Navegando por Autor "Zatti, Matheus da Silva"
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Dissertação LAMP de região multicópia para o rápido diagnóstico da histoplasmose(2018-12-17) Zatti, Matheus da Silva; Theodoro, Raquel Cordeiro; Arantes, Thales Domingos; ; ; ; Araújo, Joselio Maria Galvão de; ; Teixeira, Marcus de Melo;A histoplasmose é uma doença fúngica mundialmente distribuída e que afeta principalmente pacientes com deficiência do sistema imunológico. No Brasil, a taxa de mortalidade da histoplasmose pode chegar à 72%, devido, principalmente, às dificuldades de diagnóstico da doença, dentre os quais, o cultivo é o diagnóstico de escolha, podendo levar até 8 semanas para obtenção de um resultado conclusivo. Os exames histopatológicos, por outro lado, são incapazes de identificar o patógeno observado na amostra, apesar de ser um indicativo de infecção. Os imunoensaios tem sua sensibilidade influenciada pelo estado imunológico do paciente e forma clínica da doença, além de apresentarem, frequentemente, reação cruzada com outros fungos e bactérias. Os métodos moleculares, por sua vez, não são acessíveis para muitos laboratórios e exigem mão de obra especializada. Visto isso, esse projeto teve como objetivo desenvolver um ensaio de LAMP (Loop-mediated Isothermal Amplification) para detecção de Histoplasma capsulatum em amostras clínicas. Devido ao caráter isotermal, esta reação dispensa o uso de termocicladores, além de possibilitar revelar o resultado de forma alternativa ao gel de agarose. O LAMP foi desenvolvido para detectar a região ITS do genoma do patógeno, adquirindo boa sensibilidade (limite de detecção de 1 fg/µL), sendo capaz de detectar todas as variantes genéticas testadas e permitindo o diagnóstico diretamente em amostra de sangue enriquecida com leveduras, sem a necessidade de extração de DNA.TCC Métodos de amplificação isotérmica e algumas aplicações(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2016-11-29) Zatti, Matheus da Silva; Lanza, Daniel Carlos Ferreira; Moreira, Susana Margarida GomesA criação da técnica de PCR foi um marco para a ciência, impulsionando o crescimento tecnológico e abrindo novas possibilidades na área de diagnóstico de doenças humanas, sobretudo doenças de caráter infeccioso. Mas o advento dessa nova tecnologia deixava restrito o seu uso, quase que exclusivamente, aos laboratórios de pesquisa e centros especializados em biologia molecular, devido à sua dependência de aparelhos onerosos e específicos e à complexidade dos procedimentos realizados. Conforme o conhecimento em biologia molecular avançou e novas tecnologias foram surgindo, as limitações atreladas à técnica de PCR também foram alvos de incrementos. Dessa forma, desde a década de 1990, poucos anos após a criação da técnica de PCR, novas abordagens foram criadas, permitindo que a reação fosse realizada em condições isotérmicas e com menor necessidade de aparelhos específicos.Desde a década de 1990, diversas técnicas de amplificação isotérmica foram criadas e aplicadas no contexto do diagnóstico de doenças infecciosas, dentre elas: NASBA™ (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification), 3SR (Self-Sustained Sequence Replication), SDA (Strand Displacement Amplification), RCA (Rolling Circle Amplification), HDA (HelicaseDependent Amplification), CPA (Cross Priming Amplification), PSR (Polymerase Spiral Reaction) e LAMP (Loop-Mediated Isothermal Amplification). Estas técnicas representam uma gama de alternativas e novos conceitos de amplificação de ácidos nucleicos. Nesta revisão daremos um destaque especial para a LAMP, uma técnica altamente sensível e específica, cujos esforços destinados ao seu aperfeiçoamento estão criando novos métodos de revelação da reação e novas tecnologias para tornar a técnica cada vez mais simples, eficiente e menos onerosa.