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Avaliação da estabilidade do plasmídeo pQE-30 e expressão do antígeno 503 de Leishmania i. chagasi em Escherichia coli M15 em diferentes concentrações de IPTG e temperaturas de cultivo
(2018-02-23) Ribeiro, Vitor Troccoli; Santos, Everaldo Silvino dos; ; ; Sousa Júnior, Francisco Canindé de; ; Vaz, Michelle Rossana Ferreira;
A leishmaniose visceral é uma doença infecto-parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania, podendo ser letal quando não há tratamento adequado. Estima-se que existem 12 milhões de pessoas infectadas pela doença, mas infelizmente não há nenhuma vacina capaz de prevenir a doença. Ademais, o tratamento da doença apresenta alto custo e elevada toxicidade. Diante disso, deve-se destacar a pesquisa de componentes antigênicos purificados que possam ser utilizados como ferramenta para obtenção de vacinas ou testes para diagnóstico específico. Neste contexto, o presente trabalho tem como objetivo avaliar a influência da concentração de IPTG durante a indução e a influência da temperatura de cultivo na expressão do antígeno 503 e na estabilidade do plasmídeo pQE-30 em Escherichia coli. Todos os ensaios foram realizados em incubador rotativo e feitos em duplicata. Primeiramente foram realizados cultivos induzidos com IPTG nas concentrações de: 0,01 mM; 0,1 mM; 0,5 mM; 1,0 mM e 1,5 mM na temperatura de 37 °C. A concentração de indutor não afetou a estabilidade do plasmídeo e quando induzido com 1,0 mM, a expressão de antígeno 503 máxima foi de 0,101 ± 0,004 g/L. Foi possível verificar que a menor concentração de IPTG utilizada foi o suficiente para conseguir a expressão da proteína recombinante. Em seguida, a concentração de IPTG foi fixada em 1,0 mM e avaliadas as temperaturas de cultivo de 27, 32 e 42 °C. Estes ensaios foram comparados com o ensaio realizado anterior a 37 °C. A temperatura influenciou a estabilidade do plasmídeo, sendo que quanto menor a temperatura de cultivo, maior estabilidade. De acordo com os resultados, foi possível verificar que a temperatura de 37 °C obteve maior expressão do antígeno 503, sendo considerada portanto, as condições ótimas para produção de antígeno 503 em incubador rotativo.
Efeitos da estratégia de indução na produção de antígeno 503 de Leishmania infatum chagasi em E. coli recombinante
(Universidade Federal de Campina Grande (UFCG), 2014) Santos, Everaldo Silvino dos; Sousa Júnior, Francisco Canindé de; Silva, Valéria Nogueira da; Vaz, Michelle Rossana Ferreira; Chibério, Abimaelle Silva; Dias, Emanuele Cardoso; Ribeiro, Vitor Troccoli; Macedo, Gorete Ribeiro de
O presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito de duas estratégias de indução (pulso e adição gradual) com IPTG na expressão do antígeno 503 de Leishmania infatum chagasi em E. coli. No ensaio em batelada, o IPTG foi adicionado ao cultivo na concentração final de 1 mM. Na batelada alimentada, 0,2 mM do indutor foi adicionado a cada hora, totalizando uma concentração final de 0,8 mM. O procedimento de indução por pulsos de IPTG indicou um incremento de aproximadamente 49% na produção de biomassa quando comparado em batelada. Pode-se concluir que a estratégia de indução empregando pulsos de IPTG (batelada alimentada) foi mais eficaz na expressão do antígeno 503 quando comparado à estratégia de batelada simples. A eficácia da estratégia de indução foi confirmada por eletreforese
Estudo do Cultivo de dois clones de Escherichia coli recombinantes (eIF, LACK) para a Expressão de Antígenos da Leishmania chagasi
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2008-02-25) Vaz, Michelle Rossana Ferreira; Macedo, Gorete Ribeiro de; Pedrini, Márcia Regina da Silva; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4797345U9; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4788057U7; ; http://lattes.cnpq.br/8430871804598863; Gouveia, Ester Ribeiro; ; http://lattes.cnpq.br/6291196494488690; Santos, Everaldo Silvino dos; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799564Y2
Com advento da tecnologia do DNA recombinante, a expressão de proteínas recombinantes torna-se uma ferramenta importante nos estudos da estrutura, função e identificação de novas proteínas, principalmente com finalidades terapêuticas. A Escherichia coli tem sido o procarioto predominante nos estudos da engenharia genética devido à riqueza de informações a respeito do seu metabolismo. Apesar do avanço expressivo dos estudos da biologia molecular e da imunologia das infecções, não existe, atualmente, nenhuma droga profilática capaz de prevenir o calazar. Desta forma, existe uma grande necessidade de identificação de antígenos específicos para o desenvolvimento de vacinas e kits para diagnósticos contra a Leishmaniose visceral. Neste contexto, este trabalho objetivou estudar a expressão de antígenos recombinantes da Leishmania chagasi durante o cultivo de Escherichia coli em incubador rotativo (shaker). Um primeiro conjunto de ensaios foi realizado com o objetivo de se conhecer o comportamento cinético do crescimento dois clones recombinantes (eIF, LACK) em duas diferentes composições de meios (2xTY, TB) suplementados por antibióticos, sem adição de IPTG. Na segunda etapa dos ensaios, foi realizado o procedimento de indução por IPTG, a fim de verificar a influência da composição dos meios testados na expressão das proteínas recombinantes. Com base nos resultados obtidos, pode-se observar que a elevada complexidade do meio de cultivo favoreceu a cinética de crescimento dos clones recombinantes (eIF,LACK), no entanto, ao se tratar dos ensaios submetidos ao procedimento de indução por IPTG, a elevada complexidade do meio de cultivo não favoreceu a expressão das proteínas recombinantes. Por outro lado, foram obtidos resultados positivos para todos os clones recombinante (eIF, LACK) testados, confirmada através do perfil eletroforético
Influence of culture medium on the production of eif antigen from Leishmania chagasi in recombinant Escherichia coli
(Sociedade Brasileira de Microbiologia, 2011-12) Santos, Everaldo Silvino dos; Vaz, Michelle Rossana Ferreira; França, Ricardo Luiz Soares de; Andrade, Sirtys Santos Lessa de; Sousa Junior, Francisco Canindé de; Martins, Daniella Regina Arantes; Macedo, Gorete Ribeiro de
With the advent of recombinant DNA technology, recombinant protein expression has become an important tool in the study of the structure, function and identification of new proteins, especially those with therapeutic functions. Escherichia coli has been the predominant prokaryote used in genetic engineering studies due to the abundance of information about its metabolism. Despite significant advances in molecular biology and immunology of infections, there are as yet no prophylactic drugs capable of preventing visceral leishmaniasis. It is therefore important to identify specific antigens in order to develop vaccines and diagnostic kits against this disease. The objective of this study was to evaluate the influence of culture medium on the production of eIF antigen from Leishmania chagasi in recombinant Escherichia coli. An induction procedure using IPTG was carried out in a series of trials, to observe the influence of culture medium (2xTY, TB) under expression of the recombinant eIF protein. Results showed that recombinant protein expression was associated to growth and that the highest eIF antigen expression was obtained in the 2xTY medium
Influência das condições de cultivo na produção de antígenos recombinantes de Leishmania i. chagasi utilizando Escherichia coli M15 cultivada em incubador rotativo e biorreator
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2011-12-29) Vaz, Michelle Rossana Ferreira; Macedo, Gorete Ribeiro de; Salha, Daniella Regina Arantes Martins; ; http://lattes.cnpq.br/3695151190501921; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4788057U7; ; http://lattes.cnpq.br/8430871804598863; Porto, Ana Lúcia Figueiredo; ; http://lattes.cnpq.br/4989617783837981; Santos, Everaldo Silvino dos; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799564Y2; Rocha, Maria Valderez Ponte; ; http://lattes.cnpq.br/0639546287060338
A Escherichia coli é um dos hospedeiros mais utilizados para produção de proteínas recombinantes tanto em escala de laboratório como em escala industrial desde o advento da tecnologia do DNA recombinante. Apesar do avanço expressivo dos estudos da biologia molecular e da imunologia das infecções, não existe, atualmente, nenhuma droga profilática capaz de prevenir o calazar. Desta forma, existe uma grande necessidade de identificação de antígenos específicos para o desenvolvimento de vacinas e kits para diagnósticos contra a Leishmaniose visceral. Com base no exposto, o presente trabalho tem como foco principal avaliar a influência das condições de cultivo na produção dos antígenos de Leishmania i. chagasi em cultivos realizados em incubador rotativo e biorreator. Para atingir o objetivo proposto, vários ensaios foram realizados a fim de se avaliar o comportamento cinético dos clones (648, 503) de Leishmania i. chagasi em duas diferentes composições de meio (2xTY, TB), com e sem adição de indutor em incubador rotativo. Para melhorar a expressão, ensaios foram conduzidos em biorreator de bancada com as melhores condições obtidas em incubador rotativo, além da avaliação da influência da velocidade de agitação. Com base nos resultados obtidos, pode-se observar que a elevada complexidade do meio de cultivo favoreceu a cinética de crescimento dos clones (648, 503), no entanto, ao se tratar dos ensaios submetidos ao procedimento de indução por IPTG, a elevada complexidade do meio de cultivo não favoreceu a expressão das proteínas recombinantes. Pode-se observar que a expressão dos antígenos 648 e 503 apresentam um comportamento associado ao crescimento e que em termos de localização, as proteínas 648 e 503, são armazenadas intracelularmente. A lactose pode ser o indutor mais adequado na expressão das proteínas tendo em vista os fatores, custo, toxicidade e estabilidade. A elevada agitação pode aumentar o crescimento celular do clone 503, entretanto, pode não acarretar em altas concentrações da proteína de interesse. Por outro lado, foram obtidos resultados positivos para todos os clones recombinantes (648, 503) testados, confirmada através do perfil eletroforético
Interação de microorganismos na solubilização de fósforo e potássio de rochas para produção de biofertilizantes
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-05-03) Silva, Valéria Nogueira da; Macedo, Gorete Ribeiro de; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4788057U7; ; http://lattes.cnpq.br/3146107118411604; Santos, Everaldo Silvino dos; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799564Y2; Pagnoncelli, Maria Giovana Binder; ; http://lattes.cnpq.br/1360308643397232; Lyra, Maria do Carmo Catanho Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/1927568921068851; Vaz, Michelle Rossana Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/8430871804598863
A agricultura atual se baseia no uso intensivo de fertilizantes industrializados, por sua resposta rápida, porém traz consequências danosas ao ambiente, e faz-se necessário o uso de insumos modernos. Uma alternativa é o uso de biofertilizantes de rochas na agricultura, um produto de fácil manuseio, com efeito residual maior e não agride o meio ambiente. O objetivo do estudo foi avaliar a inoculação e co-inoculação de diferentes microrganismos na solubilização de fósforo e potássio de rochas moídas avaliando o melhor desempenho microbiano(s) na produção de biofertilizantes comparando com as rochas puras nas propriedades químicas do solo e, verificar o efeito da inoculação da bactéria Paenibacillus polymyxa na absorção dos minerais solubilizados no desenvolvimento do feijão caupi (Vigna unguiculata [L.] Walp.). O primeiro bioensaio foi conduzido em Laboratório (UFRN) por 72 dias em Placas de Petri, onde o pó de rocha era acrescido de 10% de enxofre e inoculados e co-inoculados com suspensão bacteriana de Paenibacillus polymyxa cultivada em meio caldo triptona de soja, Ralstonia solanacearum em meio Kelman, Cromobacterium violaceum em meio Luria-Bertani e Acidithiobacillus thiooxidans em meio Tuovinen e Kelly, e os fungos Penicillium fellutanum e Tricoderma humatum em meio contendo extrato de malte. A cada 12 dias, amostras eram retiradas a fim de construir uma curva de liberação dos minerais. O segundo bioensaio foi conduzido em casa de vegetação da Empresa de Pesquisa Agropecuária do Rio Grande do Norte, onde utilizou-se 10 kg do Argissolo Amarelo Distrófico, por vaso, com adição dos tratamentos super fosfato simples (SS), cloreto de potássio (KCl), rocha pura, biofertilizantes nas doses 40, 70, 100 e 200% da recomendação para SS e KCl, e uma testemunha, inoculados ou não com a bactéria P. polymyxa. Foram utilizadas sementes da caupi BRS Potiguar e co-inoculadas com suspensão bacteriana de Bradyrhizobium japonicum e P. polymyxa. A primeira colheita foi aos 45 dias de plantio avaliando a matéria seca da parte aérea (MSPA), teores de macronutrientes (N, P, K, Ca, Mg,) e micronutrientes (Zn, Fe, Mn) na MSPA. A segunda colheita aos 75 dias avaliando teores de macro e micronutrientes na planta e no solo, e a capacidade máxima de adsorção de P (CMAP) no solo. Os resultados mostraram que houve sinergismo nas co-inoculações com P. polymyxa+R. solanacearum e, P. polymyxa+C. violaceum com maiores solubilizações de K e P, respectivamente, e melhor tempo de solubilização aos 36 dias. O pH foi mais reduzido nos biofertilizantes de maiores doses, e houve melhoras com sua adição para P na maior dose. Houve redução significativa da CMAP com o aumento da dose do biofertilizante. Houve efeito da fertilização na absorção, com melhoras para P, K e MSPA com SS+KCL, e N, Ca e Mg para biofertilizantes. De modo geral, o P. polymyxa não influenciou na absorção dos elementos na planta. Para Ca e K houve melhoras com SS+KCl, e para Mg com rocha pura. O fertilizante químico foi significativamente superior para peso e número de grãos, sem a presença do P. polymyxa. Na presença da bactéria, biofertilizantes e fertilizante químico apresentaram valores positivos em relação à rocha e testemunha. Os dados evidenciaram que as rochas e os biofertilizantes podem suprir a necessidade de nutrientes às plantas revelando-se como potencial para uma agricultura sustentável
Optimization of culture medium for cell growth and expression of 648 antigen from Leishmania infantum chagasi in recombinant Escherichia coli M15
(BioMed Central Ltd, 2014-11-20) Santos, Everaldo Silvino dos; Vaz, Michelle Rossana Ferreira; Sousa Junior, Francisco Canindé de; Costa, Letícia Maia Resende; Martins, Daniella Regina Arantes; Macedo, Gorete Ribeiro de
Visceral leishmaniasis is a potentially fatal disease caused by Leishmania infantum chagasi in the New World. Anti-leishmanial treatment is problematic because antileishmanial drugs are toxic and costly and drug resistance is emerging. Moreover, there is no effective and safe vaccine approved for human use against any form of leishmaniasis. It seems likely that both a subunit vaccine and an optimized diagnostic test would benefit from the production of recombinant antigens. However, for recombinant protein production, the composition of the cell growth medium must be carefully formulated and monitored, because it may have significant metabolic effects on both the cells and protein expression. Thus, the aim of this study was to optimize the culture medium for cell growth and the expression of the 648 antigen from Leishmania i. chagasi in recombinant Escherichia coli M15. The induction allowed the expression of the 648 antigen; this was confirmed by electrophoresis, which showed a protein with a molecular mass of 24 kDa. The results showed that the higher cell concentration obtained in TB medium can be explained by the larger number of components such as amino acids and vitamin precursors contained in this complex medium, as well as glycerol as a carbon and energy source. Acetic acid excretion, detected at the end of fermentation, resulted in an inhibitory effect for both cell growth and protein production, because this was above the concentration limit of 0.9 g L−1
Produção de celulases por Aspergillus fumigatus através da fermentação em estado sólido e recuperação e purificação por extração micelar em duas fases aquosas
(2018-02-22) Oliveira Júnior, Sérgio Dantas de; Santos, Everaldo Silvino dos; Macedo, Gorete Ribeiro de; ; ; ; Sousa Júnior, Francisco Canindé de; ; Viana, Marcelino Gevilbergue; ; Vaz, Michelle Rossana Ferreira; ; Santos, Sharline Florentino de Melo;
Ameaças à sustentabilidade decorrente do desenvolvimento industrial, a dependência energética e a demanda exponencial pela produção de alimentos têm levado ao crescente interesse de fontes alternativas e renováveis de energia como, por exemplo, a biomassa vegetal. Neste cenário, a viabilização do etanol a partir de biomassa (etanol de segunda geração (2G)), que não gere competição por terra cultivável, tais como bagaço de cana-de-açúcar, fibra coco e o pedúnculo de caju. A hidrólise enzimática é etapa importante na produção de etanol 2G. Entretanto, o custo de produção das celulases ainda é um gargalo no processo. Neste cenário, a viabilização da utilização dessas biomassas neste trabalho teve como objetivo avaliar a de produção celulases utilizando resíduos provenientes da indústria brasileira, o bagaço de cana-de-açúcar, fibra de coco e a fibra do pedúnculo de caju, para produção de celulases por fermentação em estado sólido (FES) através de um planejamento experimental com o microrganismo Aspergillus fumigatus. Inicialmente, as três fibras lignocelulósicas foram caracterizadas e usadas para se avaliar o potencial de produção de celulases por FES. Em seguida, aplicou-se os pré-tratamentos alcalinos (NaOH e Ca(OH)2) no resíduo que apresentou as maiores atividades celulolíticas (CMCase e FPase) produzidas e o teor de proteínas totais. O extrato enzimático produzido foi utilizado para produção de nanocristais de celulose (NNC). A recuperação e a purificação das celulases foi realizada usando-se o Sistema Micelar de Duas Fases Aquosas (SMDFA) com o Triton X-114 como surfactante. Os resultados da caracterização mostraram a seguinte composição: bagaço de cana-de-açúcar (39,25% ± 5,49 de celulose; 25,20% ± 1,13 de hemicelulose e 18,82% ± 0,01 de lignina), fibra de coco (36,23% ± 0,09 de celulose; 27,79% ± 0,37 de hemicelulose e 30,23% ± 0,12 de lignina); e fibra do pedúnculo de caju (21,02% ± 0,31 de celulose; 11,50% ± 1,13 de hemicelulose e 45,84% ± 1,28 de lignina). Em condições otimizadas obteve-se as atividades de FPase (0,64 UI/g) e CMCase (4,28 UI/g) e proteínas totais de 0,28 mg/mL. A atividade de CMCase foi estável à 60 °C apresentando atividade relativa de 70%, enquanto que FPase apresentou uma estabilidade de 30% à 50 °C. O bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado com NaOH apresentou teor de celulose de 56,63% ± 0,10; teor de hemicelulose de 19,23% ± 1,69 e teor de lignina de 9,92% ± 1,19. Os nanocristais produzidos apresentaram a melhor forma e tamanho após 48h de hidrólise, com formato circulares. O uso do SMDFA permitiu recuperar e purificar a enzima com coeficiente de partição (K) de 9,33 para a enzima CMCase e de 5,00 para a enzima FPase ambas à 60 °C. O fator de purificação para CMCase foi 10,89 e para a FPase de 0,65. No presente estudo, as condições de fermentação em estado sólido foram otimizadas para a produção de celulases por A. fumigatus. As enzimas foram aplicadas na hidrólise enzimática para a geração de nanocristais de celulose com êxito, e a técnica de purificação aplicada nas celulases pode ser considerada uma alternativa promissora.
Produção e purificação de enzimas quitosanolíticas produzidas por microrganismo isolado no Nordeste Brasileiro
(2015-03-23) Araujo, Nathalia Kelly de; Santos, Everaldo Silvino dos; ; http://lattes.cnpq.br/4330639792072559; ; http://lattes.cnpq.br/3502393944021960; Assis, Cristiane Fernandes de; ; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; ; Kamimura, Eliana Setsuko; ; Vaz, Michelle Rossana Ferreira;
Uma cepa produtora de quitosanase foi isolada e identificada como Bacillus cereus C-01. A partir disso a purificação da enzima e sua caracterização bioquímica foram estudadas. Para purificação foi utilizado a resina da linha streamline Dietilaminoetil (DEAE) e coluna de vidro (2,6 cm x 30,0 cm) em sistema de Adsorção em Leito Expandido (ALE). As condições para a purificação da quitosanase foram otimizadas estatisticamente através de um Planejamento Composto Central. As variáveis que influenciaram significativamente os parâmetros fator de purificação (P) e rendimento da enzima (Y) foram determinadas. As análises estatísticas mostraram que as melhores condições para o máximo P foram 150 cm.h-1 (velocidade de aplicação da amostra/carga), 6,0 cm de altura do leito fixo e 7,36 cm de altura do distribuidor. Em condições otimizadas, a enzima mostrou ligar-se a resina na mesma medida usando caldo clarificado e não clarificado (0,32 e 0,3 U/g adsorvente, respectivamente). A fração recuperada após a eluição exibiu 31% de rendimento com um aumento de 1,35 vezes na atividade específica em relação ao inicial. Se analisada apenas fração eluída com NaCl 0,3 M é possível encontrar um fator de purificação de 1,75. A enzima purificada apresentou estabilidade entre as temperaturas de 30-55ºC durante 60 minutos, pH de 5-8 por 24 horas, e apresentou máxima atividade em pH 5,5 e temperatura de 55ºC. Os íons de Cu2+, Fe2+ e Zn2+ foram inibitórios para a quitosanase. Em contraste, a enzima foi significativamente ativada por Mn2+. Os resultados demonstraram que é possível purificar múltiplas proteínas, a partir de um extrato bruto sem qualquer pré-tratamento, com um processo de purificação econômico e de um único passo.
Production of recombinant 503 antigen of Leishmania infantum chagasi using cultivation in batch and fed-batch
(BMC Proceedings, 2014-10-10) Santos, Everaldo Silvino dos; Vaz, Michelle Rossana Ferreira; Sousa Junior, Francisco Canindé de; Padilha, Carlos Eduardo de Araújo; Martins, Daniella Regina Arantes; Macedo, Gorete Ribeiro
Visceral leishmaniasis is an infecto-parasitarian disease caused by obligatory intracellular protozoa belonging to the genus Leishmania, and might be lethal since there is no precocious diagnosis and proper treatment. Despite the considerable effort, there is no effective and safe vaccine for human use [1]. Genetically modified micro-organisms are used industrially in general for production of hormone, antibiotics and proteins. In the production of heterologous molecules, both the expression and the production step are important [2]. Therefore, the study of cultivation conditions in bioreactor plays an important role for the process viability of batch and fed-batch [3]. Thus, the aim of this work was to study strategies for production of the 503 antigen of Leishmania infantum chagasi using cultivation in batch and fed-batch
Production, recovery, and purification of recombinant 503 antigen of Leishmania infantum chagasi using expanded bed adsorption chromatography
(BMC, 2014-10-01) Santos, Everaldo Silvino dos; Sousa Junior, Francisco Canindé de; Vaz, Michelle Rossana Ferreira; Padilha, Carlos Eduardo de Araújo; Martins, Daniella Regina Arantes; Macedo, Gorete Ribeiro de
Visceral leishmaniasis, a disease caused by Leishmania infantum chagasi, represents a major public health problem in many areas of the world. Despite the considerable effort, there is no effective and safe vaccine for human use [1]. Some authors have reported that as much as 50% of overall costs in the biotechnology industries are related to downstream processing. Thus, the development of new and economically advantageous purification methods is a challenge [2]. Expanded bed adsorption (EBA) is an innovative chromatography technology that allows the adsorption of target proteins directly from unclarified feedstock. EBA technology combines solid-liquid separation with an adsorption step in a single-unit operation, aiming at increased overall yield, reduced operational time, and less capital investment and consumables [3,4]. Thus, the aim of this work was to purify the 503 antigen of Leishmania i. chagasi directly from crude feedstock using EBA chromatography
Recovery and purification of recombinant 503 antigen of Leishmania infantum chagasi using expanded bed adsorption chromatography
(Elsevier, 2015-04-01) Santos, Everaldo Silvino dos; Sousa Junior, Francisco Caninde de; Vaz, Michelle Rossana Ferreira; Padilha, Carlos Eduardo de Araújo; Chibério, Abimaelle Silva; Martins, Daniella Regina Arantes; Macedo, Gorete Ribeiro de
Visceral leishmaniasis, a disease caused by Leishmania infantum chagasi, represents a major public health problem in many areas of the world. However, there is currently no vaccine for human use. The aim of this work was to purify the 503 antigen of Leishmania i. chagasi directly from unclarified Escherichia coli feedstock through expanded bed adsorption (EBA) chromatography. Batch experiments were performed to optimize the adsorption and elution conditions of the antigen onto a STREAMLINETM Chelating resin using two central composite rotatable designs (CCRD). The results showed that the optimal binding con- ditions of the 503 antigen were pH 8.0 in the presence of 2.4 M NaCl. For the elution of the target protein, the optimized conditions included the presence of 600.0 mM imidazole. The adsorption isothermal data of the 503 antigen were fitted to the Langmuir adsorption isotherm. The EBA experiment successfully recovered 59.2% of the 503 antigen from the unclarified E. coli homogenate with a purification factor of 6.0
Selection, isolation and growth kinetic study of a bacterial consortium obtained from the potengi mangrove in the presence of crude
(Brazilian Journal of Petroleum and Gas, 2011) Santos, Everaldo Silvino dos; Costa, C. C.; Costa, J. G. da; Vaz, Michelle Rossana Ferreira; Macedo, Gorete Ribeiro de
The selection, isolation and kinetic study of a bacterial consortium obtained from a sample of soil from the Potengi mangrove, located in the city of Natal, Rio Grande do Norte, Brazil, has been carried out using the enrichment culture technique to observe aspects such as the evaluation of main growth parameters. The kinetic study used a rotary incubator shaker at 150rpm, under 30°C. The bacterial consortium isolated from the estuary of the Potengi River showed a good acclimation in minimum mineral medium with 1% (v/v) of oil. The cell concentration reached 2.55 g/L at 16h of cultivation and surface tension dropped. The maximum productivity in cells obtained was of 0.3 g/L.h, the specific velocity of growth was of 0.075h-1, with a generation time (tg) of 9.24h. This study seeks to demonstrate that the consortium can be used as inoculants in biological treatments, capable of reducing the waste’s degradation time

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