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Avaliação da estabilidade do plasmídeo pQE-30 e expressão do antígeno 503 de Leishmania i. chagasi em Escherichia coli M15 em diferentes concentrações de IPTG e temperaturas de cultivo
(2018-02-23) Ribeiro, Vitor Troccoli; Santos, Everaldo Silvino dos; ; ; Sousa Júnior, Francisco Canindé de; ; Vaz, Michelle Rossana Ferreira;
A leishmaniose visceral é uma doença infecto-parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania, podendo ser letal quando não há tratamento adequado. Estima-se que existem 12 milhões de pessoas infectadas pela doença, mas infelizmente não há nenhuma vacina capaz de prevenir a doença. Ademais, o tratamento da doença apresenta alto custo e elevada toxicidade. Diante disso, deve-se destacar a pesquisa de componentes antigênicos purificados que possam ser utilizados como ferramenta para obtenção de vacinas ou testes para diagnóstico específico. Neste contexto, o presente trabalho tem como objetivo avaliar a influência da concentração de IPTG durante a indução e a influência da temperatura de cultivo na expressão do antígeno 503 e na estabilidade do plasmídeo pQE-30 em Escherichia coli. Todos os ensaios foram realizados em incubador rotativo e feitos em duplicata. Primeiramente foram realizados cultivos induzidos com IPTG nas concentrações de: 0,01 mM; 0,1 mM; 0,5 mM; 1,0 mM e 1,5 mM na temperatura de 37 °C. A concentração de indutor não afetou a estabilidade do plasmídeo e quando induzido com 1,0 mM, a expressão de antígeno 503 máxima foi de 0,101 ± 0,004 g/L. Foi possível verificar que a menor concentração de IPTG utilizada foi o suficiente para conseguir a expressão da proteína recombinante. Em seguida, a concentração de IPTG foi fixada em 1,0 mM e avaliadas as temperaturas de cultivo de 27, 32 e 42 °C. Estes ensaios foram comparados com o ensaio realizado anterior a 37 °C. A temperatura influenciou a estabilidade do plasmídeo, sendo que quanto menor a temperatura de cultivo, maior estabilidade. De acordo com os resultados, foi possível verificar que a temperatura de 37 °C obteve maior expressão do antígeno 503, sendo considerada portanto, as condições ótimas para produção de antígeno 503 em incubador rotativo.
Controle de qualidade em indústria de saneantes domissanitários
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2016-06-02) Lima, Heloísa Didier; Medeiros, Gilson Gomes de; Medeiros, Gilson Gomes de; Oliveira, Edson Leandro de; Ribeiro, Vitor Troccoli
O Estágio Supervisionado Obrigatório faz parte do programa curricular do curso de Engenharia Química da Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Neste relatório, estão descritos todos os detalhes do projeto desenvolvido, desde a apresentação da empresa e suas atividades praticadas à atuação da aluna concluinte em Engenharia Química Heloísa Didier Lima como estagiária na área de Controle de Qualidade. A empresa Starlux Indústria e Comércio Material de Limpeza Higiene e Consumo Ltda. (Empresa de Pequeno Porte – EPP), situada no município de Parnamirim – RN, recebeu a estagiária no período de 01/10/2015 a 31/01/2016. Com um vasto número de produtos saneantes sendo fabricados diariamente, foi possível garantir um ambiente industrial ideal para o aprendizado. O estágio foi realizado sob a supervisão do Engenheiro Químico Adonai Nagib Carvalho França e orientado pelo Professor Doutor Gilson Gomes de Medeiros, com atividades desenvolvidas na área de Controle de Qualidade da empresa, seguindo as normas da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). A empresa caracteriza-se como indústria de saneantes domissanitários, em que as diretrizes para a implantação das Boas Práticas de Fabricação e Controle estão estabelecidas na Resolução RDC Nº 47, de 25 de outubro de 2013. Dentro da indústria, as atividades desenvolvidas foram o controle e a emissão de ordens de produção, análises físico-químicas dos produtos em laboratório, calibração de balanças e do peagômetro, controle de limpeza dos ambientes da empresa, controle de qualidade das embalagens recebidas, recebimento e inspeção de matérias-primas e embalagens recebidas, controle do padrão exigido pelo Manual de Qualidade e Boas Práticas de Fabricação (MQBPF) e uma auditoria interna da qualidade. O relatório inclui uma análise feita ao final do estágio sobre as disciplinas, entre aquelas estudadas durante o curso de engenharia química, que forneceram conhecimento para auxiliar o dia-a-dia de trabalho. São também mencionadas as contribuições que a estagiária forneceu à empresa, bem como as melhorias sugeridas.
Controle de qualidade na produção de saneantes
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2015) Ribeiro, Vitor Troccoli; Santos, Everaldo Silvino dos
Este relatório tem como principal objetivo relatar as atividades desenvolvidas pelo aluno de graduação em Engenharia Química Vitor Troccoli Ribeiro no Estágio Curricular Supervisionado Obrigatório realizado na empresa Starlux Indústria e Comércio Material de Limpeza Higiene e Consumo Ltda – EPP, localizada no município de Parnamirim – RN, no período compreendido entre 01/12/2014 e 19/05/2015.O estagiário atuou na área de Controle de Qualidade da empresa e realizou atividades que seguiram as regras e normas da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) com ênfase na Qualidade e Boas Práticas de Fabricação. O estágio promoveu a integração do estagiário com o ambiente industrial, o que é de grande importância para o aprendizado profissional e pessoal para a formação do Engenheiro Químico. As atividades realizadas pelo estagiário foram o recebimento e inspeção de matérias-primas e embalagens, o controle de qualidade do recebimento de embalagens, análises realizadas no laboratório de controle de qualidade, calibração de balanças e pHmetro, controle de limpeza e controle e emissão de ordens de produção.
Efeitos da estratégia de indução na produção de antígeno 503 de Leishmania infatum chagasi em E. coli recombinante
(Universidade Federal de Campina Grande (UFCG), 2014) Santos, Everaldo Silvino dos; Sousa Júnior, Francisco Canindé de; Silva, Valéria Nogueira da; Vaz, Michelle Rossana Ferreira; Chibério, Abimaelle Silva; Dias, Emanuele Cardoso; Ribeiro, Vitor Troccoli; Macedo, Gorete Ribeiro de
O presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito de duas estratégias de indução (pulso e adição gradual) com IPTG na expressão do antígeno 503 de Leishmania infatum chagasi em E. coli. No ensaio em batelada, o IPTG foi adicionado ao cultivo na concentração final de 1 mM. Na batelada alimentada, 0,2 mM do indutor foi adicionado a cada hora, totalizando uma concentração final de 0,8 mM. O procedimento de indução por pulsos de IPTG indicou um incremento de aproximadamente 49% na produção de biomassa quando comparado em batelada. Pode-se concluir que a estratégia de indução empregando pulsos de IPTG (batelada alimentada) foi mais eficaz na expressão do antígeno 503 quando comparado à estratégia de batelada simples. A eficácia da estratégia de indução foi confirmada por eletreforese
Influência do Tween 80 no pré-tratamento por explosão a vapor e alcalino, hidrólise enzimática e fermentação para produção de etanol a partir da fibra de coco verde
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-12-09) Ribeiro, Vitor Troccoli; Santos, Everaldo Silvino dos; Padilha, Carlos Eduardo de Araújo; https://orcid.org/0000-0002-9532-3026; http://lattes.cnpq.br/1186888955341616; https://orcid.org/0000-0001-7384-1140; http://lattes.cnpq.br/4330639792072559; http://lattes.cnpq.br/2170819716189853; Sousa Júnior, Francisco Canindé de; Rios, Nathalia Saraiva; Souza Filho, Pedro Ferreira de; Oliveira Júnior, Sérgio Dantas de
A fibra de coco verde tem sido apontada como uma alternativa interessante para produção de bioetanol, pois o Brasil é um dos maiores produtores globais do fruto e seu descarte, geralmente inadequado, provoca problemas ambientais. Os pré-tratamentos são necessários para remover compostos que protegem a celulose do ataque enzimático, aumentando a eficiência da hidrólise enzimática. A adição de surfactantes não-iônicos no processo de produção de bioetanol vem sendo estudada como estratégia para aumentar a sua produção e rendimento. Dentre esses, o Tween 80 destaca-se por ter um custo menor que outros aditivos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a produção de etanol a partir da fibra de coco verde usando um pré-tratamento combinado por explosão a vapor e alcalino, comparando as estratégias de sacarificação e fermentação simultâneas (SSF) e semi-simultâneas (SSSF). A incorporação de Tween 80 nas etapas de pré-tratamento, hidrólise enzimática e fermentação também foi investigada. Inicialmente, avaliou-se a influência dos parâmetros temperatura e umidade no pré-tratamento por explosão a vapor sobre a produção de glicose por hidrólise enzimática. O uso do surfactante não influenciou a deslignificação no pré-tratamento de explosão a vapor, porém aumentou a conversão em glicose quando comparado aos experimentos sem Tween 80. O uso do surfactante na hidrólise enzimática aumentou a produção de glicose, chegando a um valor máximo de 20,31 ± 0,48 g/L com a biomassa pré-tratada combinada e 1,0% (m/v) de Tween 80. Na ausência do surfactante em quaisquer etapas, a estratégia SSSF se destacou sobre a SSF. A SSSF foi a estratégia que apresentou o maior rendimento e produção de etanol e a cepa que favoreceu a melhor produção foi a Saccharomyces cerevisiae PE2. Diferentes efeitos do Tween 80 foram observados durante a fermentação. O uso de 2,0% (m/v) de Tween 80 reduziu a viabilidade celular bem como reduziu a produção de etanol em meio simulado, na SSF e na SSSF. Por outro lado, o uso de 1,0% (m/v) de Tween 80 aumentou a produção média de etanol, embora não o suficiente para ser estatisticamente significativo. Para aumentar a produção de etanol sob 30% (m/v) de carga de sólidos, variações da SSSF foram realizadas, incluindo adição em batelada de biomassa, adição em batelada de enzimas e variação de temperatura a cada 6 h. A SSSF com alimentação em batelada não-isotérmica e adição gradual de enzimas se destacou, chegando a um máximo de etanol produzido de 48,21 ± 1,13 g/L na presença de 1,0% (m/v) Tween 80. Portanto, os resultados indicam que o uso do pré-tratamento combinado gerou uma biomassa com alto teor celulósico que tem grande potencial na produção de etanol quando estratégias de fermentação com Tween 80 foram avaliadas.
Relatório de estágio supervisionado obrigatório: Controle de qualidade na produção de saneantes domissanitários na indústria Starlux
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2016-11-04) Macedo, Nicole Almada; Medeiros, Gilson Gomes de; Ribeiro, Vitor Troccoli; Lima, Heloísa Didier
O Estágio Supervisionado Obrigatório tem como objetivo fazer o estagiário, concluinte do curso de Engenharia Química, aplicar seus conhecimentos teóricos e práticos em um ambiente de trabalho real, o que é uma atividade essencial para sua futura atuação profissional e faz parte do currículo da Universidade Federal do Rio Grande do Norte. A empresa Starlux Indústria e Comércio Material de Limpeza Higiene e Consumo Ltda. – EPP (empresa de pequeno porte), localizada em Parnamirim – RN, recebeu a aluna concluinte em Engenharia Química Nicole Almada Macedo como estagiária na área de Controle de Qualidade, do período de 2 de agosto de 2016 a 2 de novembro de 2016. Sob a orientação do Prof. Dr. Gilson Gomes de Medeiros e sob supervisão do Engenheiro Químico Adonai Nagib Carvalho França, o estágio foi realizado seguindo as normas da Agência de Vigilância Sanitária (ANVISA). Neste relatório, estão relatadas as atividades desenvolvidas na indústria de saneantes, as quais buscaram sempre um padrão de garantia e de qualidade dos produtos, como o controle e a emissão de ordens de produção, análises físico-químicas dos produtos fabricados, calibração de balanças e medidores de pH, controle de limpeza dos diversos ambientes da empresa, recebimento e inspeção de matérias-primas e embalagens, controle de qualidade das embalagens recebidas e controle do padrão exigido pelo Manual de Boas Práticas de Fabricação e Controle. Por fim, o relatório inclui também uma análise final sobre as disciplinas estudadas durante o curso de engenharia química, contribuições da estagiária à empresa e melhorias sugeridas.
Simultaneous saccharification and fermentation of cactus pear biomass—evaluation of using different pretreatments
(Industrial Crops and Products, 2016-10-30) Santos, Everaldo Silvino dos; Souza Filho, Pedro Ferreira de; Ribeiro, Vitor Troccoli; Macedo, Gorete Ribeiro de
Lignocellulosic biomasses of two species of cactus pear (Opuntia ficus indica and Nopalea cochenillifera) were tested for the production of ethanol. Their ability to grow in water-stressed regions makes them eligible for reducing the production cost of biofuels in drought regions. The biomass was pretreated using three different strategies: alkaline hydrogen peroxide, alkaline using NaOH, and acid using H2SO4 followed by alkaline delignification with NaOH. Analyses of the composition, crystallinity, and enzymatic hydrolysis were performed on the material before and after pretreatment. An experimental design was used to evaluate the influence of temperature and initial cellulose concentration on the process of simultaneous saccharification and fermentation (SSF) using the pretreated material, which showed the best performance in previous tests, and two strains of Saccharomyces cerevisiae (PE-2 and LNF CA-11). Biomass characterization showed a content of 31.55% cellulose, 17.12% hemicelluloses, and 10.25% lignins for N. cochenillifera and 34.86% cellulose, 19.97% hemicelluloses, and 15.72% lignins for O. ficus indica. The alkaline pretreatment provided the best enzymatic saccharification yields. The SSF experiments resulted in the greatest cellulose-to-ethanol yields using strain PE-2 with the pretreated N. cochenillifera (93.81%) at 40 ◦C and an initial cellulose concentration of 4%. N. cochenillifera showed better yields than O. ficus indica, and the PE-2 strain performed better than CA-11. These results suggest a good potential for cactus pear cladodes in the production of cellulosic ethanol
Use of plasmids for expression of proteins from the genus Leishmania in Escherichia coli: current state and perspectives
(Springer-Verlag GmbH Germany, 2020-03-25) Santos, Everaldo Silvino dos; Ribeiro, Vitor Troccoli; Leitão, Ana Laura Oliveira de Sá; Vasconcelos, Luan Tales Costa de Paiva; Oliveira Filho, Marcos Antônio; Martins, Daniella Regina Arantes; Sousa Júnior, Francisco Canindé de
Leishmaniosis is caused by the protozoa of the genus Leishmania with a wide spectrum of clinical and epidemiological manifestations which are characterized into four clinical groups: cutaneous, mucocutaneous, diffuse cutaneous, and visceral. American visceral leishmaniosis (AVL) or visceral leishmaniosis (VL) has been known as the most severe form of the disease. However, despite the growing number of people exposed to the infection risk and the great effort done by the scientific community worldwide to significantly increase the knowledge about these diseases, there is no vaccine capable of preventing VL in humans. In this short review, we present some of the plasmids used for the expression of recombinant protein by Escherichia coli strains used mainly for the second generation of vaccines for leishmaniosis. It can be emphasized that currently, these vectors and hosts play an important role in developing vaccine strategies against the disease. Indeed, use of the E. coli BL21 (DE) strain is remarkable mainly due to its characteristics for being a stable protein producer as well as the use of histidine tags for antigen purification

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