaccharides and, consequently, biological activity of these polymers. Three fractions (SF0.5V, SF0.7V, and SF1.0V) showed a strong immunomodulatory activity enhancing the release of nitric oxide (NO) by murine macrophages (RAW 264.7), though only SF0.5V was able to induce interleukin-6 (IL-6) and TNF-α release from RAW cells. The sugar to sulfate ratio was not correlated with these activities. Meanwhile, the contents of xylose (P = 0.98 for NO; P = 0.98 for IL-6; P = 0.96 for TNF-α) and glucuronic acid (P = 0.91 for NO; P = 0.9190 for IL-6; P = 0.79 for TNF-α) were strongly positively correlated. SF0.7V and SF1.0V inhibited biofilm formation by Klebsiella pneumoniae (4.2 and 6.8%, respectively), whereas SF0.5V showed inhibitory effect (~50%) on biofilm formation by Staphylococcus epidermidis. Furthermore, SF0.7V and SF1.0V showed high inhibition capacity on the survival of the protozoan Trichomonas vaginalis. The sugar to sulfate ratio was positively correlated (P = 0.60) with this activity. The results demonstrate the spectrum of action of these sulfated polysaccharides obtained from SF and show their potential as immunomodulatory and microbicidal agentsArtigo A low-molecular-weight galactofucan from the seaweed, Spatoglossum schröederi, binds fibronectin and inhibits capillary-like tube formation in vitro(Elsevier, 2018-05) Menezes, Maira Maria; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; Rossi, Gustavo Rodrigues; Almeida-Lima, Jailma; Melo-Silveira, Raniere Fagundes; Franco, Celia Regina Cavichiolo; Trindade, Edvaldo Silva; Nader, Helena Bonciani; Rocha, Hugo Alexandre de OliveiraA low-molecular-weight (LMW) heterofucan (designated fucan B) was obtained from the brown seaweed, Spatoglossum schröederi, and its activity as an inhibitor of capillary-like tube formation by endothelial cells (ECs) was analyzed. Chemical, infrared and electrophoretic analyses confirmed the identity of fucan B. In contrast to other LMW fucans, fucan B (0.012–0.1 mg/mL) inhibited ECs capillary-like tube formation in a concentrationdependent manner. In addition, fucan B (0.01–0.05 mg/mL) did not affect ECs proliferation. Fucan B also inhibited ECs migration on a fibronectin-coated surface, but not on laminin- or collagen-coated surfaces. Biotinylated fucan B was used as a probe to identify its localization. Confocal microscopy experiments revealed that biotinylated fucan did not bind to the cell surface, but rather only to fibronectin. Our findings suggest that fucan B inhibits ECs capillary-like tube formation and migration by binding directly to fibronectin and blocking fibronectin sites recognized by cell surface ligands. However, further studies are needed to evaluate the in vivo effects of fucan BTese Polissacarídeos sulfatados extraídos da alga dictyota mertensii protegem células de linhagem óssea do estresse oxidativo e induzem a diferenciação óssea(2019-10-30) Fidelis, Gabriel Pereira; Costa, Leandro Silva; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; ; ; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; ; Barboza, Carlos Augusto Galvão; ; Aguiar, Jair Adriano Kopke de; ; Medeiros, Valquiria Pereira de;Fucanas e fucoidans são polissacarídeos ricos em L-fucose sulfatada encontrados principalmente em algas marinhas marrons, atribui-se a esse grupo de polissacarídeos inúmeras atividades farmacológicas como anticoagulante, antitumoral e antioxidante. Compostos antioxidantes são capazes de reduzir os níveis de espécies reativas de oxigênio (ROS) e os efeitos deletérios dessas em osteoblastos, evitando assim um desequilíbrio na homeostase do tecido ósseo, uma vez que danos nos osteoblastos levam a uma fragilidade óssea. Considerando seu caráter antioxidante, bem como a abundância de diferentes espécies de macroalgas na costa brasileira, o presente estudo tem como objetivo avaliar o potencial antioxidante e osteogênico de frações ricas em fucoidan da macroalga marrom Dictyota mertensii – alga tropical facilmente encontrada no litoral potiguar – através da análise da influencia desses compostos em células pré-osteoblástica e troncomesenquimais. Por meio da técnica de precipitação com volumes crescentes de acetona, foi obtido da alga D. mertensii 6 frações ricas em fucoidan (FRFs): F0.3, F0.5, F0.7, F1.0, F1.5 e F2.1. A presença de fucoidans foi confirmada por meio de análises físico-químicas e assim, as FRFs foram submetidas a ensaios antioxidantes in vitro, avaliado seu efeito protetor em células pré-osteoblásticas tratadas com peróxido de hidrogênio, verificou-se também o efeito osteogênico das FRFs em células mesenquimais humanas. Com exceção da F0.3, a qual só apresentou atividade relevante no ensaio de capacidade antioxidante total, nas demais frações foi constatado atividades antioxidantes in vitro na maioria dos ensaios avaliados. No caso da atividade de sequestro de radical hidroxila e íons superóxido nenhuma das FRFs apresentou atividade acima de 50% nas concentrações estudadas. Da mesma forma, quando as células pré-osteoblásticas MC3T3-E1 foram expostas a um indutor do estresse oxidativo (H2O2) e tratadas com as FRFs, observou-se no ensaio de redução do MTT a formazan que, com exceção da F0.3, todas as outras FRFs tiveram efeito protetor, com destaque para F0.7, F1.5 e F2.1. Foi observado que a atividade das caspase-3, caspase-9, superóxido dismutase (SOD), bem como um marcador da atividade osteoblástica – a fosfatase alcalina (ALP), foram afetadas na presença de H2O2. Por outro lado, quando as células foram expostas a FRFs (0,5 mg/mL) essas enzimas tiveram atividade semelhante àquela observada nas células não expostas ao H2O2, com destaque a F0.7, F1.5 e F2.1. Para avaliar a atividade osteogênica das FRFs, células mesenquimais humanas (Msc) foram tratadas com as FRFs e sua viabilidade foi avaliada pelo ensaio de redução do MTT a formazan. Conforme averiguado, as FRFs estudadas não são tóxicas às células Msc quando testadas em até 0,1 mg/mL. Quando as Msc foram expostas as FRFs por 21 dias observou-se que essas foram induzidas a se diferenciarem, o que foi comprovado por técnicas de citoquímica para marcadores de fosfatase alcalina e colágeno, destacou-se as FRFs F0.7 e F1.5. Esses dados indicam uma possível diferenciação das Msc a osteoblastos. Essa confirmação foi obtida através da análise por microscopia eletrônica de varredura (Mev) e espectrometria por dispersão de raio X (EDS), sendo possível observar focos de mineralização e a presença de elementos químicos constituintes da matriz óssea: cálcio, fósforo e oxigênio. Os resultados descritos nesta pesquisa indicam que as frações F0.7 e F1.5 obtidas da alga D. mertensii apresentam função antioxidante, bem como potencial osteogênico.Tese Prospecção de polissacarídeos bioativos da alga Lobophora variegata e elucidação estrutural de uma de suas β-glucanas(2016-07-29) Paiva, Almino Afonso de Oliveira; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; ; Dore, Celina Maria Pinto Guerra; ; Albuquerque, Ivan Rui Lopes de; ; Costa, Leandro Silva; ; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; ; Silveira, Raniere Fagundes de Melo;Macroalgas marinhas são importantes fontes de polissacarídeos neutros e negativos com importante potencial industrial e farmacológico. A macroalga marrom Lobophora variegata é conhecida por apresentar polissacarídeos sulfatados (heterofucanas) e neutros (laminarinas). Neste trabalho, mostra-se a obtenção de 6 frações polissacarídicas (F0.3; F0.5; F0.8; F1; F1.5 e F2). A partir dos dados de caracterização físico-química das frações, escolheu-se a F1 para purificação de seus componentes polissacarídicos. Análises de cromatografia líquida de exclusão molecular levaram a observação que F1 apresenta polissacarídicos de baixa (~ 5 kDa) até alta (> 100 kDa) massa molecular. Estes componentes foram separados de acordo com sua massa molecular, utilizando-se dispositivos de separação por tamanho molecular. Com isso, obteve-se subfrações polissacarídicas com tamanhos médios de 5, 20, 40, 75 e acima 100 kDa, denominadas de F1-5, F1-20, F1-40. F1-75 e F1>100 kDa, respectivamente. Estas subfrações foram analisadas físico-químicamente por eletroforese em gel de agarose, cromatografia líquida de alta eficiência, assim como, por análises de suas propriedades antioxidantes, imunoestimulantes e citotóxicas/antiproliferativas. Como resultados, detectou-se um teor de açúcares totais acima de 55% em todas as subfrações, já proteínas e compostos fenólicos não foram observados. As frações F1-5, F1-20 e F1-40 apresentaram somente glucose (glucanas), já F1-75 e F1>100 apresentam glucose, galactose e fucose (heterofucanas). Todas as subfrações apresentaram atividade quelante de metais, mas somente F1-75 e F1>100 foram mais efetivas em sequestrar radicais. A produção/liberação de óxido nítrico (NO) por células RAW 264.7 ficou aumentada apenas na presença F1-5 (10 μM, p<0,05), F1-75 (10 μM, p<0,001) e, com destaque, F1>100 (10 μM, p<0,001) cuja presença aumentou em cerca de 12 vezes a quantidade de NO. Entretanto, quando estas células foram ativadas com LPS, somente F1-20 e F1>100 (10 μM) (p<0,001) proporcionaram produção/liberação de ON. As demais frações não interferiram na ação do LPS. Somente F1-5 e F1>100 estimularam a produção/liberação de citocinas. Somente F1>100 (10 μM) foi citotóxica para a linhagem 3T3 (fibroblastos) (p<0,01). Nenhuma das subfrações apresentaram efeito citotóxico para linhagem de células RAW 264.7 (macrófagos) ou para linhagem de células tumorais Hep-G2 (carcinoma hepático). Já com a linhagen de células 786-0 (adenocarcinoma renal) somente a glucana F1-40 não apresentou atividade citotóxica (p>0,05). Os maiores valores de citotoxidade foram obtidos com a subfração F1-20, no caso contra células B16F10 (melanoma). Dados de citometria de fluxo indicaram que esta subfração promove uma parada das células na fase G1 do ciclo celular (10 μM, p<0,01). Análises de ressonância magnética nuclear levaram a proposta de que F1-20 é uma β-glucana formada por β-(13) glucoses com ramificações, compostas por um resíduo de glicose, na posição 6. A proporção é de nove resíduos de glucose 13 ligados para cada ponto de ramificação. Os dados apontam F1-20, por ser antioxidante, imunomoduladora e citotóxico, como um composto pluripotente cujo potencial deva ser melhor investigado.Artigo The protective role of sulfated polysaccharides from green seaweed Udotea flabellum in cells exposed to oxidative damage(MDPI, 2018-04-20) Presa, Fernando Bastos; Marques, Maxsuell Lucas Mendes; Viana, Rony Lucas Silva; Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto; Costa, Leandro Silva; Rocha, Hugo Alexandre de OliveiraSeaweed is a rich source of bioactive sulfated polysaccharides. We obtained six sulfated polysaccharide-rich fractions (UF-0.3, UF-0.5, UF-0.6, UF-0.7, UF-1.0, and UF-2.0) from the green seaweed Udotea flabellum (UF) by proteolytic digestion followed by sequential acetone precipitation. Biochemical analysis of these fractions showed that they were enriched with sulfated galactans. The viability and proliferative capacity of 3T3 fibroblasts exposed to FeSO4 (2 µM), CuSO4 (1 µM) or ascorbate (2 mM) was not affected. However, these cells were exposed to oxidative stress in the presence of FeSO4 or CuSO4 and ascorbate, which caused the activation of caspase-3 and caspase-9, resulting in apoptosis of the cells. We also observed increased lipid peroxidation, evaluated by the detection of malondialdehyde and decreased glutathione and superoxide dismutase levels. Treating the cells with the ultrafiltrate fractions (UF) fractions protected the cells from the oxidative damage caused by the two salts and ascorbate. The most effective protection against the oxidative damage caused by iron was provided by UF-0.7 (1.0 mg/mL); on treatment with UF-0.7, cell viability was 55%. In the case of copper, cell viability on treatment with UF-0.7 was ~80%, but the most effective fraction in this model was UF-2.0, with cell viability of more than 90%. The fractions, mainly UF-0.7 and UF-2.0, showed low iron chelating activity, but high copper chelating activity and total antioxidant capacity (TAC). These results suggested that some of their protective mechanisms stem from these properties