Avaliação da atividade citotóxica in vitro e in silico de alcaloides de Erythrina velutina em células de câncer cervical imortalizadas pelo Papilomavirus Humano (HPV)

dc.contributor.advisorFreitas, Janaina Cristiana de Oliveira Crispim
dc.contributor.advisor-co1Giordani, Raquel Brandtpt_BR
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/5032750980466610
dc.contributor.advisorIDhttps://orcid.org/0000-0002-1344-0078
dc.contributor.advisorLatteshttp://lattes.cnpq.br/2644540835478572
dc.contributor.authorMiranda, Cleine Aglacy Nunespt_BR
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/5810063100520452
dc.contributor.referees1Silva Júnior, Arnobio Antonio da
dc.contributor.referees1IDhttps://orcid.org/0000-0002-7516-1787
dc.contributor.referees1Latteshttp://lattes.cnpq.br/2593509584288129
dc.contributor.referees2Silbiger, Vivian Nogueirapt_BR
dc.contributor.referees2IDhttps://orcid.org/0000-0002-9252-0278
dc.contributor.referees2Latteshttp://lattes.cnpq.br/6121935907512568
dc.contributor.referees3Donadi, Eduardo Antôniopt_BR
dc.contributor.referees3IDhttps://orcid.org/0000-0002-9457-9601
dc.contributor.referees3Latteshttp://lattes.cnpq.br/8778713382135771
dc.contributor.referees4Silva, Norma Lucenapt_BR
dc.date.accessioned2025-07-24T19:30:10Z
dc.date.available2025-07-24T19:30:10Z
dc.date.issued2018-09-17
dc.description.abstractConsidering the high occurrence of cervical cancer in the world and the adverse effects of the available treatments, the studies involving plant properties are relevant to the new generation of therapies for this particular type of tumor. Erythrina velutina (EV) is a native plant of Brazil, popularly known as mulungu. Preparations based on the husks of mulungu are used in traditional medicine as a sedative, an anticonvulsant and in the treatment of sleep disorders. Among the classes of metabolites found in the genus, it is worth mentioning the occurrence of erythrin alkaloids in several species. In this study, the total alkaloids fraction of the leaves was obtained by acid-base extraction and analyzed by Gas Chromatography coupled to a Mass Spectrometer. Six erythrocyte alkaloids, erythrin, erythraline, erythradine, erythrocyte, cristamidine and oxo- erythraline were identified from the chromatographic analysis of the EV extract. Only erythraline and oxo-erythraline have been reported in this species. The total alkaloid fraction and the erythraline isolate were evaluated for cytotoxic properties in SiHa strain HPV16+cervical cancer. The isolated alkaloid has also been tested in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy women. All cells were cultured in culture medium and incubated with different concentrations of the samples. Cell viability was quantified by the MTT assay and absorbance (570 nm) by an ELISA reader, in each experiment. Cell death was evaluated using propidium iodide and anexin staining and flow cytometry analyzes. Both the total alkaloid fraction of EV, and its isolated compound, erythraline, significantly inhibited (p <0.05) the growth of SiHa cells at time kinetics of 24 and 48 hours. There was also an increase in cell death in a dose-dependent manner through cytometric analysis. After treatment with erythraline, the cell viability assay showed that the inhibitory effects were consistent with the morphological changes observed under a light microscope in a dose-dependent manner. The results also suggest there is a tendency to stop the cell cycle of SiHa in the G2/M phase in the presence of erythraline. It was observed that the percentages of cell death increased after exposure to erythraline associated with z-VAD (caspase inhibitor). Regarding the action of erythraline on human PBMC, no cytotoxic effect was observed. Using an in silico assay, three possible antitumor targets of interactions with erythraline isolated alkaloid, Polyamine Oxidase (PAO), Pyruvate Kinase M2 (PKM2) and Tankirase (TANK) were found. Based on evaluations of in vitro cytotoxic action and in silico studies, total alkaloids of Erythrina velutina and its erythraline isolate, played an important role in cytotoxicity, cell death and exhibited potential targets for cervical cancer immortalized by HPV.
dc.description.resumoConsiderando a alta ocorrência de câncer cervical no mundo e os efeitos adversos dostratamentos disponíveis são relevantes os estudos envolvendo ativos vegetais para a geraçãode novas terapias para este tipo de tumor. Erythrina velutina (EV) é uma planta nativa do Brasilpopularmente conhecida como mulungu. Preparações à base das cascas do mulungu sãoutilizadas na medicina tradicional como calmante, anticonvulsivante e no tratamento dedistúrbios do sono. Entre as classes de metabólitos encontradas no gênero merece destaque aocorrência de alcaloides eritrínicos em diversas espécies. Neste estudo, a fração de alcaloidestotais das folhas foi obtida por extração ácido-base e analisada por Considerando a alta ocorrência de câncer cervical no mundo e os efeitos adversos dos tratamentos disponíveis, são relevantes os estudos envolvendo ativos vegetais para a geração de novas terapias para este tipo de tumor. Erythrina velutina (EV) é uma planta nativa do Brasil popularmente conhecida como mulungu. Preparações à base das cascas do mulungu são utilizadas na medicina tradicional como calmante, anticonvulsivante e no tratamento de distúrbios do sono. Entre as classes de metabólitos encontradas no gênero merece destaque a ocorrência de alcaloides eritrínicos em diversas espécies. Neste estudo, a fração de alcaloides totais das folhas foi obtida por extração ácido-base e analisada por Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrômetro de Massas. Na análise cromatográfica do extrato de EV foram identificados seis alcaloides eritrínicos: eritrinina, eritralina, eritradina, eritroculina, cristamidina e oxo-eritralina, sendo que apenas a eritralina e oxo-eritralina já foram reportadas nesta espécie. A fração alcaloide total e o isolado eritralina foram avaliados quanto às propriedades citotóxicas em linhagem de câncer cervical SiHa HPV16+. O alcaloide isolado também foi testado em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de mulheres saudáveis. Todas as células foram cultivadas em meio de cultura e incubadas com diferentes concentrações das amostras. A viabilidade celular foi quantificada pelo ensaio de MTT e a absorvância (570 nm) por um leitor de ELISA, em cada experimento. A morte celular foi avaliada utilizando a coloração por Iodeto de Propídio e Anexina e as análises por citometria de fluxo. Tanto a fração de alcaloides totais de EV, quanto o seu composto isolado, eritralina, inibiram significativamente (p<0,05) o crescimento de células SiHa nas cinéticas de 24 e 48 horas. Houve aumento de morte celular também de forma dose dependente através das análises por citometria. Após tratamento com eritralina, o ensaio de viabilidade celular mostrou que os efeitos inibitórios foram consistentes com as alterações morfológicas observadas sob microscópio de luz, de forma dose-tempo dependentes. Os resultados também sugerem uma tendência de parada do ciclo celular de SiHa na fase G2/M na presença de eritralina. Foi observado que os percentuais de morte celular aumentaram após exposição com eritralina associado ao z-VAD (inibidor de caspases). Em relação à ação de eritralina em PBMC humano, não foi observado efeito citotóxico. Através do ensaio in silico foram encontrados três possíveis alvos antitumorais de interações com o alcaloide isolado eritralina, as proteínas Poliamina Oxidase (PAO), Piruvato quinase M2 (PKM2) e a Tankirase (TANK). Com base nas avaliações da ação citotóxica in vitro e estudos in silico, os alcaloides totais de Erythrina velutina e seu isolado eritralina, desempenharam um papel importante na citotoxicidade, morte celular e exibiram potenciais alvos contra o câncer em linhagem cervical humano imortalizadas pelo HPV.
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
dc.identifier.citationMIRANDA, Cleine Aglacy Nunes. Avaliação da atividade citotóxica in vitro e in silico de alcaloides de Erythrina velutina em células de câncer cervical imortalizadas pelo Papilomavirus Humano (HPV). Orientadora: Dra. Janaina Cristiana de Oliveira Crispim Freitas. 2018. 87f. Tese (Doutorado em Desenvolvimento e Inovação Tecnológica em Medicamentos) - Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2018.
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/64909
dc.language.isopt_BR
dc.publisherUniversidade Federal do Rio Grande do Norte
dc.publisher.countryBRpt_BR
dc.publisher.initialsUFRNpt_BR
dc.publisher.programPROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM DESENVOLVIMENTO E INOVAÇÃO TECNOLÓGICA EM MEDICAMENTOSpt_BR
dc.rightsAcesso Abertopt_BR
dc.subjectNeoplasias do colo do útero
dc.subjectCâncer cervical
dc.subjectAlcaloides
dc.subjectErytrina velutina
dc.subjectCitoxicidade
dc.subject.cnpqCIENCIAS DA SAUDE
dc.titleAvaliação da atividade citotóxica in vitro e in silico de alcaloides de Erythrina velutina em células de câncer cervical imortalizadas pelo Papilomavirus Humano (HPV)
dc.typedoctoralThesispt_BR

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