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Título: Resistência à linezolida em estafilococos coagulase negativos resistentes à meticilina provenientes de hospitais da cidade de Natal-RN
Autor(es): Cidral, Thiago André
Palavras-chave: Estafilococos coagulase negativo;Resistência à linezolida;Mutações C2190T e G2603T no gene do rRNA;PFGE
Data do documento: 15-Jan-2016
Editor: Universidade Federal do Rio Grande do Norte
Citação: CIDRAL, Thiago André. Resistência à linezolida em estafilococos coagulase negativos resistentes à meticilina provenientes de hospitais da cidade de Natal-RN. 2016. 62f. Dissertação (Mestrado em Biologia Parasitária) - Centro de Biociências, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2016.
Resumo: Coagulase Negative Staphylococci (CoNS) belong to the normal microbiota of the skin and mucous membranes of humans and animals. The most of the infections caused by CoNS are a serious problem, since an elevated number of multi-drug resistant strains. The objective of this study was to investigate resistance to linezolid in methicillin-resistant coagulase negative staphylococci isolates from hospitals in the city of Natal. Bacterial samples were collected from spontaneous demand from Public and Private Hospitals of the city of Natal-RN. The identification staphylococci of the species were conducted by conventional biochemical. Some Samples had the identification to the species level confirmed by automated methodologies VITEK 2® and VITEK MS®. The resistance profile was evaluated with use of the disk diffusion technique (CLSI, 2013). The MIC to vancomycin and linezolid were determined by using E-test method. The antimicrobial resistance profile was evaluated by disk diffusion technique (CLSI 2013). The Minimum Inhibitory Concentration linezolid and vancomycin were determined by using E-test and the presence of the mecA gene and cfr was confirmed by the technique of Polymerase Chain Reaction. Some samples had the V region of the subunit 23S rRNA gene sequenced and subjected to PFGE technique for determining its pulsotype. Of the 43 coagulase negative staphylococci resistant to methicillin included in this study, 33 (77%) were identified as S. epidermidis, 6 (14%) as S. haemolyticus, 3 (7%) as S. homins and 1 (2%) as S. capitis. The catheter tip isolates accounted for 14% (6) and the blood culture 86% (37). Samples showed an alarming resistance profile, since 98% of the isolates were resistant to four or more class drugs. All were positive for mecA gene. No samples were resistant to vancomycin. Three S. hominis and two S. epidermidis exhibited linezolid resistance with MIC ranging from 6 to 64 μL/mL. None of the samples had the cfr gene. When investigated, they showed two point mutations each (C2190T and G2603T) in the V region of the 23s rRNA gene. None of them was the cfr gene. The S.hominis of PFGE showed the presence of a single pulsotype in three hospitals, suggesting a clonal spread, while it was not found genetic similarity among S. epidermidis. These findings highlight the importance of continued vigilance of linezolid resistance in the genus Staphylococcus.
metadata.dc.description.resumo: Os Estafilococos Coagulase Negativos (ECN) são microrganismos pertencentes à microbiota normal da pele e de mucosas dos seres humanos e de animais. A maioria das infecções causadas por ECN estão relacionadas ao uso de dispositivos médicos invasivos que ao lesionar a integridade da pele servem de base para a formação de biofilmes, um importante fator de virulência. Grande parte dos isolados de coagulase negativo são provenientes de hemoculturas e pontas de cateter e nos últimos anos vem se tornando um grave problema no que diz respeito à antibioticoterapia, em virtude do número elevado de cepas multirresistentes descritas. O objetivo deste trabalho foi pesquisar resistência à linezolida em estafilococos coagulase negativos resistentes à meticilina isolados de ponta de cateter e hemocultura de hospitais públicos e privados da cidade do Natal. Os isolados bacterianos foram coletados a partir de demanda espontânea em Hospitais Públicos e Privados. O gênero Staphylococcus foi confirmado através dos testes de rotina como coloração de Gram, prova da catalase da coagulase livre. A identificação a nível de espécie foi realizada através de testes bioquímicos convencionais. Algumas amostras tiveram sua identificação confirmada pelos sistemas VITEK 2 e MALDI-TOF. O perfil de resistência aos antimicrobianos foi avaliado através da técnica de disco-difusão (CLSI 2013). A Concentração Inibitória Mínima para vancomicina e linezolida foi determinada através do uso de E-test e a presença dos genes mecA e cfr foi confirmada pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase. Algumas amostras tiveram a região V da subunidade 23S do gene do rRNA sequenciadas e analisadas. Posteriormente, as mesmas foram submetidas a técnica do PFGE para determinação do seu pulsotipo. Dos 43 estafilococos coagulase negativos resistentes à oxacilina incluídos neste estudo, 33 (77%) foram identificados como S. epidermidis, 6 (14%) como S. haemolyticus, 3 (7%) como S. homins e 1 (2%) como S. capitis. Os isolados de hemocultura representaram 86% (37) e os de ponta de cateter 14% (6). As amostras apresentaram um perfil de multirresistência, uma vez que 42 dos 43 isolados apresentaram resistência à 4 ou mais classes de drogas. Todas apresentaram o gene mecA. Nenhuma amostra apresentou resistência à vancomicina. Três cepas de S. hominis e duas de S. epidermidis, apresentaram resistência à linezolida com CIM variando entre 6 e 64 µL/mL. Quando investigadas, apresentaram duas mutações pontuais (C2190T e G2603T) na região V do gene para rRNA 23S. Nenhuma destas apresentou o gene cfr. O PFGE dos S. hominis revelou a presença de um único pulsotipo em 3 hospitais, enquanto não foi encontrado semelhança genética entre os S. epidermidis. Estes achados destacam a importância da vigilância continuada em relação a resistência a linezolida no gênero Staphylococcus.
URI: http://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/21373
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