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Title: Capacidade de adesão e formação de biofilme de Candida ssp. isoladas da cavidade oral de pacientes transplantados renais na presença do extrato de Eugenia uniflora
Authors: Souza, Luanda Barbara Ferreira Canário de
Keywords: Candida spp.;Candidíase oral;Receptores de transplante renal;Fatores de virulência;Eugenia uniflora
Issue Date: 30-Mar-2015
Publisher: Universidade Federal do Rio Grande do Norte
Citation: SOUZA, Luanda Barbara Ferreira Canário de. Capacidade de adesão e formação de biofilme de Candida ssp. isoladas da cavidade oral de pacientes transplantados renais na presença do extrato de Eugenia uniflora. 2015. 155f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2015.
Portuguese Abstract: A candidíase é uma importante manifestação oral em pacientes transplantados renais. Candida spp. possuem fatores de virulência que contribuem para o processo infeccioso, incluindo a capacidade de aderir a células epiteliais e a formação de biofilme em superfícies bióticas e abióticas. O extrato obtido a partir das folhas de Eugenia uniflora [acetona: água (7:3, v/v)] tem demonstrado atividade antifúngica contra Candida spp. Este estudo avaliou a influência do extrato de E. uniflora na adesão às Células Epiteliais Bucais Humanas (CEBH) e formação de biofilme de 42 cepas de Candida spp. isoladas da cavidade oral de pacientes transplantados renais. As cepas de Candida spp. pertencentes a um banco de microorganimos foram reativadas e reidentificadas fenotipicamente através da metodologia clássica e por métodos moleculares (genotipagem ABC e RAPD), quando necessário, para a conclusão da identificação em nível de espécie. Para os ensaios de virulência avaliados in vitro, as leveduras foram cultivadas na presença e ausência de 1000 µg/ mL de extrato. Uma proporção de 10:1 células (células Candida spp. x CEBHs) foi incubada durante 1 hora a 37 °C, 200 rpm, fixadas com formalina a 10% e o número de células de Candida aderidas a 150 CEBH foram determinadas em microscópio óptico. Os biofilmes foram formados em microplacas de poliestireno na presença e ausência do extrato. A quantificação foi realizada com coloração por cristal violeta a 570 nm. Todos os isolados apresentaram-se viáveis e na reidentificação fenotípica apresentaram características sugestivas de cada espécie identificada. Duas cepas identificadas presuntivamente como Candida dubliniensis foram confirmadas como pertencentes a esta espécie através da genotipagem ABC, e as cepas identificadas como pertencentes ao complexo Candida parapsilosis foram diferenciadas através da genotipagem por RAPD. Candida albicans destacou-se como a espécie com maior potencial de adesão ao epitélio bucal, enquanto que C. tropicalis apresentou expressiva formação de biofilme. Detectamos que o extrato de E. uniflora foi capaz de reduzir a adesão ao CEBH tanto para Candida albicans como para as espécies de Candida não-Candida albicans. Por outro lado, apenas 16 cepas de Candida spp. (36%) apresentaram a formação de biofilme reduzida na presença do extrato. No entanto, duas cepas de C. tropicalis altamente produtoras de biofilme tiveram uma redução expressiva na capacidade de formação de biofilme. Este estudo reforça a ideia de que, além da inibição do crescimento, E. uniflora pode interferir com a expressão de alguns fatores de virulência de Candida spp., e pode ser eventualmente aplicada no futuro como um possível agente antifúngico.
Abstract: Candidiasis is a major oral manifestation in kidney transplant patients. Candida spp. possess essential virulence factors which contribute for the infectious process, including the ability to adhere to epithelial cells and biofilm formation. The extract obtained from the leaves of Eugenia uniflora [acetone: water (7:3, v/v)] has demonstrated antifungal activity against Candida spp. This study evaluated the influence of the extract of E. uniflora in adhesion to human buccal epithelial cells (HBEC) and biofilm formation of 42 strains of Candida spp. isolated from the oral cavity of kidney transplant patients. Candida spp. strains belonging to a culture collection were reactivated and phenotypically re-identified by classical and molecular methods (genotyping ABC and RAPD), when necessary, to complete the identification to the species level. For the virulence tests evaluated in vitro, yeasts were grown in the presence and absence of 1000 g/mL of the extract. A ratio of 10: 1 (Candida spp. cells x HBECs) was incubated for 1 hour at 37 ° C, 200 rpm, fixed with 10% formalin and the number of Candida cells adhered to 150 HBEC determined by optical microscope. Biofilms were formed on polystyrene microplates in the presence or absence of the extract. The quantification was performed with crystal violet staining at 570 nm. All isolates were viable and exhibited phenotypic characteristics suggestive of each species identified. Two strains presumptively identified as Candida dubliniensis belonged to this species as determined with genotyping ABC, while strains identified as belonging to the Candida parapsilosis species complex were differentiated by RAPD genotyping. Candida albicans was found to be the most adherent species to the buccal epithelia, while C. tropicalis showed remarkable biofilm formation.We could detect that the extract of E. uniflora was able to reduce adhesion to HBEC for both Candida albicans and non-Candida albicans Candida species. On the other hand, only 16 Candida spp. strains (36 %) showed reduced biofilm formation. However, two highly biofilm producer strains of C. tropicalis had an expressive reduction in biofilm formation. This study reinforces the idea that besides growth inhibition, E. uniflora may interfere with the expression of some virulence factors of Candida spp., and may be possibly applied in the future as a novel antifungal agent.
URI: https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/20306
Appears in Collections:PPGCF - Mestrado em Ciências Farmacêuticas

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