Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
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Tese Produção e caracterização de quitooligossacarídeos produzidos pelo fungo Metarhizium anisopliae e avaliação da citotoxicidade em células tumorais(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2010-01-18) Assis, Cristiane Fernandes de; Santos, Everaldo Silvino dos; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799564Y2; ; http://lattes.cnpq.br/0034694007210837; Moura, Maria de Fátima Vitória de; ; http://lattes.cnpq.br/2959800336802498; Kamimura, Eliana Setsuko; ; http://lattes.cnpq.br/8839348384607836; Goncalves, Luciana Rocha Barros; ; http://lattes.cnpq.br/2577657690021566; Rodrigues, Sueli; ; http://lattes.cnpq.br/5599017990318989A quitosana é um polímero natural, biodegradável, não tóxico e de alta massa molecular obtido a partir de animais marinhos, insetos e microrganismos. Os oligômeros de glicosamina (GlcN) e N-acetilglicosamina (GlcNAc) têm atividades biológicas interessantes, incluindo efeitos antitumorais, atividade antimicrobiana, antioxidante entre outras. A alternativa proposta por este trabalho foi estudar a viabilidade de produção de quitooligossacarídeos utilizando um extrato bruto de enzimas produzidas pelo fungo Metarhizium anisopliae. A hidrólise da quitosana foi realizada em diferentes tempos, de 10 a 60 minutos para a produção de quitooligossacarídeos e a detecção e quantificação foi realizado pela Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. A avaliação da citotoxicidade dos oligômeros de quitosana foi realizada em células tumorais (HepG2 e HeLa) e não tumoral (3T3). As células foram tratadas durante 72 horas com os oligômeros e a viabilidade celular foi feita usando o método do MTT. A produção de oligômeros de quitosana teve maiores rendimentos durante 10 minutos de hidrólise, os pentâmeros apresentaram concentração de 0,15 mg/mL, porém os hexâmeros, que apresentam maior interesse pelas suas propriedades biológicas, só foram detectados com 30 minutos de hidrólise apresentando uma concentração de 0,004 mg/mL. Um estudo visando avaliar as atividades biológicas dos QCOS entre elas a citotoxicidade em células tumorais e normais e vários testes de atividade antioxidante in vitro entre oligômeros puros de quitosana e a mistura dos oligômeros produzidos pelo extrato bruto enzimático foi realizado. A glicosamina foi o composto com a maior toxicidade dentre os oligômeros puros, apresentando valores de IC50 0,30; 0,49; 0,44 mg/mL para células HepG2, HeLa e 3T3, respectivamente. O seqüestro do ânion superóxido foi a principal atividade antioxidante mostrada pelos QCOS. Sendo que essa atividade também foi dependende da composição dos hidrolisados de quitosana. Os oligômeros produzidos por hidrólise durante 20 minutos foram analisados quanto à capacidade de inibir células tumorais mostrando inibição da proliferação apenas nas células HeLa, não apresentando nenhum efeito em células HepG2 e células de fibroblastos (3T3)Tese Desenvolvimento de nanosistemas farmacêuticos para terapia gênica(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2011-03-14) Veríssimo, Lourena Mafra; Egito, Eryvaldo Sócrates Tabosa do; Lima, Lucymara Fassarela Agnez; ; http://lattes.cnpq.br/1083882171718362; ; http://lattes.cnpq.br/6907806915889763; ; http://lattes.cnpq.br/9173400981540256; Fattal, Elias; Teixeira, Helder Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/6652867749152426; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; ; http://lattes.cnpq.br/2929963416385218; Jerônimo, Selma Maria Bezerra; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785584A3&dataRevisao=nullA terapia gênica é um dos maiores desafios propostos pela pesquisa pós-genômica e se baseia na transferência de material genético a uma célula, tecido ou órgão com o intuito de curar ou melhorar o estado clínico do paciente. Em sua forma mais simples, a terapia gênica consiste na inserção de genes funcionais em células com genes defeituosos objetivando substituir, complementar ou inibir esses genes causadores de doenças. Para que o DNA exógeno seja expresso em uma população celular faz-se necessária a sua transferência até o local de ação. Assim, é necessário criar veículos, que transportem e protejam o DNA até que este chegue a uma população celular alvo. Os obstáculos encontrados com a utilização de vetores virais têm proporcionado o interesse no desenvolvimento de vetores não-virais, por serem fáceis de produzir, apresentarem estabilidade controlável e facilitarem a transfecção gênica. O objetivo deste trabalho foi avaliar dois diferentes vetores não virais, lipossomas e nanoemulsões catiônicos, e sua possível utilização na terapia gênica. Para isso, foram utilizados lipídeos catiônicos e co-tensoativos na produção dos dois sistemas. As nanoemulsões foram produzidas pelo método de sonicação e compostas por Captex® 355; Tween® 80; Spam® 80; lipídeo catiônico, Estearilamina (EA) ou N-[1-(2,3-Dioleoiloxi)propil]-N,N,Ntrimetilamonio metilsulfato (DOTAP); e água ultra-pura (Milli-Q®). Estes sistemas foram caracterizados quanto ao tamanho médio de gotícula, índice de polidispersão (PI) e potencial zeta. Avaliou-se ainda a estabilidade dos sistemas e suas capacidades de compactação do material genético. Os lipossomas foram preparados a partir do método de hidratação do filme e compostos por DOTAP, Dioleilfosfatidiletanolamina (DOPE), na presença ou ausência de Rodaminafosfatidiletanolamina (PE-Rodamina) e do conjugado Ácido Hialurônico DOPE (HA-DOPE). Estes sistemas foram caracterizados da mesma forma que as nanoemulsões e também foram avaliados estabilidade, influência do tempo, tamanho de material genético e presença ou ausência de endotoxinas na formação dos lipoplexos. Os resultados obtidos permitem afirmar que os sistemas são promissores para posterior utilização na terapia gênica e que esta área promete ser uma área fértil de pesquisa científica e clínica por muitos anos, e provavelmente se tornará uma prática clínica importante neste século. No entanto, da possibilidade à prática existe um longo caminho a percorrerTese Identificação de genes em Chromobacterium violaceum relacionados à resposta ao estresse(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2011-09-08) Fontinele, Delanne Cristina Souza de Sena; Lima, Lucymara Fassarela Agnez; ; http://lattes.cnpq.br/1083882171718362; ; http://lattes.cnpq.br/6224654747502244; Lajus, Tirzah Braz Petta; ; http://lattes.cnpq.br/9979644969955564; Bessa, Keronninn Moreno de Lima; ; http://lattes.cnpq.br/7785864265725862; Uchoa, Adriana Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/6644671747055211; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799567J8&dataRevisao=nullO seqüenciamento do genoma da espécie Chromobacterium violaceum identificou um cromossomo simples circular de 4.8 Mb, no qual aproximadamente 40% das ORFs encontradas são classificadas como hipotéticas conservadas ou hipotéticas. Algumas regiões gênicas de interesse biotecnológico e biológico vêm sendo caracterizadas, como por exemplo, genes de detoxificação ambiental e genes de reparo de DNA, respectivamente. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi identificar genes de C. violaceum envolvidos com a resposta ao estresse, como por exemplo, mecanismos de reparo de DNA e/ou manutenção da integridade genômica. Para tanto, foi construída uma biblioteca genômica de C. violaceum na cepa DH10B de Escherichia coli (RecA-), a qual foi testada para clones resistentes a UVC, resultando na seleção de cinco clones candidatos. Foram identificadas quatro ORFs (CV_3721 a 3724) no clone PLH6A. Das quais, as ORFs CV_3722 e CV_3724, foram subclonadas e uma atividade sinérgica de complementação foi observada. A ocorrência de um operon foi confirmada usando cDNA de C. violaceum em ensaio de RT-PCR. Adicionalmente, foi observada a indução do operon após tratamento com UVC, dessa forma, esse operon foi relacionado à resposta ao estresse em C. violaceum. Ensaios de mutagênese com rifampicina após tratamento com luz UVC mostraram alta freqüência de mutagenicidade para a ORF CV_3722, subunidade δ da Polimerase III. Assim, propomos que esta subunidade de C. violaceum pode agir em DH10B na síntese translesão utilizando Pol IV em uma via RecA independente. Em ensaios de viabilidade outros quatro clones (PLE1G, PLE7B, PLE10B e PLE12H) foram capazes de complementar a função na dose de 5 J/m2. E em ensaios de mutagenicidade PLE7B, PLE10B e PLE12H apresentaram freqüências de mutação com diferenças significativas em relação ao controle (DH10B), demonstrando que de alguma forma eles estão envolvidos na resposta ao estresse em C. violaceum. Estes clones parecem estar inter-relacionados, provavelmente, regulados por molécula mensageira (como o nucleotídeo c-di-GMP) e/ou molécula regulatória global (como a subunidade σS da RNA Polimerase). Os resultados obtidos contribuem para um melhor conhecimento da genética desta espécie e de seus mecanismos de resposta ao estresse ambiental.Tese Análise proteômica de Chromobacterium violaceum: acúmulo estacionário e diferencial após exposição à luz UVC(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2011-12-13) Medeiros, Viviane Katielly Silva; Medeiros, Sílvia Regina Batistuzzo de; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781004Y8; ; http://lattes.cnpq.br/0635169659175207; Lima, Lucymara Fassarela Agnez; ; http://lattes.cnpq.br/1083882171718362; Lima, João Paulo Matos Santos; ; http://lattes.cnpq.br/3289758851760692; Pirovani, Carlos Priminho; ; http://lattes.cnpq.br/9615448923708075; Grangeiro, Thalles Barbosa; ; http://lattes.cnpq.br/3114375474778667Chromobacterium violaceum é um bacilo de vida-livre, Gram-negativo comumente encontrado no solo e nas águas de regiões tropicais e subtropicais. Uma das principais características deste organismo é sua capacidade de produzir o pigmento violaceína, o qual apresenta inúmeras atividades biológicas. Em 2003, o genoma deste organismo foi completamente sequenciado e revelou informações importantes sobre a fisiologia desta bactéria. Porém, poucos estudos pós-genômicos tem sido realizados. Este trabalho avaliou o perfil proteico de C. violaceum cultivada em meio LB a 28ºC, o que permitiu a identificação de proteínas relacionadas a um possível sistema de secreção ainda não identificado e caracterizado em C. violaceum, ao sistema quorum sensing, a processos regulatórios da transcrição e tradução, adaptação ao estresse e ao potencial biotecnológico. Além disso, a resposta desta bactéria à radiação UVC foi avaliada. A comparação do perfil protéico, analisado por eletroforese 2-D, do controle versus tratado possibilitou a identificação de 52 proteínas que surgiram após a indução do estresse. Os resultados obtidos permitiram a elaboração de uma via de resposta de C. violaceum ao estresse gerado pela luz UVC. Esta via, que parece ser de resposta geral ao estresse, envolve a expressão de proteínas relacionada à divisão celular, metabolismo de purinas e pirimidinas, choque térmico ou chaperonas, fornecimento de energia, regulação da formação de biofilme, transporte, regulação do ciclo lítico de bacteriófagos, além de proteínas que ainda não apresentam função caracterizada. Apesar da reposta apresentar similaridades com a SOS clássica de E. coli, ainda não podemos afirmar que C. violaceum apresenta uma resposta SOS-like, principalmente devido a ausência da caracterização de um proteína LexA-like neste organismoTese Proteômica diferencial da Chromobacterium violaceum em resposta ao estresse oxidativo induzido por peróxido de hidrogênio(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2012-03-30) Duarte, Fábio Teixeira; Medeiros, Sílvia Regina Batistuzzo de; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781004Y8; ; http://lattes.cnpq.br/4371235140013662; Lima, Lucymara Fassarela Agnez; ; http://lattes.cnpq.br/1083882171718362; Lima, João Paulo Matos Santos; ; http://lattes.cnpq.br/3289758851760692; Grangeiro, Thalles Barbosa; ; http://lattes.cnpq.br/3114375474778667; Amaral, Viviane Souza do; ; http://lattes.cnpq.br/4440806451383783A β-proteobactéria Chromobacterium violaceum é um bacilo Gram-negativo, de vida livre,saprófito e patógeno oportunista que habita em ecossistemas tropicais e subtropicais dentre eles no solo e na água da Amazônia. Possui grande potencial biotecnológico e, devido a esse potencial, seu genoma foi totalmente sequenciado em 2003. A análise do genoma mostrou que essa bactéria possui vários genes com funções relacionadas à capacidade de sobreviver sob diferentes tipos de estresse ambiental. Objetivando entender a resposta fisiológica de C. violaceum sob condição de estresse oxidativo, foi aplicada a ferramenta de proteômica de shotgun. Sendo assim, colônias de C. violaceum ATCC 12472 foram cultivadas na presença e na ausência de 8 mM de H2O2 por duas horas, as proteínas totais da bactéria foram extraídas, submetidas à SDS-PAGE, coradas e hidrolisadas. Os peptídeos trípticos gerados foram submetidos a uma cromatografia líquida (LC)-linear seguido de espectrômetro de massa (LTQ-XL-Orbitrap) para a obtenção de dados quantitativos e qualitativos. A proteômica de shotgun permite comparar diretamente, em amostras complexas, expressão diferencial de proteínas e revelou que, em C. violaceum, 131 proteínas são expressas exclusivamente na condição controle, 177 proteínas passaram a ser expressas sob estresse oxidativo e 1175 proteínas possuem expressão em ambas condições. A análise dos resultados mostrou que, na condição de estresse oxidativo, essa bactéria muda seu metabolismo, aumentando a expressão de proteínas capazes de combater o estresse oxidativo e diminuindo a expressão de proteínas de processos relacionados com o crescimento bacteriano e catabolismo (transcrição, tradução, metabolismo de carbono e de ácidos graxos). A ferramenta de proteômica com uma abordagem de biologia integrativa forneceu uma visão geral das vias metabólicas envolvidas na resposta de C. violaceum ao estresse oxidativo, bem como amplificou significativamente a compreensão resposta fisiológica ao estresse ambiental. Ensaios bioquímicos e in silico com a ORF hipotética CV_0868 constataram que esta faz parte de um operon. A análise filogenética de superóxidos dismutase, proteína pertencente tambémb ao operon, mostrou que esse gene está duplicado no genona de C. violaceum e que a segunda cópia foi aquirida através de um evento de transferência horizontal. Possivelmente, não só o gene sod, mas também todos os genes que compõem este operon foram adquiridos da mesma maneira. Concluiu-se que C. violaceum possui mecanismos complexos, eficientes e versáteis em resposta estresse oxidativoTese Análise da estabilidade genética de células-tronco mesenquimais humanas(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2012-04-13) Cornélio, Déborah Afonso; Medeiros, Sílvia Regina Batistuzzo de; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781004Y8; ; http://lattes.cnpq.br/7690257454964600; Toledo, Silvia Regina Caminada de; ; http://lattes.cnpq.br/8408786810979968; Lanza, Daniel Carlos Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/6851351991421755; Costa, Marcos Romualdo; ; http://lattes.cnpq.br/6118493598074445; Luchessi, André Ducati; ; http://lattes.cnpq.br/4420863418928278Células mesenquimais estromais multipotentes, também conhecidas como células-tronco mesenquimais humanas (CTMH), são células multipotentes utilizadas em várias pesquisas de terapia celular, pois apresentam a capacidade de se diferenciar em múltiplas e diferentes linhagens, têm grande capacidade de autorrenovação e de expansão in vitro, excelentes propriedades imunossupressoras e são capazes de secretar moléculas bioativas que exercem efeitos tróficos. O cordão umbilical é uma fonte de CTMH cuja extração não necessita de um procedimento invasivo, além de não envolver controvérsias éticas, políticas e religiosas. Um dos problemas que envolvem linhagens de CTMH de diferentes fontes é a possibilidade de ocorrência de alterações cromossômicas e instabilidade genética, que podem aparecer durante a expansão in vitro. Além disso, as CTMH de um dos cordões apresentaram uma alteração cromossômica constitucional: inversão paracêntrica no braço curto do cromossomo 3, cariótipo: 46,XY,inv(3)(p13p25~26). Em 3p25-26, estão localizados vários genes de grande importância biológica, como genes envolvidos com o reparo de DNA e outros responsáveis pelo desenvolvimento de tumores. O titânio é um dos materiais mais utilizado para fabricação de implantes ortopédicos e dentários, e é considerado um excelente biomaterial, entretanto, as partículas derivadas de próteses acumulam-se nos tecidos periprostéticos e na medula óssea local, disseminam-se para linfonodos, fígado e baço. As implicações biológicas em longo prazo da disseminação sistêmica de partículas de metais e seus efeitos cito e genotóxicos não estão bem caracterizados. Neste trabalho investigamos a estabilidade genética de CTMH isoladas da veia do cordão umbilical durante a expansão in vitro, após a criopreservação, e em diferentes condições de cultivo, na presença e na ausência de titânio, antes e após o aparecimento de células senescentes no cultivo. As células foram isoladas, expandidas, diferenciadas em osteoblastos, adipócitos e condroblastos e analisadas com citometria de fluxo para comprovar que são células-tronco mesenquimais. As CTMH foram tratadas com diferentes doses/ tempo de exposição à micropartículas de titânio. A avaliação da estabilidade genética das CTMH foi realizada através da análise do cariótipo, de hibridação in situ por fluorescência (FISH) e da análise do micronúcleo e outras alterações nucleares (CBMN). Ficou estabelecido que as CTMH foram capazes de internalizar as micropartículas de titânio, mas as células mantém sua capacidade de proliferação, diferenciação e preservam os mesmos marcadores de membrana. Além disso, demonstrou-se que existe um aumento na instabilidade genética com o decorrer do tempo de expansão in vitro, e esta instabilidade foi maior na presença de grande concentração de micropartículas de titânio que induzem estresse oxidativo. É necessário sempre avaliar os riscos/ benefícios da utilização do titânio na terapia tecidual envolvendo CTMH, considerando a biossegurança da utilização da regeneração óssea guiada que utiliza CTMH e titânio. Mesmo não se utilizando o titânio, é importante que o uso terapêutico de tais células seja baseado em análises que garantam a qualidade, segurança e estabilidade celular, com a padronização de programas de controle de qualidade adequados. Como conclusão, sugere-se que a análise citogenética, FISH e a análise do micronúcleo e outras alterações nucleares sejam realizadas nas CTMH antes de implantar num paciente, sejam elas cultivadas por longo tempo ou nãoTese Da bancada ao Bureau: análise do desenvolvimento da biotecnologia no Nordeste Brasileiro sob o enfoque de Sistema Regional de Inovação(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2012-04-17) Costa, Benedita Marta Gomes; Macedo, Gorete Ribeiro de; Pedro, Edilson da Silva; ; http://lattes.cnpq.br/0127079272595961; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4788057U7; ; http://lattes.cnpq.br/3349077245184618; Silva, Edna Maria da; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4780176A9; Carvalho, Zulmara Virgínia de; ; http://lattes.cnpq.br/3598201636024281; Fernandes, Ana Cristina de Almeida; ; http://lattes.cnpq.br/3262670232283121; Araújo, Elza Fernandes de; ; http://lattes.cnpq.br/2580883238684755O ponto de partida do presente trabalho consistiu em investigar o desenvolvimento da biotecnologia no Nordeste brasileiro na perspectiva de um Sistema Regional de Inovação (SRI). Assim, o marco teórico adotado consistiu nas abordagens e conceitos apresentados pela corrente neoschumpeteriana. A escolha ocorreu em função de a literatura possibilitar, mediante o conceito de sistema de inovação, a análise de relações e as configurações de atores, bem como do papel do Estado e das políticas sociais, de ciência e tecnologia e econômicas na Região em estudo. A análise ocorreu mediante a eleição de quatro dimensões: infraestrutura física, capital humano, produção científica e financiamento. A escolha destas variáveis ocorreu em função de elas possibilitarem verificar as possibilidades e limites de desenvolvimento de um SRI em biotecnologia no Nordeste brasileir, elementos que permitem responder ao questionamento norteador desta tese. A localização da infraestrutura física ocorreu mediante pesquisa bibliográfica, documental e entrevistas com coordenadores de instituições voltadas para o desenvolvimento de pesquisas em biotecnologia. Capital humano - a análise incidiu sobre a formação de recursos em biotecnologia, destacando-se os cursos de pós-graduação e grupos de pesquisas na área. Para mensurar a produção do conhecimento delimitamos como foco dessa categoria a colaboração científica entre pesquisadores na área de biotecnologia. Quanto à dimensão: financiamento, as informações foram coletadas junto a relatórios disponibilizados nos sites de agências financiadoras de âmbito nacional e estadual. Os dados foram analisados mediante a triangulação de métodos, envolvendo etapas das pesquisas quantitativas e qualitativas. Para subsidiar as análises revisitamos as políticas de integração na área de Ciência, Tecnologia e Inovação. A análise possibilitou verificar que estas políticas desempenham papel essencial para o desenvolvimento da biotecnologia na Região em estudo. Os dados revelaram que a infraestrutura física apresenta concentração em apenas três estados (Bahia, Ceará e Pernambuco). Nesse aspecto, a Rede Nordeste de Biotecnologia (Renorbio) surge como ator estratégico por possibilitar que estados com baixa infraestrutura desenvolvam pesquisas em parcerias com instituições localizadas em outro estado. Verificamos, também, que as práticas voltadas para a formação em recursos humanos e produção do conhecimento apresentam-se como fatores que possibilitam a emersão de um sistema regional em biotecnologia em biotecnologia na Região em estudo. Como limitações, verificamos a baixa imersão entre atores regionais, heterogeneidade nos indicadores socioecômicos, escassez de recursos financeiros e baixa cultura para inovação por parte do setor empresarial. De forma geral, concluímos que o desenvolvimento de um sistema regional de inovação em Biotecnologia, tomando-se como base a atual dinâmica regional, depende de uma efetiva mudança de comportamento dos agentes sociais envolvidos, tanto nas dimensões nacionais e regionais, como públicas e privadasTese Estrutura genética populacional de Lutjanus analis cioba e Lutjanus jocu dentão (Lutjanidae) ao longo do litoral brasileiro(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2012-06-01) Dias Junior, Eurico Azevedo; Molina, Wagner Franco; ; http://lattes.cnpq.br/8437464961129518; ; http://lattes.cnpq.br/2529014780028813; Blaha, Carlos Alfredo Galindo; ; http://lattes.cnpq.br/2307806644081146; Souza, Liliane de Lima Gurgel; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4701211U3; Mendonça, Maísa Clari Farias Barbalho de; ; http://lattes.cnpq.br/9714598282205989; Lunardi, Vitor de Oliveira; ; http://lattes.cnpq.br/2502162313135026Espécies da família Lutjanidae representam um importante recurso pesqueiro em todas as áreas de sua ocorrência. No Brasil a exploração comercial se iniciou na década de 60 e nos anos 80, já demonstrava declínio nos volumes de captura. A diminuição de capturas aponta que os lutjanídeos devem ser manejados conservativamente. Estudos sobre a estrutura genética das populações e dados genéticos para monitoramento dos estoques ao longo da costa brasileira através de marcadores moleculares, são escassos. Nesta região, as espécies Lutjanus analis e L. jocu desempenham papel social para a subsistência das comunidades de pescadores artesanais. O presente trabalho avaliou a variabilidade genética inter e intrapopulacional, assim como o nível de estruturação genética populacional de L. analis ( cioba) e L. jocu ( dentão) ao logo do litoral brasileiro, analisando a região hipervariável 1 da região controle D-loop do DNAmt. Ambas as espécies demonstram constituir um único grande estoque que permite compreendê-los como populações panmíticas. De fato, a elevada variabilidade genética demonstrada pelos altos índices de diversidade nucleotídica e haplotípica, não revelam sinais de depreciação genética frente a exploração pesqueira. Os padrões demográficos históricos destas espécies demonstram concordância com eventos ocorridos no Pleistoceno. Os dados genéticos não excluem riscos futuros para ambas as espécies decorrentes da contínua exploração destes estoquesTese Parâmetros citogenéticos de espécies comerciais de carangidae (perciformes), com vistas a sua empregabilidade na conservação biológica e piscicultura marinha(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2012-09-28) Jacobina, Uedson Pereira; Molina, Wagner Franco; ; http://lattes.cnpq.br/8437464961129518; ; http://lattes.cnpq.br/9747701142123608; Blaha, Carlos Alfredo Galindo; ; http://lattes.cnpq.br/2307806644081146; Souza, Liliane de Lima Gurgel; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4701211U3; Lunardi, Vitor de Oliveira; ; http://lattes.cnpq.br/2502162313135026; Moreira Filho, Orlando; ; http://lattes.cnpq.br/3927076022470557Entre os peixes marinhos, as famílias Carangidae e Rachycentridae se apresentam como grupos de grande importância comercial pela pesca e potencial para piscicultura marinha. Entretanto, bases genéticas que possam alicerçar o futuro cultivo destas espécies, sobretudo seus aspectos citogenéticos são incipientes. Os padrões cromossômicos têm fornecido dados básicos para a prospecção de processos biotecnológicos de manipulação cromossômica voltados ao melhoramento genético, como a indução a poliploidia, ginogênese e androgênese, assim como obtenção de estoques monossexo e hibridizações interespecíficas. Neste trabalho é apresentado um amplo levantamento citogenético em 10 espécies, sendo sete da família Carangidae e de Rachycentron canadum, espécie monotípica da família Rachycentridae. A caracterização citogenética clássica e mapeamento in situ de sequências multigênicas foram empregadas. Adicionalmente em espécies do gênero Selene e em morfótipos de Caranx lugubris foram realizadas comparações através de morfometria geométrica. Em geral, as espécies exibiram um marcante conservadorismo cromossômico numérico (2n=48). Apesar de apresentar, em grande parte, fórmulas cariotípicas diferenciadas, conservam diversas características cromossômicas típicas da Ordem Perciformes, como elevado número de elementos monobraquiais, sítios Ag-RONs/ DNAr 18S simples e heterocromatina reduzida, preferencialmente centromérica. Os principais mecanismos envolvidos na diversificação cariotípica são as inversões pericêntricas, com ação secundária de fusões cêntricas. Além do mapeamento físico e detalhamento cromossômico para as espécies são apresentados e discutidos padrões de variabilidade intra e diversificação interespecíficas, com identificação de marcadores citotaxonômicos. Este conjunto dos dados propicia um melhor conhecimento dos padrões carioevolutivos destes grupos e condições para o desenvolvimento de protocolos biotecnológicos baseados na manipulação cromossômica para estas espécies AtlânticasTese Caracterização Hematológica e Imunofenotípica em Pacientes com Leucemia Linfoblástica Aguda(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2012-11-01) Alves, Gabriela Vasconcelos de Andrade; Cavalcanti Júnior, Geraldo Barroso; ; http://lattes.cnpq.br/0091662650633339; ; http://lattes.cnpq.br/1023375603128771; Rêgo, Amália Cinthia Meneses do; ; http://lattes.cnpq.br/3240686272929972; Cornélio, Déborah Afonso; ; http://lattes.cnpq.br/7690257454964600; Araújo, Ivonete Batista de; ; http://lattes.cnpq.br/3872552451523411; Santos, Maria Goretti do Nascimento; ; http://lattes.cnpq.br/5568548562729051A Leucemia Linfoblástica Aguda é uma doença de caráter maligno do sistema imune e hematológico caracterizada pelo acúmulo de precursores linfóides neoplásicos B ou T (linfoblastos) na medula óssea e/ou no sangue periférico. O diagnóstico dessas leucemias ocorre pela classificação do aspecto morfológico French-American-British (L1, L2 ou L3) associado às características do perfil imunológico B ou T das células malignas, tendo como base o perfil de expressão dos anticorpos monoclonais direcionados contra os antígenos de diferenciação celular. Vários estudos têm demonstrado que imunofenótipos de células blásticas de casos de Leucemia Linfoblástica Aguda nem sempre exibem características da diferenciação linfóide normal, mas sim exibem imunofenótipos aberrantes. Assim, blastos de alguns casos de Leucemia Linfoblástica Aguda de linhagem B podem apresentar antígenos T ou mielóides. Também blastos de casos de Leucemia Linfoblástica Aguda T podem possuir determinantes de células B ou mielóides. Objetivo: Determinar o perfil imunofenotípico em 192 pacientes com Leucemia Linfoblástica Aguda (B ou T) diagnosticados no Laboratório de Citometria de Fluxo do Hemocentro Dalton Barbosa Cunha - HEMONORTE, com base nos dados clínicos, laboratoriais e na imunofenotipagem pela citometria de fluxo. Metodologia: Todas as amostras de sangue periférico e/ou medula óssea foram submetidas à imunfenotipagem por citometria de fluxo, utilizando um painel de anticorpos monoclonais específico para Leucemias Agudas diretamente conjugado com até três diferentes fluorocromos por tubo: isotiocianato de fluoresceína, do inglês fluorescein isothiocyanate (FITC) e/ou Phicoeritrina (PE) e/ou proteína Piridina de clorofila, do termo em inglês chlorophyl de peridinin protein (PerCP). Resultados: As Leucemias Linfoblásticas Agudas de linhagem B foram as mais predominantes, 84,38%. Observou-se uma discreta predominância dos indivíduos do sexo masculino (56,77%). As crianças foram as mais acometidas pela doença correspondendo a 58,85%. A avaliação dos subtipos morfológicos identificou o L1 com 116 casos (60,42%) como o de maior predominância. Os três subtipos morfológicos French-American-British foram detectados nas Leucemias Linfoblásticas Agudas de linhagem B, sendo os tipos L1 e L2 mais freqüentemente observados nas Leucemia Linfoblástica Aguda Calla+ com 72 e 25 casos, respectivamente. Os níveis de expressão dos antígenos T mostraram principalmente o CD3 (superfície e citoplasmático) com 8,33% e 11,17%, respectivamente. Para os antígenos B observou-se uma maior freqüência de expressão para os antígenos pan B: CD19, sCD22, cCD22 e cCD79a. Detectou-se a presença de fenótipo aberrante em 66 casos. Conclusões: O emprego sistemático dos anticorpos monoclonais e sua aplicação na citometria de fluxo tem se confirmado útil no diagnóstico diferencial das leucemias agudas, em adição ao diagnóstico morfológicoTese Estudo do papel da proteína multifuncional APE1/Ref-1 sobre a resposta inflamatória na meningite bacteriana(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-03-19) Coutinho, Leonam Gomes; Lima, Lucymara Fassarela Agnez; ; http://lattes.cnpq.br/1083882171718362; ; http://lattes.cnpq.br/1909294735239579; Jerônimo, Selma Maria Bezerra; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785584A3&dataRevisao=null; Lajus, Tirzah Braz Petta; ; http://lattes.cnpq.br/9979644969955564; Machado, Carlos Renato; ; http://lattes.cnpq.br/6306925202374274; Leite, Edda Lisboa; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783254U6&dataRevisao=nullA meningite bacteriana (MB) é uma doença infecciosa que permanece com altas taxas de mortalidade e morbidade em todo o mundo, principalmente em países subdesenvolvidos, apesar dos avanços na antibioticoterapia. Um dos principais mecanismos associados às sequelas durante a MB é a elevada resposta inflamatória, que promove uma exacerbada quantidade de espécies reativas de oxigênio (ERO) levando às células a apoptose ou necrose. A ativação de enzimas de reparo de DNA durante o estresse oxidativo tem sido demonstrada nas mais diversas desordens. Uma importante enzima envolvida neste processo é a endonuclease apurínica/apirimidinica1/fator redox-1 (APE1/Ref-1). Ela é uma proteína multifuncional envolvida no reparo de DNA e na redução de fatores envolvidos com a resposta inflamatória, tais como o fator nuclear kappa B (NFkB) e proteína ativadora 1 (AP-1). Este estudo teve como objetivo identificar o envolvimento de APE1/Ref-1 na resposta inflamatória visando a possibilidade de sua utilização como alvo terapêutico na redução de sequelas durante a MB. Para isto, inicialmente foi realizado uma análise no perfil de expressão de citocinas em líquor de pacientes com meningite causada por Streptococcus pneumoniae e Neisseriae meningitidis visando selecionar moduladores inflamatórios de interesse para ensaios em cultura de célula subsequentes. Em seguida, utilizando um modelo celular de indução com LPS foi avaliado o efeito da inibição da atividade de reparo e redox de APE1 sobre a expressão de citocinas inflamatórias. Por fim, foi observada a expressão de APE1 no córtex (CX) e hipocampo (HC) de ratos com MB frente a uma terapia adjuvante com vitamina B6. Nossos resultados mostraram um perfil de moduladores inflamatórios muito semelhante no líquor dos pacientes com MB causada pelos patógenos estudados, embora interferon gama (IFNy) tenha sido VI significativamente mais expresso em pacientes com S. pneumoniae do que N. meningitidis. Quanto ao uso dos inibidores das funções, redox e de reparo, de APE1/Ref-1 no modelo in vitro, houve redução significativa na expressão de algumas citocinas, principalmente o fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α). Além disso, os inibidores demonstraram uma redução nos níveis de ERO nas células estimuladas com LPS. No modelo animal, a expressão protéica de APE1/Ref-1, no CX e HC dos ratos, foi modulada após introdução da vitamina B6. Portanto, esses dados fornecem um novo olhar para a fisiopatologia da MB, em que citocinas como IFNy podem ser usadas em um diagnóstico diferencial entre meningites causadas por S. pneumoniae e N. meningitidis. A proteína de reparo de DNA, APE1/Ref-1, parece ser um alvo potencial na modulação da resposta inflamatória e do estresse oxidativo, bem como a terapia adjuvante com vitamina B6 mostra ter um papel sobre a expressão de APE1/Ref-1. Consequentemente, o conhecimento obtido neste estudo pode ser importante na melhoria do prognóstico da MB, além de contribuir para entender a associação entre o reparo de DNA e inflamaçãoTese Análise do efeito de polimorfismos não-sinônimos em genes de reparo de DNA da via BER na resposta inflamatória da meningite(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-03-21) Silva, Thayse Azevedo da; Lima, Lucymara Fassarela Agnez; ; http://lattes.cnpq.br/1083882171718362; ; http://lattes.cnpq.br/5616745708058693; Saffi, Jenifer; ; http://lattes.cnpq.br/3179264934205423; Lajus, Tirzah Braz Petta; ; http://lattes.cnpq.br/9979644969955564; Vallinoto, Antônio Carlos Rosário; ; http://lattes.cnpq.br/3099765198910740; Souza, Sandro José de; ; http://lattes.cnpq.br/8479967495464590Estudos in vitro e em modelos animais sugerem que as proteínas de reparo de DNA da via de reparo por excisão de bases (do inglês, BER) APE1, OGG1 e PARP-1 estão envolvidas também na resposta inflamatória. Neste trabalho foi investigado se os SNPs APE1 Asn148Glu, OGG1 Ser326Cys e PARP-1 Val762Ala associam-se à meningite, e foi desenvolvido um sistema para análise funcional destas variantes polimórficas. Os genótipos de pacientes com meningite bacteriana (MB), meningite asséptica (MA) e não infectados (controles) foram investigados por PIRA-PCR ou PCR-RFLP. Danos no DNA genômico foram detectados por meio de tratamento com Fpg. IgG e IgA foram titulados no plasma e citocinas e quimiocinas foram mensuradas em amostras de líquor através de ensaios em Bio-Plex. Os níveis de NF-κB e c-Jun foram dosados no líquor dos pacientes por meio de dot blot. Foi observado um aumento significativo (P<0.05) na frequência do alelo APE1 148Glu nos casos de MB e MA. Os genótipos Asn/Asn no grupo controle e Asn/Glu no grupo da MB também apresentaram relevante aumento em suas frequências (P<0.05). Para o SNP OGG1 Ser326Cys, o genótipo Cys/Cys esteve mais frequente (P<0.05) nos casos de MB. A frequência do genótipo PARP-1 Val/Val foi mais alta no grupo controle (P<0.05). A ocorrência combinada dos SNPs foi significativamente alta nos pacientes com MB, indicando que estes SNPs podem estar associados à doença. Os portadores do alelo APE1 148Glu ou OGG1 326Cys apresentaram um número maior de sítios sensíveis à Fpg, sugerindo que os SNPs afetam a atividade de reparo do DNA. Alterações na síntese de IgG foram observadas na presença dos SNPs APE1 Asn148Glu, OGG1 Ser326Cys ou PARP-1 Val762Ala. Reduções nos níveis de IL-6, IL-1Ra, MCP-1/CCL2 e IL-8/CXCL8 foram encontradas na presença do alelo APE1 148Glu em amostras de pacientes com MB, no entanto não foram encontradas diferenças nos níveis de NF-κB e c-Jun considerando os genótipos e os grupos analisados. Utilizando APE1 como modelo, foi desenvolvido um sistema que possibilita a expressão e caracterização funcional das enzimas polimórficas estudadas e seus efeitos na célula, por meio de clonagem, utilizando o vetor pIRES2-EGFP e cDNA de APE1, transfecção celular da construção obtida, inibição por siRNA de APE1 endógena e genotipagem de culturas celulares. Em conclusão, foram obtidas evidências de um efeito significativo dos SNPs nos genes de reparo de DNA na regulação da resposta imunológica. Este é um trabalho pioneiro na área, que demonstra a associação de variantes das enzimas da via BER com uma doença infecciosa em humanos, sugerindo que os SNPs estudados podem afetar a resposta imune e o impacto do nível de estresse oxidativo durante a infecção cerebral. Desta forma, novos meios de análise funcional devem ser desenvolvidos para estudo de proteínas polimórficas e suas interações neste contextoTese Transcriptoma diferencial entre células-tronco mesenquimais humanas jovens e senescentes(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-03-25) Tavares, Joana Cristina Medeiros; Medeiros, Sílvia Regina Batistuzzo de; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781004Y8; ; http://lattes.cnpq.br/8980283503265456; Cornélio, Déborah Afonso; ; http://lattes.cnpq.br/7690257454964600; Lenz, Guido; ; http://lattes.cnpq.br/4178667286777514; Ortega, José Miguel; ; http://lattes.cnpq.br/1919128137338097; Souza, Sandro José de; ; http://lattes.cnpq.br/8479967495464590Células-tronco mesenquimais humanas (CTMH) são muito úteis na terapia celular. O longo período de cultivo pode resultar em senescência replicativa ou estar relacionado com o aparecimento de alterações cromossômicas responsáveis pela aquisição de um caráter tumorigênico in vitro . Neste estudo, foi comparado o transcriptoma de CTMH jovens e senescentes obtidas de diferentes doadores. Além disso, pela primeira vez, o perfil de expressão de CTMH com uma inversão cromossômica paracêntrica (CTMH/inv) foi comparado ao de CTMH que possuem cariótipo normal (CTMH/n) em passagens jovens e senescentes de cultivo in vitro . As CTMH utilizadas neste estudo foram isoladas da veia do cordão umbilical de três dadores, dois CTMH/n e de um CTMH/inv. Após a criopreservação, elas foram expandidas in vitro até alcançarem a senescência. O RNA total foi extraído utilizando o RNeasy mini kit (Qiagen), marcado, purificado e fragmentado com o ® 3 GeneChip IVT expresso Kit (Affymetrix, Inc.). Subsequentemente, o RNA fragmentado foi hibridado no microarranjo Affymetrix Human Genome U133 Plus 2.0 (Affymetrix, Inc.). A análise estatística da expressão diferencial foi realizada usando o Partek Suite Software Genomic, versão 6.4 (Partek, Inc.). Foram consideradas estatisticamente significativas as diferenças na expressão com valor de P ˂0.01 corrigido com Bonferroni. Apenas os sinais com fold change ˃3.0 foram incluídos na lista de diferencialmente expressos. Diferenças na expressão gênica observadas no estudo dos microarranjos foram confirmadas por resultados de RT-PCR em tempo real. Para a interpretação biológica dos dados foram utilizados: IPA (Ingenuity Systems) para análise de enriquecimento de funções; STRING 9,0 para a construção de redes de interações; Cytoscape 2,8 para a visualização das redes e análises de gargalos com o auxílio do software GraphPad Prism 5.0. O pluggin BiNGO do Cytoscape foi utilizado para avaliar a representação de categorias funcionais no Gene Ontology nas redes biológicas. A comparação entre senescentes e jovens em cada grupo de CTMH mostrou que há uma diferença no perfil de expressão, sendo maior nas senescentes do grupo CTMH/inv. Os resultados também mostraram que há diferença nos perfis de expressão entre as CTMH/inv e CTMH/n, sendo maior a diferença quando as células estão senescentes. Novas xiv redes foram identificadas para genes relacionados com a resposta ao longo do tempo de cultivo nos dois grupos de CTMH. Foram identificados genes que podem coordenar funções importantes mais enriquecidas nas redes, como por exemplo, CXCL12, SFRP1, EGF, SPP1, MMP1 e THBS1. A interpretação biológica destes dados sugere que a população de células CTMH/inv tem diferentes características constitucionais, relacionadas com o seu potencial de proliferação, diferenciação e resposta a estímulos, responsáveis por um processo de senescência replicativa em CTMH/inv distinto das CTMH/n. Os genes identificados neste estudo são candidatos a marcadores da senescência celular em CTMH, mas a sua relevância funcional neste processo deve ser testada em experiências adicionais in vitro e/ou in vivoTese Processo biotecnológico voltado a produção de estoques poliploides do camarão-branco litopenaeus vannamei (decapoda, penaeidae)(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-03-25) Accioly, Ingrid Vilar; Molina, Wagner Franco; ; http://lattes.cnpq.br/8437464961129518; ; http://lattes.cnpq.br/9890715324172958; Pontes, Cibele Soares; ; http://lattes.cnpq.br/3943018673158703; Fernandes, José Veríssimo; ; http://lattes.cnpq.br/7078820975978056; Ribeiro, Karina; ; Lima, Tatjana Keesen de Souza; ; http://lattes.cnpq.br/5504382837656473A melhoria genética de planteis reprodutores, baseada no melhoramento clássico tem sido tentada, mas sem resultados práticos, até o momento. Protocolos biotecnológicos utilizados em organismos aquáticos cultivados que visam aumentar as taxas de crescimento e resistência a doenças, vêm sendo estudados e aperfeiçoados. Entre as técnicas disponíveis, a aplicação de manipulação cromossômica, embora ainda incipiente, se apresenta como ferramenta voltada a mitigar questões ecológicas e econômicas na carcinicultura. A poliploidização artificial, método já empregado em peixes e moluscos, vem sendo largamente pesquisado para o uso em camarões cultivados. Algumas limitações da expansão deste método em camarões se referem a um melhor conhecimento de aspectos citogenéticos, do nível de dimorfismo sexual e performance em condições de cultivo. Visando contribuir sobre algumas destas questões, realizou-se à caracterização citogenética das espécies Litopenaeus vannamei (Decapoda) e Artemia franciscana (Anostraca), foi analisada também a eficácia do uso da citometria de fluxo como método de detecção da ploidia em processos de indução artificial por choque térmico à frio, em diferentes fases do desenvolvimento de ovos recém-fertilizados de Litopenaeus vannamei. Adicionalmente, visou-se, ainda, a comparação qualitativa e quantitativa do desenvolvimento larval entre organismos diploides e poliploides, além da identificação do dimorfismo sexual em L. vannamei, por meio da morfometria geométrica. Os resultados obtidos propiciam informações que contribuem para o aprimoramento e difusão do uso aplicado de métodos biotecnológicos voltados ao incremento da produtividade na carcinicultura nacionalTese Análise metagenômica da microbiota de ambientes aquáticos do estado do Rio Grande do Norte - Brasil(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-04-16) Silva, Uaska Bezerra e; Lima, Lucymara Fassarela Agnez; ; http://lattes.cnpq.br/1083882171718362; ; http://lattes.cnpq.br/9309987119591098; Quirino, Betania Ferraz; ; http://lattes.cnpq.br/3916535995785654; Uchoa, Adriana Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/6644671747055211; Theodoro, Raquel Cordeiro; ; http://lattes.cnpq.br/0977453259767928; Thompson, Claudia Elizabeth; ; http://lattes.cnpq.br/8413464882207319A busca por genes baseada na construção e análise de bibliotecas metagenômicas a partir de solo gera oportunidades para explorar uma enorme diversidade genética e metabólica de microrganismos. Os rios são ecossistemas com alta diversidade biológica, mas ainda pouco explorados por meio de metagenômica. Com o objetivo de explorar a diversidade microbiana, uma biblioteca metagenômica foi construída a partir de DNA extraído de substrato de rio em três pontos ao longo do rio Jundiaí (Rio Grande do Norte-Brasil). Os pontos de amostragem são derivados de área aberta, terreno acidentado e com a incidência direta da luz solar. Esta biblioteca foi analisada funcionalmente e também com base em sequências. Para a análise funcional foi utilizado meio de cultura sólido LB com concentração de NaCl variando de 0,17M a 0,85M. Foram obtidos 15 clones positivos com características halotolerantes. Os DNAs recombinantes foram extraídos e retransformados em cepa de Escherichia coli DH10B e curvas de sobrevivência foram obtidas para confirmação e quantificação da resistência ao estresse abiótico. As sequências dos clones foram obtidas e submetidas a ferramenta BLASTX e assim foi comprovado que alguns clones codificavam proteínas hipotéticas. Um dos clones apresentou uma ORF completa com elevada similaridade de glucose-6-fosfato-isomerase que participa na síntese do precursor de glicerol, sendo um soluto compatível para equilibrar a pressão osmótica no interior e no exterior das células. Posteriormente, para identificação de genes que codificam osmólitos relacionados com halotolerância e identificação da diversidade microbiológica, amostras de DNA ambiental do substrato do rio e da coluna d´água do estuário e oceano foram coletadas e pirosequenciadas. As sequências de osmólitos de diferentes microrganismos foram obtidas a partir do UniProt e utilizadas como RefSeqs para a identificação por homologia (TBLASTN) nos bancos de dados metagenômicos. As sequências identificadas nos bancos de dados ambientais foram submetidas ao programa HMMER com o fim de identificar domínios funcionais. Foram identificadas as enzimas: alfa-trealose-fosfato sintase, L-ectoina sintase (ectC), transaminase do ácido L-2,4-diaminobutírico (EctB), ácido L-2 ,4-diaminobutírico acetiltransferase (EctA), L-treonina 3-desidrogenase (via de síntese do sorbitol), Glicerol-3-fosfato desidrogenase, inositol-3-fosfato desidrogenase, chaperonas, L-prolina glicina betaína ligação transportador ABC, mio-inositol-1-fosfato sintase, a proteína simportadora de prolina/sódio -PutP e trealose-6-fosfato fosfatase. Estas são enzimas que participam da síntese de osmólitos comumente relacionados a ambientes salinos, no entanto a identificação desses solutos em ambiente de rio é justificada pela elevada concentração salina no solo durante prolongadas estações de seca neste rio. Quanto à riqueza da microbiota foi identificado que o substrato do rio possui uma abundância de halobactérias semelhante a do mar e superior a do estuário. Esses dados confirmam a existência de uma resposta especializada contra o estresse salino por microrganismos no ambiente do rio JundiaíTese Interação de microorganismos na solubilização de fósforo e potássio de rochas para produção de biofertilizantes(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-05-03) Silva, Valéria Nogueira da; Macedo, Gorete Ribeiro de; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4788057U7; ; http://lattes.cnpq.br/3146107118411604; Santos, Everaldo Silvino dos; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799564Y2; Pagnoncelli, Maria Giovana Binder; ; http://lattes.cnpq.br/1360308643397232; Lyra, Maria do Carmo Catanho Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/1927568921068851; Vaz, Michelle Rossana Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/8430871804598863A agricultura atual se baseia no uso intensivo de fertilizantes industrializados, por sua resposta rápida, porém traz consequências danosas ao ambiente, e faz-se necessário o uso de insumos modernos. Uma alternativa é o uso de biofertilizantes de rochas na agricultura, um produto de fácil manuseio, com efeito residual maior e não agride o meio ambiente. O objetivo do estudo foi avaliar a inoculação e co-inoculação de diferentes microrganismos na solubilização de fósforo e potássio de rochas moídas avaliando o melhor desempenho microbiano(s) na produção de biofertilizantes comparando com as rochas puras nas propriedades químicas do solo e, verificar o efeito da inoculação da bactéria Paenibacillus polymyxa na absorção dos minerais solubilizados no desenvolvimento do feijão caupi (Vigna unguiculata [L.] Walp.). O primeiro bioensaio foi conduzido em Laboratório (UFRN) por 72 dias em Placas de Petri, onde o pó de rocha era acrescido de 10% de enxofre e inoculados e co-inoculados com suspensão bacteriana de Paenibacillus polymyxa cultivada em meio caldo triptona de soja, Ralstonia solanacearum em meio Kelman, Cromobacterium violaceum em meio Luria-Bertani e Acidithiobacillus thiooxidans em meio Tuovinen e Kelly, e os fungos Penicillium fellutanum e Tricoderma humatum em meio contendo extrato de malte. A cada 12 dias, amostras eram retiradas a fim de construir uma curva de liberação dos minerais. O segundo bioensaio foi conduzido em casa de vegetação da Empresa de Pesquisa Agropecuária do Rio Grande do Norte, onde utilizou-se 10 kg do Argissolo Amarelo Distrófico, por vaso, com adição dos tratamentos super fosfato simples (SS), cloreto de potássio (KCl), rocha pura, biofertilizantes nas doses 40, 70, 100 e 200% da recomendação para SS e KCl, e uma testemunha, inoculados ou não com a bactéria P. polymyxa. Foram utilizadas sementes da caupi BRS Potiguar e co-inoculadas com suspensão bacteriana de Bradyrhizobium japonicum e P. polymyxa. A primeira colheita foi aos 45 dias de plantio avaliando a matéria seca da parte aérea (MSPA), teores de macronutrientes (N, P, K, Ca, Mg,) e micronutrientes (Zn, Fe, Mn) na MSPA. A segunda colheita aos 75 dias avaliando teores de macro e micronutrientes na planta e no solo, e a capacidade máxima de adsorção de P (CMAP) no solo. Os resultados mostraram que houve sinergismo nas co-inoculações com P. polymyxa+R. solanacearum e, P. polymyxa+C. violaceum com maiores solubilizações de K e P, respectivamente, e melhor tempo de solubilização aos 36 dias. O pH foi mais reduzido nos biofertilizantes de maiores doses, e houve melhoras com sua adição para P na maior dose. Houve redução significativa da CMAP com o aumento da dose do biofertilizante. Houve efeito da fertilização na absorção, com melhoras para P, K e MSPA com SS+KCL, e N, Ca e Mg para biofertilizantes. De modo geral, o P. polymyxa não influenciou na absorção dos elementos na planta. Para Ca e K houve melhoras com SS+KCl, e para Mg com rocha pura. O fertilizante químico foi significativamente superior para peso e número de grãos, sem a presença do P. polymyxa. Na presença da bactéria, biofertilizantes e fertilizante químico apresentaram valores positivos em relação à rocha e testemunha. Os dados evidenciaram que as rochas e os biofertilizantes podem suprir a necessidade de nutrientes às plantas revelando-se como potencial para uma agricultura sustentávelTese Mapeamento cromossômico de genes ribossomais em espécies estuarinas da família Gerreidae Identificação de uniformidade cariotípica e sua empregabilidade com fins biotecnológicos - REPROGEN(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-07-19) Calado, Leonardo Luiz; Molina, Wagner Franco; ; http://lattes.cnpq.br/8437464961129518; ; http://lattes.cnpq.br/2459740082072347; Yasui, George Shigueki; ; http://lattes.cnpq.br/9501210162294651; Garcia Júnior, José; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4739386P6; Souza, Liliane de Lima Gurgel; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4701211U3; Nóbrega, Marcelo Francisco de; ; http://lattes.cnpq.br/6194914254799842Os Perciformes são dominantes no ambiente marinho, contituindo a maior e mais diversificada ordem de peixes dentre os teleósteos. Muitas de suas famílias, como os Gerreidae, conhecidos popularmente como carapicus, carapebas, ou mojarras, têm um alto potencial econômico, no que se diz respeito à piscicultura marinha, extrativismo e pesca esportiva. Informações genéticas destas espécies são de fundamental importância para seu manejo e produção. Mesmo assim, das 13.000 espécies de peixes marinhos descritos, apenas 2% foram estudadas sob o ponto de vista citogenético e menos de 1% sobre suas características reprodutivas. A reprodução induzida, a citogenética e a criopreservação de gametas, representam importantes áreas aplicadas de estudo em peixes. No presente trabalho análises citogenéticas foram empregadas na caracterização genética de espécies da família Gerreidae, ocorrentes no litoral do Nordeste do Brasil. Diferentes métodos de identificação de regiões cromossômicas foram empregados por meio de técnicas convencionais (Ag-RONs, bandamento C), coloração com fluorocromos base-específicos (DAPI-CMA3), e mapeamento cromossômico de genes ribossomais marcadores DNAr 18S e 5S, através da hibridação in situ com sondas fluorescentes (FISH). As seis espécies analisadas revelaram marcante conservadorismo cromossômico. Os genes ribossomais 18S e 5S quando analisados em perspectiva filogenética, demonstram dinâmica evolutiva variada, podendo apresentar estase em alguns grupos e maior dinamismo em outros. As análises por duplo-FISH dos sítios 18S e 5S se revelaram eficientes marcadores citotaxonômicos nos cariótipos homogêneos deste grupo de espécies. Os padrões cariotípicos identificado, além dos aspectos evolutivos do cariótipo identificados, são sugestivos de baixo potencial de barreiras pós-zigóticas, instigando pesquisas futuras de prospecção de hibridação interespecífica destas espécies de valor comercialTese Biolipídio B2: desenvolvimento de um veículo estável para reposição hormonal transdérmica nanoestruturada(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-08-05) Queiroz, Dinalva Brito de; Soares, Marco Antonio Botelho; ; http://lattes.cnpq.br/0151660833349474; ; http://lattes.cnpq.br/8434946332683315; Queiroz, Danilo Caldas de; ; http://lattes.cnpq.br/0334657218825884; Menezes, José Wally Mendonça; ; http://lattes.cnpq.br/1278089649826222; Fechine, Pierre Basílio Almeida; ; http://lattes.cnpq.br/1184349463710551; Ruela, Ronaldo de Sousa; ; http://lattes.cnpq.br/4761545951933790A administração de hormônios pela via oral se configura como um grave problema, uma vez que diversos efeitos colaterais estão relacionados a tal procedimento. O objetivo do presente estudo foi avaliar a segurança e a eficácia de um novo produto destinado a Terapia de Reposição Hormonal transdérmica nanoestruturada (TRHN), com base em uma formulação patenteada sob No. US 2013/0123220A1. Tal formulação foi capaz de restabelecer os níveis séricos de Estradiol (0,1%) + Estradiol (0,25%), em 122 mulheres menopausadas com idade média de 56,88 (± 6,27). A avaliação faz parte de um estudo prospectivo longitudinal. Parâmetros clínicos, incluindo o grau de satisfação com alívio sintomático, concentrações séricas de estradiol, peso, pressão arterial, foram comparados entre a o início e o final do tratamento. Os achados mostram que o BIOLIPÍDEO/B2® foi eficaz e seguro em restabelecer os níveis séricos hormonais sem efeitos colaterais. A satisfação com tratamento foi de 92%. As concentrações no soro de estradiol foram significativamente maiores após tratamento (p<0,05). Peso e pressão arterial sistólica e diastólica não apresentaram diferenças significativas (p>0,05) ao longo do tratamento. Não Foi observada hemorragia vaginal. Avaliação de mamografia bilateral das mamas o tratamento encontraram resultados normais em todas as mulheres. Este estudo mostra pela primeira vez a eficácia de uma formulação transdérmica nanoestruturada na entrega transdérmica de estradiol e o estriol medido in vivo utilizando Espectroscopia Raman confocal. A formulação do BIOLIPÍDEO/B2® é segura e eficaz em restabelecer os níveis séricos de estradiol e de aliviar os sintomas da menopausa. A formulação pode servir como uma boa escolha para a terapia de reposição hormonal para proteger contra sintomas pós-menopausa.Tese Estudo dos efeitos das condições ambientais tropicais ao longo do tempo de exposição sobre o DNA de dentes humanos para genotipagem forense(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-08-15) Emiliano, Gustavo Barbalho Guedes; Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; http://lattes.cnpq.br/4651814546820796; ; http://lattes.cnpq.br/5882662534904226; ; http://lattes.cnpq.br/4981160964989477; Souza, Lélia Batista de; ; http://lattes.cnpq.br/6671914892609743; Silva, Luiz Antônio Ferreira da; ; http://lattes.cnpq.br/9625945475528931; Oliveira, Rogério Nogueira de; ; http://lattes.cnpq.br/2619275148017227As condições ambientais interferem nos processos de decomposição de corpos e remanescentes humanos. Variáveis associadas ao clima e ao solo como alta temperatura, umidade elevada, incidência da radiação solar, composição do solo e o pH do solo podem degradar o DNA de amostras biológicas coletadas de locais de crimes e de corpos não identificados. Os dentes representam uma importante fonte de DNA, pois são os tecidos mais rígidos do corpo humano e mais resistente à putrefação. Os dentes são coletados quando o corpo encontra-se esqueletizados ou quando os outros tecidos estão em pequenas quantidades e putrefeitos. A genotipagem forense com STRs (Short Tandem Repeat) é um método padrão que apresenta alto poder de discriminação entre indivíduos e a amplificação de amostras degradadas. A presente pesquisa objetivou avaliar a quantidade e qualidade do DNA de amostras dentárias expostas às condições ambientais de clima e de solo tropicais por T0, T1 (4 meses), T2 (9 meses) e T3 (24 meses). A amostra foi constituída por 65 dentes molares hígidos de indivíduos com média de idade de 24 anos (dp ± 3). Os dentes foram limpos física-quimicamente e pulverizados criogenicamente. O DNA dentário foi extraído através do protocolo de extração AFDIL, quantificados em PCR em tempo real através do kit Quntifiler® Human DNA Quantification e os STRs autossômicos (FGA, D16S539, D7S820, D13S317, D3S1358, Penta E, D18S51, D12S391, TH01, D19S433, CSF1PO, TPOX, vWA, D5S818, D2S1338, SE33 e a amelogenina) amplificados em reações de PCR multiplex. As análises de variância (ANOVA) e o pós-teste de Tukey mostraram haver diferenças significativas (p ≤ 0,05) nas médias de quantidades de DNA entre o grupo controle e grupo experimental nos tempos de exposição T1, T2 e T3 e no grupo superfície entre T1 e T3. A quantificação foi possível em 92% (n = 60) das amostras. A diferença nas médias de amplificação dos loci de STRs foi significativa (p < 0,05) nos grupos superfície, argila e areia ao longo dos tempos T1, T2 e T3. Em cinco amostras do tempo T3 não houve amplificação. Os três maiores marcadores CSF1PO, FGA e Penta E amplificaram em 60% das amostras da superfície, 94% da argila e 87% da areia no tempo T1. Os três menores marcadores D5S818, D19S433 e D3S1358 amplificaram em 94% das amostras da superfície, 94% da argila e 100% da areia no tempo T1. A amelogenina amplificou em 86% das 65 amostras e 47% no grupo experimental no tempo T3. Houve variação significativa (p < 0,05) para as médias das áreas da amelogenina entre o grupo controle e o grupo experimental em T1 e T3. Para a área do marcador CSF1PO houve variação significativa (p < 0,05) entre o grupo controle e o grupo experimental no tempo T1. Face ao exposto, conclui-se que a submissão dos dentes às condições de clima e de solo foi determinante para a redução significativa da quantidade média de DNA no primeiro tempo de exposição T1 (4 meses) e os STRs podem ser indicados eficientemente para genotipagem com até 4 meses de exposição às condições de clima e de solo tropicais.Tese Avaliação do potencial da fibra e casca de coco maduro, casca de coco verde e cacto pré-tratados visando à produção de etanol(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2014-04-23) Gonçalves, Fabiano Avelino; Macedo, Gorete Ribeiro de; Teixeira, José Antonio Couto; ; http://lattes.cnpq.br/6023147667111007; ; http://lattes.cnpq.br/3324083094904117; ; http://lattes.cnpq.br/4600955286343582; Assis, Cristiane Fernandes de; ; http://lattes.cnpq.br/0034694007210837; Oliveira, Jackson Araujo de; ; http://lattes.cnpq.br/5058617634570704; Porto, Ana Lúcia Figueiredo; ; http://lattes.cnpq.br/4989617783837981; Rocha, Maria Valderez Ponte; ; http://lattes.cnpq.br/0639546287060338O presente trabalho investigou o potencial de diferentes materiais lignocelulósicos residuais gerados em regiões rurais e urbanas (fibra de coco maduro, casca de coco verde e casca de coco maduro), além de vegetal cultivado em ambientes inóspitos (cacto) visando à produção de etanol, sendo todos, materiais abundantes na região Nordeste do Brasil. Esses materiais foram submetidos aos pré-tratamentos com peróxido hidrogênio alcalino seguido por hidróxido de sódio (PHA-PHS), autohidrólise (PA), hidrotérmico catalisado com hidróxido de sódio (PHCHS) e organosolv usando etanol alcalino (POEA). Os materiais pré-tratados foram submetidos à hidrólise enzimática e as estratégias de fermentação e sacarificação simultânea (SSF) e fermentação e sacarificação semi-simultânea (SSSF), utilizando-se Saccharomyces cerevisiae, Pichia stipitis e Zymomonas mobilis. Avaliou-se também, a presença de compostos inibitórios (hidroximetilfurfural, furfural, ácido acético, ácido fórmico e ácido levulínico) e a água marinha no meio de cultivo. Os materiais pré-tratados por PHAPHS resultaram na deslignificação dos materiais em uma faixa entre 54,0 e 71,0%, contendo entre 51,80 e 54,91% de celulose, entre 17,65 e 28,36% de hemicelulose, entre 7,99 e 10,12% de lignina. As hidrólises enzimáticas proporcionaram conversões dos materiais em glicose entre 68,0 e 76,0%. Os rendimentos em etanol utilizando SSF e SSSF para a fibra de coco maduro pré-tratada variaram entre 0,40 e 0,43 g/g, 0,43 e 0,45 g/g, respectivamente. Os materiais pré-tratados por PA apresentaram rendimentos de sólidos entre 42,92 e 92,74%, contendo entre 30,65 e 51,61% de celulose e entre 21,34 a 41,28% de lignina. As hidrólises enzimáticas resultaram nas conversões dos materiais em glicose entre 84,10 e 92,52%. Os rendimentos em etanol utilizando casca de coco verde pré-tratada e as estratégias SSF e SSSF foram entre 0,43 e 0,45 g/g. A fibra de coco maduro pré-tratada por PHCHS apresentou rendimentos de sólidos entre 21,64 e 60,52%, com aumento de celulose entre 28,40 e 131,20%, redução de hemicelulose entre 43,22 e 69,04%, redução de lignina entre 8,27 e 89,13%. A hidrólise enzimática resultou em conversão do material em glicose de 90,72%. Os rendimentos em etanol utilizando SSF e SSSF foram 0,43 e 0,46 g/g, respectivamente. Os materiais pré-tratados por POEA apresentaram reduções de sólido entre 10,75 e 43,18%, aumento de celulose em até 121,67%, redução de hemicelulose em até 77,09% e redução de lignina em até 78,22%. As hidrólises enzimáticas resultaram nas conversões dos materiais em glicose entre 77,54 e 84,27%. Os rendimentos em etanol utilizando cacto pré-tratado e as estratégias SSF e SSSF foram entre 0,41 e 0,44 g/g, 0,43 e 0,46 g/g, respectivamente. As fermentações alcoólicas realizadas em biorreator resultaram em rendimentos e produção de etanol entre 0,42 e 0,46 g/g, 7,62 e 12,42 g/L, respectivamente. Os compostos inibitórios apresentaram efeitos sinérgicos negativos nas fermentações realizadas por P. stipitis, Z. mobilis e S. cerevisiae. O ácido fórmico e o ácido acético apresentaram efeitos mais significativos entre os compostos inibitórios, seguido pelo hidroximetilfurfural, furfural e ácido levulínico. As fermentações realizadas em meio de cultivo diluído com água marinha apresentaram resultados promissores, especialmente quando se utilizou S. cerevisiae (0,50 g/g) e Z. mobilis (0,49 g/g). Os diversos resultados obtidos no presente trabalho indicam que, os materiais lignocelulósicos, pré-tratamentos, estratégias fermentativas e micro-organismos estudados merecem atenção por parecerem promissores e passíveis de serem utilizados no contexto de biorrefinaria visando à produção de etanol.