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https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/15787| Título: | Avaliação de dois clones de Escherichia coli recombinante quanto ao crescimento e expressão de antígenos de Leishmania chagasi (kmp11 e P36) |
| Autor(es): | Chaves, Roberta Viana Araújo |
| Orientador: | Macedo, Gorete Ribeiro de |
| Palavras-chave: | Proteínas;Escherichia coli recombinante;Leishmania chagasi Antígenos recombinantes;Clones recombinantes;Proteins;Recombinant Escherichia coli;Leishmania chagasi Recombinant antigens;Recombinant clones |
| Data do documento: | 14-Dez-2009 |
| Editor: | Universidade Federal do Rio Grande do Norte |
| Referência: | CHAVES, Roberta Viana Araújo. Avaliação de dois clones de Escherichia coli recombinante quanto ao crescimento e expressão de antígenos de Leishmania chagasi (kmp11 e P36). 2009. 82 f. Dissertação (Mestrado em Pesquisa e Desenvolvimento de Tecnologias Regionais) - Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2009. |
| Resumo: | A leishmaniose visceral, causada pela espécie Leishmania chagasi, também conhecida como calazar, apresentou, no período de 1990 a 2005, taxa de incidência no Brasil variando entre 1 e 3 casos por 100 mil habitantes. A região Nordeste, que até o ano de 2000 contribuiu com quase 90% dos casos registrados, está reduzindo sua participação na década atual, chegando a 56% em 2005. O alto custo e toxicidade das drogas usadas no tratamento convencional dessa leishmaniose levaram a busca de tratamentos alternativos, com interesse especial na pesquisa e produção de antígenos por microrganismos recombinantes para desenvolvimento de vacinas e kits de diagnóstico. A bactéria Escherichia coli tem sido o microrganismo mais estudado e usado como hospedeiro para produção de proteínas recombinantes. Nesse contexto, este trabalho tem como objetivo estudar a influência da indução no crescimento celular e a verificação do tipo de expressão (intra ou extracelular) de antígenos de Leishmania chagasi através de cultivo de dois clones de E. coli recombinante (kmp11 e P36) em incubador rotativo (shaker) usando três meios diferentes (2xTY, TB, FASS+EL). Para isso, foram realizados ensaios em condições estabelecidas na literatura para E. coli (37°C à 200 rpm) e os meios suplementados com antibióticos para garantir somente o crescimento de células competentes. Na primeira etapa, foram realizados ensaios sem indução a fim de se verificar o comportamento cinético dos dois clones (crescimento e consumo de substrato) nos diferentes meios. Na segunda etapa, a indução foi realizada através da adição de IPTG (concentração final de 1mM), na primeira hora de cultivo. Foi observada que a expressão das proteínas foi intracelular para todos os clones e meios testados, entretanto o maior nível foi verificado nitidamente pela densidade (intensidade) da banda nos géis de eletroforese para o meio 2xTY e proteína kmp11. Apesar de o meio 2xTY conter uma menor concentração de substratos, conseqüentemente, uma concentração celular reduzida quando comparada aos outros meios, pareceu que esta combinação de meio e clone é mais indicada para produção das proteínas recombinantes testadas neste trabalho. O objetivo desse trabalho foi alcançado já que a proteína de interesse foi produzida. Conseqüentemente, este resultado motiva novos estudos para otimização da produção usando diferentes estratégias de cultivo |
| Abstract: | Visceral leishmaniosis caused by Leishmania chagasi, also known as calazar, presented, in the period from 1990 to 2005, tax of incidence in Brazil varying between 1 and 3 cases for 100 000 inhabitants. The Northeast region that up to the year of 2000 contributed with almost 90% of the registered cases is reducing his participation in the current decade, reaching 56% in 2005. Conventional leishmaniasis treatment is costly and it shows high toxicity, demanding more research for alternative treatments, with special interest in development of vaccines and diagnosis kits which include production of recombinant antigens by host cells. Escherichia coli has been the microorganism most studied and used as a host for recombinant protein production. Therefore, the aim of this work was to study the influence of induction on cellular growth and to verify the type of Leishmania chagasi antigens expression (intra or extracellular) during two recombinant E. coli clones (kmp11 and P36) cultivation in rotary incubator (shaker) using three different media (2xTY, TB, FASS+EL). For that, tests were carried out using conditions established in the literature for E. coli (37°C and 200 rpm) and media supplemented with antibiotics to guarantee that only competent cells grows. First, tests were carried out without induction in order to verify the two microorganisms kinetic behavior (growth and substrate consumption) in different media. Next, the induction was carried out through the addition of IPTG (1mM as final concentration), at the first hour of cultivation. It was observed that protein expression were intracellular for all clones and media tested, however the highest level of expression was clearly observed by the electrophoresis band density (intensity) for 2xTY medium and kmp11 protein. Although it contains the lowest substrate concentration, consequently, a reduced cellular concentration when compared to other media, it appeared that this medium and clone combination is the most indicated for recombinant protein production. Therefore, the objective of this work was achieved, since the interested proteins were produced. Consequently, this result motivates new studies for production optimization using different cultivation strategies |
| URI: | https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/15787 |
| Aparece nas coleções: | PPGEQ - Mestrado em Engenharia Química |
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