1. Universidade Federal do Rio Grande do Norte
2. Instituto do Cérebro
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Title:	Sinalização por Sonic Hedgehog influencia a proliferação e diferenciação de progenitores gliais in vivo.
Authors:	Araújo, Geissy Lainny de Lima Araújo, Jéssica Alves de Medeiros Costa, Marcos Romualdo
Keywords:	Sonic Hedgehog;Gliogênese;Progenitores Gliais
Issue Date:	Sep-2014
Portuguese Abstract:	O Sonic Hedgehog (Shh) é uma proteína essencial durante o desenvolvimento do sistema nervoso central (SNC). Há uma vasta literatura apresentando suas funções e efeitos sobre a proliferação de células em diferentes estágios do desenvolvimento embrionário. No entanto, a função desta proteína sobre populações celulares específicas ainda está pouco elucidada. O presente trabalho demonstra a influencia do Shh sobre as células­tronco neurais e, mais restritamente, sobre a população glial presente no córtex cerebral em desenvolvimento. Objetivos O objetivo principal consiste em avaliar a influência da via de sinalização por Shh sobre a proliferação e diferenciação de progenitores gliais na substância branca e substância cinzenta de roedores. Manipulamos essa via através de injeções intraperitoneais de agonistas e antagonistas do Shh em fêmeas grávidas em diferentes períodos da gestação. Os efeitos do aumento ou redução da sinalização por Shh sobre essa população foram avaliados quantitativamente no período pós­natal. Métodos Fêmeas grávidas da linhagem de camundongos C57bl/6 receberam injeção de Purmorfamina, um agonista da via de Shh, por 3 dias sendo estes o 12°, 13° e 14° dia embrionário. No 13° dia as fêmeas também foram injetadas com 5­bromo­2' deoxyuridine (BrdU), incorporado apenas por células progenitoras na fase S do ciclo celular. A prole foi avaliada no dia pós natal 7 (P7). Para o bloqueio da via do Shh utilizamos a injeção de Ciclopamina no dias embrionários 16°, 17° e 18° sendo o Brdu administrado no 17° dia. Os animais também foram sacrificados para a análise em P7. Para a imunohistoquímica, foram utilizados anticorpos contra marcadores de população de progenitores/ células gliais como o Oligodendrocyte transcription factor (Olig2) e o Glial fibrillary acidic protein (GFAP). Além disso, a marcação para BrdU também foi evidenciada, permitindo a análise de co­localização desses marcadores. Foram adquiridas imagens dos cortes histológicos no microscópio confocal (Examiner Z.1, Zeiss). Foram analisadas duas áreas, a substância branca periventricular, a substância cinzenta imediatamente acima dessa, correspondente ao córtex motor primário. Análises estatísticas foram realizadas com o programa Prism 5 (GraphPad). Para a comparação de dois grupos (controle x experimental) foi realizado teste t não pareado. O intervalo de confiança desse estudo é de 95%. Todos os procedimentos realizados estão de acordo com as leis da Sociendade de Biologia Experimental para experimentação em animais e foram previamente aprovados pelo comitê de ética da instituição envolvida sob o parecer número 040/2014. Resultados e Conclusões O tratamento com Purmorfamina leva a um aumento do número de células co­marcadas para BrdU e Olig2 na substância branca: Controle: Média ± SEM: 3.067 ± 0.4595 N=3 Purmorfamina: Média ± SEM: 7.293 ± 0.8668 N=2. Já na substância cinzenta não foi observada diferença estatística entre os grupos: Controle: Média ± SEM: 2.720 ± 0.6958 N=3 Purmorfamina: Média ± SEM: 3.596 ± 0.5382 N=2 Os animais tratados com Ciclopamina ainda estão em processo de análise. Com o aumento da sinalização por Shh em período anterior a gliogênese, podemos observar um maior número de progenitores gliais em processo mitótico, localizados na substância branca do cérebro de roedores. Com isso, podemos concluir que a sinalização por Shh promovida pela administração da Purmorfamina durante a gestação, leva a uma maior especificação glial em períodos precoces do desenvolvimento do SNC.
URI:	https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/24379
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