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Análise imuno-histoquímica das proteínas VEGF e HIF-1α na doença periodontal
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2012-02-28) Vasconcelos, Roseane Carvalho; Gurgel, Bruno César de Vasconcelos; ; http://lattes.cnpq.br/4649601602612601; ; http://lattes.cnpq.br/3188232526467649; Lemos, Janaína Cavalcante; ; http://lattes.cnpq.br/6756263467790240; Queiroz, Lélia Maria Guedes; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4793681A0&dataRevisao=null
A doença periodontal é uma condição infecciosa e inflamatória complexa em que a resposta imune do hospedeiro, frente aos produtos microbianos, pode conduzir à progressão da doença. A agressão tecidual induz a liberação de moléculas reguladoras, que desempenham papéis protetores e/ou destrutivos, incluindo as proteínas VEGF (Fator de crescimento endotelial vascular) e o HIF-1 α (Fator induzido por hipóxia -1 α). Diante disso, este estudo buscou analisar, de forma quantitativa e comparativa, a expressão imuno-histoquímica destas proteínas, envolvidas nos processos de angiogênese e hipóxia, observadas em condições inflamatórias. Para tanto, 75 amostras de tecidos gengivais foram examinadas. Destas, 30 foram de periodontite crônica, 30 de gengivite crônica e 15 de gengivais saudáveis. Foram contadas, as células inflamatórias e endoteliais, positivas e negativas, no tecido conjuntivo fibroso, e posteriormente, convertidas em porcentagem. Os dados foram analisados estatisticamente por meio do teste de Kruskal-Wallis e Correlação de Spearman. Os resultados mostraram imunoexpressão para ambas as proteínas. Foi observada, uma elevada imunoexpressão para HIF-1 α, nos espécimes de periodontite e gengivites crônicas, em relação aos sítios saudáveis, porém, sem diferenças estatísticas entre elas (p>0,05). A imunoexpressão do VEGF demonstrou similaridade, entre os casos de periodontite, gengivite e gengiva saudável. Correlação positiva moderada e diferença estatisticamente significativa foram verificadas para as expressões do VEGF e HIF-1α, em gengivais saudáveis (r=0.529; p= 0.04). Desta forma, pode-se concluir que, possivelmente a via de ativação do HIF-1 α, está ativada na doença periodontal, podendo haver participação desta proteína, na patogênese e progressão da doença periodontal e que a ativação do VEGF, além de ser desencadeada via transcrição do HIF-1 α, pode ser também, influenciada por outros fatores adicionais, como, por exemplo, ação das endotoxinas bacterianas periodontopatogênicas
Avaliação do efeito anti-inflamatório e inibidor da perda óssea da metformina em ratos diabéticos com doença periodontal
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2018-06-19) Lima, Maria Laura de Souza; Araújo, Aurigena Antunes de; Vasconcelos, Roseane Carvalho; Araújo, Aurigena Antunes de; Lins, Ruthineia Diogenes Alves Uchoa; Dantas, Euler Maciel
Introdução: A doença periodontal é um agravo que acomete grande parte da população em todo mundo. Tem relação com diversas doenças, entre elas a diabetes mellitus, cujo tratamento de primeira escolha é a Metformina, hipoglicemiante oral. Novos estudos relatam efeitos pleiotrópicos advindos do uso da Metformina, como redução da reabsorção óssea, podendo ser alternativa interessante no auxílio do tratamento para a doença periodontal, assim nosso estudo se propôs a avaliar o efeito anti-inflamatório e inibidor da perda óssea em ratos com diabetes e doença periodontal. 2) Metodologia: Sessenta e três ratos machos Wistar sofreram a indução de Diabetes melitus através das aplicações de 40mg/kg, de streptozotocin (STZ), e depois indução de doença periodontal através de ligadura. Foram divididos em grupos e tratados com 50mg / kg, 100mg / kg e 200mg / kg de Metformina pela via oral. Após a eutanásia as maxilas dos animais foram analisadas através da histopatologia e a expressão das citocinas IL-1β e TNF-α obtidas a partir das gengivas. 3) Resultados: Os resultados mostraram uma tendência anti-inflamatória da Metformina, em especial no grupo de 100mg / kg, podendo vir a um efeito benéfico no tratamento da doença periodontal. 4) Conclusão: Os resultados sugerem que a MET tem uma ação redutora da inflamação e inibidora da perda óssea.
Efeitos da terapia fotodinâmica com aluminio – cloro ftalocianina sobre a peroxidação lipídica e produtos antioxidantes em tecidos inflamados animais
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2016-02-24) Vasconcelos, Roseane Carvalho; Costa, Antonio de Lisboa Lopes; ; http://lattes.cnpq.br/7688226005563390; ; http://lattes.cnpq.br/3188232526467649; Araújo, Aurigena Antunes de; ; http://lattes.cnpq.br/3531154240424211; Gurgel, Bruno Cesar de Vasconcelos; ; http://lattes.cnpq.br/4649601602612601; Nóbrega, Fernando José de Oliveira; ; http://lattes.cnpq.br/8597370276326959; Moraes, Maiara de; ; http://lattes.cnpq.br/0669925240476088
A terapia fotodinâmica (TFD) envolve a administração de um agente fotossensibilizador (FS) seguida pela aplicação do laser, com comprimento de onda adequado, resultando em uma sequência de processos fotoquímicos e fotobiológicos, que geram espécies reativas de oxigênio (EROs). Este estudo avaliou, os efeitos da TFD com nanoemulsão de alumínio-cloro ftalocianina (AlClFc) sobre os níveis de malondildeído (MDA), glutationa (GSH), superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx), que representam indicadores envolvidos no estresse oxidativo e defesas antioxidantes. Para tanto, o estudo utilizou 120 ratas da espécie Rattus norvegicus, raça Wistar, distribuídas em 5 grupos experimentais: Saudáveis (S), com doença periodontal (DP), com doença periodontal e tratamento com o FS (F), com doença periodontal e tratamento com o laser (L) e com doença periodontal e tratamento com TFD (FL). Foi utilizado um modelo experimental de doença periodontal (DP) induzida por ligadura. Após sete dias, da indução da DP, foram instituídos os tratamentos, conforme os grupos. No grupo tratado, com TFD, foi aplicado 40μl do FS (5μM), seguida da irradiação do laser diodo fosfeto de índio-gálio-alumínio (InGaAlP - 660nm, 100J/cm2). As ratas sofreram eutanásia no 7º e no 28º dia, após o tratamento. Os espécimes teciduais foram removidos para análises histológicas, ensaios bioquímicos e imuno-histoquímica. Os resultados histológicos exibiram, alterações inflamatórias, desorganização do tecido conjuntivo e perda óssea alveolar, nos grupos com DP induzida. Os ensaios demonstraram, que os níveis de MDA estavam mais elevados, nos grupos com DP induzida, que no grupo saudável. Não existindo diferenças estatísticas significantes (p>0,05). Níveis elevados de GSH foram encontrados nas ratas saudáveis, com diferenças estatísticas significativas, nos grupos L (p=0,028) e FL (p=0,028), quando comparados com o grupo DP. Imuno-histoquimicamente, a SOD apresentou maior imunomarcação nos grupos L e FL, comparados ao grupo saudável. Sem diferenças estatísticas significativas (p>0,05). GPx mostrou imunomarcação significativamente menor no grupo DP, comparado ao saudável (p=0,05) e no grupo F, comparado ao DP (p<0,05). Os resultados apresentados sugerem discreta participação da TFD mediada por nanoemulsão contendo AlClFc no estresse oxidativo. O protocolo utilizado, neste experimento, demonstrou maior influência da TFD sobre os mecanismos antioxidantes.
Effect of Dexamethasone-Loaded PLGA Nanoparticles on Oral Mucositis Induced by 5-Fluorouracil
(MDPI, 2021-01-04) Ribeiro, Susana Barbosa; Araújo, Aurigena Antunes de; Oliveira, Maisie Mitchele Barbosa; Silva, Alaine Maria dos Santos; Silva Júnior, Arnóbio Antônio da; Guerra, Gerlane Coelho Bernardo; Brito, Gerly Anne de Castro; Leitão, Renata Ferreira de Carvalho; Araújo Júnior, Raimundo Fernandes de; Garcia, Vinícius Barreto; Vasconcelos, Roseane Carvalho; Medeiros, Caroline Addison Carvalho Xavier de
Oral mucositis (OM) is characterized by the presence of severe ulcers in the oral region that affects patients treated with chemotherapy. It occurs in almost all patients who receive radiotherapy of the head and neck, as well as patients who undergo hematopoietic cell transplantation. The pathophysiology of OM is complex, and there is no effective therapy. The aim of this study was to evaluate the effect of dexamethasone-loaded poly(D,L-Lactic-co-glycolic) nanoparticles (PLGA-DEX NPs) on an OM model induced in hamsters. The NPs were synthesized using the emulsification-solvent evaporation method and were characterized by the size, zeta potential, encapsulation efficiency, atomic force microscopy, physicochemical stability, and the in vitro release. The OM was induced by the administration of 5-FU on the first and second days and mechanical trauma on the 4th day of the experiment. PLGA-DEX NPs were administered to treat OM. The animals were euthanized on the 10th day. Macroscopic and histopathological analyses were performed, measurement of malonaldehyde (MDA) and ELISA was used to determine the levels of IL-1β and TNF-α. Immunoexpressions of NF-κB, COX-2, and TGF-β were determined by immunohistochemistry, and qRT-PCR was used to quantify the gene expression of the GILZ, MKP1, and NF-κB p65. The PLGA-DEX NPs (0.1 mg/kg) significantly reduced macroscopic and histopathological scores, decreased MDA, TNF-α and IL-1β levels, immunostaining for NF-κB, COX-2, TGF-β, and suppressed NF-κB p65 mRNA expression, but increased GILZ and MKP1 expression
Fibrina rica em plaquetas injetável (I-PRF): caracterização celular, morfológica e proteica
(2018-08-09) Varela, Hugo de Almeida; Araújo, Aurigena Antunes de; Vasconcelos, Roseane Carvalho; ; ; ; Martins, Ana Rafaela Luz de Aquino; ; Silva, José Sandro Pereira da; ; Morais, Hecio Henrique Araújo de; ; Silveira, Renata Cimões Jovino;
Estudos experimentais demonstram o efeito da fibrina rica em plaquetas (PRF) nas técnicas de regeneração tecidual otimizando o processo de reparo; podendo ser utilizada na forma líquida (i-PRF). O objetivo dessa pesquisa foi determinar a composição celular do i-PRF, caracterizar sua morfologia a nível microscópico, investigar a expressão de proteínas envolvidas no processo de reparo e avaliar sua interação com um material biocerâmico a partir de um modelo in vitro. Materiais e métodos: Foram colhidas amostras sanguíneas de 15 voluntários humanos para comparação dos constituintes celulares entre o i-PRF e o sangue periférico. Amostras de i-PRF e de coágulos sanguíneos foram cultivadas in vitro durante 10 dias. O sobrenadante das amostras foi colhido nos intervalos 1h, 8h, 24h, 3 dias e 10 dias para quantificação dos fatores de crescimento PDGF-AB e VEGF por ELISA. Amostras foram tratadas histologicamente para caracterização morfológica e submetidas à marcação imuno-histoquímica para as proteínas IL-10, OC e TGF-β. Investigou-se a expressão gênica do fator de transcrição Colágeno tipo 1. Foram preparadas amostras do i-PRF misturadas com cerâmica bioativa granulada (HA/β-TCP) para avaliação da interação entre esses compostos através MEV. Resultados: Observou-se maior concentração de leucócitos (8.124 ± 1.419) e plaquetas (3.96x105 ± 0.72) no i-PRF em comparação ao sangue periférico (p <0.001), com uma maior proporção de linfócitos (60%) no i-PRF. Maiores níveis de VEGF foram liberados a partir do coágulo sanguíneo (1933 ± 704) em relação ao i-PRF (852 ± 376; p <0.001). Não foram observadas diferenças entre os níveis de PDGF-AB. Ensaio imuno-histoquímico demonstrou imunomarcação para TGF-β, IL-10 e Osteocalcina no grupo i-PRF. Análises por RT-PCR demonstraram aumento da expressão de Colágeno tipo 1 no grupo do i-PRF. Microscopicamente observou-se a formação de grandes aglomerados de plaquetas e fibrina e uma rede de fibrina em distribuição tridimensional espacial com a presença de linfócitos distribuídos de forma homogênea. As imagens por MEV apresentaram boa integração entre os grânulos de cerâmica e a malha de fibrina formada pelo i-PRF. Conclusões: Análises morfológicas revelaram que o processo de produção do i-PRF resulta em uma rede tridimensional de fibrina a qual incorpora plaquetas, leucócitos, colágeno tipo I, osteocalcina e fatores de crescimento. Assim, o i-PRF torna-se uma boa abordagem como um material líquido para ser associado a outros biomateriais.
Injectable platelet rich fibrin: cell content, morphological, and protein characterization
(Springer Science and Business Media LLC, 2018-07-12) Nascimento, Rubens Maribondo do; Varela, Hugo Almeida; Souza, Júlio C. M.; Araújo Júnior, Raimundo Fernandes de; Vasconcelos, Roseane Carvalho; Cavalcante, Rômulo dos Santos; Guedes, Paulo Marcos Matta; Araújo, Aurigena Antunes
Objectives The aim of the present study was to evaluate the blood cell content, morphological aspects, gene expression of type I collagen, and release of growth factors on an injectable platelet rich fibrin (i-PRF). Materials and methods Blood samples were collected from 15 volunteers to prepare i-PRF samples. Peripheral blood was used as a control group. Blood clot and i-PRF samples were cultured for 10 days. The supernatant of the samples was collected for ELISA immunoassay quantification of PDGF and VEGF growth factors over periods of 1, 8, 24, 72, and 240 h. I-PRF and blood clot samples were biologically characterized using histological and immunohistochemistry analysis for IL-10, osteocalcin, and TGF-β. Scanning electron microscopy (SEM) was used to inspect the fibrin network and distribution of blood platelets and leukocytes. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) method was used to evaluate gene expression for type I collagen. Results A higher concentration of platelets and lymphocytes was recorded in i-PRF than in peripheral blood (p < 0.05). The release of VEGF was higher in blood clot samples (1933 ± 704) than that for i-PRF (852 ± 376; p < 0.001). Immunohistochemistry showed upregulation of TGF-B, IL-10, and osteocalcin in the i-PRF group. RT-PCR showed increased type I collagen gene expression in i-PRF (p < 0.05). SEM images revealed agglomeration of platelets in some regions, while a fibrin networking was noticeable in the entire i-PRF sample. Conclusions Injectable platelet rich fibrin becomes a good approach for soft and mineralized tissue healing considering the formation of a three-dimensional fibrin network embedding platelets, leukocytes, type I collagen, osteocalcin, and growth factors. Indeed, the injectable platelet rich fibrin can be indicated in several medical applications regarding bioactivity, simplied technique, and flowable mixing with other biomaterials. Clinical relevance Morphological, cell, and protein characterization of platelet rich fibrin provides a better understanding of the clinical effects and improvement of clinical guidelines for several medical applications. Once well physicochemical and biologically characterized, the use of an injectable platelet rich fibrin can be extended to other applications in the field of orthopedics, periodontics, and implant dentistry on the repairing process of both soft and mineralized tissues
Photodynamic therapy using chloro-aluminum phthalocyanine decreases inflammatory response in an experimental rat periodontal disease model
(Elsevier, 2017-02) Araujo, Aurigena Antunes; Moraes, Maiara de; Vasconcelos, Roseane Carvalho; Longo, João Paulo Figueiró; Muehlmann, Luis Alexandre; Azevedo, Ricardo Bentes de; Araújo Júnior, Raimundo Fernandes de; Costa, Antonio de Lisboa Lopes
Background and Objective Emerging evidence suggests that photodynamic therapy (PDT) can exhibit immunomodulatory activity. The purpose of the present study was to analyse cytokine profiles after application of PDT in gingival tissues of rats with ligature-induced periodontal disease (PD). Study Design/Material and Methods Periodontal disease was induced through the introduction of a cotton thread around the first left mandibular molar, while the right side molars did not receive ligatures. After 7 days of PD evolution, ligatures were removed from the left side, and the animals were randomically divided into the following treatment groups: I, rats without treatment; II, rats received chloro-aluminum phthalocyanine (AlClPc); III, rats received low-level laser alone; and IV, rats received AlClPc associated with low-level laser (PDT). The animals were killed 7 days after the treatments, and the mandibles were histologically processed to assess morphological and immunohistochemical profile, while gingival tissues were removed for quantification of tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL-)1β and IL-10 expression (by ELISA). Results Histomorphological analysis of periodontal tissues demonstrated that PDT-treated animals show tissue necrosis, as well as lower TNF- α expression, compared to ligatured animals treated with AlClPc alone. Conclusions It was concluded that PDT using AlClPc entrapped in a lipid nanoemulsion may be useful in therapies, because of immunomodulatory effects that decreased the inflammatory response and cause tissue destruction.
Zirconia/hydroxyapatite (80/20) scaffold repair in critical size calvarial defect increased FGF-2, osteocalcin and OPG immunostaining and IL-10 levels
(American Journal of Translational Research, 2020-01-15) Vasconcelos, Roseane Carvalho; Ferreira, Camyla; Araújo, Eduarda Medeiros de; Motta, Fabiana Villela da; Delmonte, Mauricio Roberto Bomio; Araújo Júnior, Raimundo Fernandes de; Paiva, Daniel Felipe Fernandes; Pirih, Flavia Q.; Silva, José Sandro Pereira da; Chan, Alan B.; Cruz, Luis J.; Ishii, Makiko; Medeiros, Caroline Addison Carvalho Xavier de; Guerra, Gerlane Coelho Bernardo; Araújo, Aurigena Antunes de
The aim of this study was to characterize and evaluate zirconia/hydroxyapatite in a critical size calvarial defect model in rats. Zirconia/hydroxyapatite (80/20) scaffold was characterized by X-ray diffraction (XRD) and Scanning Electron Microscopy (SEM). Critical size (8 mm) calvarial defects were created in wistar rats (n=48) and divided into four groups (90 days): G0 Group: positive control; G1 Group: hydroxyapatite; G2 Group: Zirconia; G3 Group: Zirconia/hydroxyapatite (80/20). Calvaria were subjected to Micro CT, histological and immunohistochemical analyses (RANK, RANKL, OPG, osteocalcin and FGF-2). IL-1 beta, IL-10 and TNF-alpha levels were analyzed by Elisa Immunoassay. The XRD analysis confirmed the formation of a crystalline structure and SEM showed the presence of regions corresponding to Zirconia and Hydroxyapatite. The Micro CT showed increased bone volume (BV/TV) and bone mineral density (BMD) in the G3 group (P<0.05). In addition, discrete periosteal bone formation was found at the interface of the defect edge and the external surface of the scaffold in the G3 group, showing osteocytes inside and osteoblasts (P<0.05) with scarce mononuclear inflammatory cells (P<0.01) in the central region of the defect. The immunostaining was moderate for RANKL, Osteocalcin and FGF-2 in the G3 group (P<0.5), while it was intense for OPG (P<0.001). IL-1 beta levels were decreased and IL-10 levels increased (P<0.05). Zirconia/hydroxyapatite (80/20) scaffold repair in critical size calvarial defects increased bone density, osteoblast and osteoclast cell numbers, FGF-2, osteocalcin and OPG immunostaining and IL-10 levels

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