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    Tese
    Aproveitamento do soro do queijo "coalho" para produção e aplicação da β-galactosidase
    (2019-12-18) Carvalho, Catherine Teixeira de; Macedo, Gorete Ribeiro de; Sousa Júnior, Francisco Canindé de; ; ; ; Porto, Ana Lúcia Figueiredo; ; Assis, Cristiane Fernandes de; ; Santos, Everaldo Silvino dos; ; Oliveira Júnior, Sérgio Dantas de;
    O presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial do soro do queijo “coalho” como substrato para produção de biomoléculas por leveduras Kluyveromyces sp. e investigar estratégias de purificação e imobilização da enzima β-galactosidade (β-gal) visando aplicação industrial. Na primeira etapa, observou-se o comportamento das leveduras para síntese de β-gal e a produção de etanol por fermentação submersa em frascos agitados e biorreator utilizando diferentes razões carbono/nitrogênio C:N (1,5:1 e 2,5:1). A melhor eficiência foi obtida com Kluyveromyces lactis NRRL Y- 8279, que produziu 21,09 ± 0,69 U/mL de β-gal e 7,10 ± 0,09 g/L de etanol em 16 horas de cultivo. Diante dos resultados iniciais, avaliou-se as condições de purificação da β-gal em cromatografia em leito fixo utilizando um planejamento experimental 2 2 . Os parâmetros pH e força iônica foram avaliados considerando o fator de purificação, sem prejuízo ao rendimento. Os níveis mais altos de ambos os parâmetros no estudo aumentaram o fator de purificação (FP) de β-gal para 2,00, com maior influência da força iônica na resposta para FP. A enzima purificada parcialmente foi submetida a eletroforese, que apresentou uma banda com massa molecular na faixa entre 66 e 140 kDa, configurando a enzima de interesse. Na última etapa do estudo, observou-se as condições de hidrólise da lactose no soro de queijo “coalho” com a forma imobilizada de β-gal em alginato de sódio a 1% (p/v). A eficiência da imobilização atingiu 66%. Além disso, a forma imobilizada da enzima apresentou maior estabilidade às mudanças de pH e temperatura e uma conversão de lactose (46%) sem maiores diferenças estetíticas quando comparada ao extrato bruto de β-gal (53%). Para as simulações gástricas e intestinais, cerca de 40% da atividade enzimática foi preservada após 2 horas de exposição a condições gastrointestinais simulados. No geral, os resultados aqui descritos são promissores para as aplicações industriais da β-galactosidase de K. Lactis NRRL Y- 8279.
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    Dissertação
    Avaliação do potencial biotecnológico de bactérias láticas para produção de biomulsificantes, bacteriocinas e lipase
    (Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-06-09) Medeiros, Naiany Silva de; Sousa Júnior, Francisco Canindé de; https://orcid.org/0000-0003-2042-4348; http://lattes.cnpq.br/3721560802857426; http://lattes.cnpq.br/2458236335512544; Carvalho, Catherine Teixeira de; Araújo, Nathalia Kelly de
    As bactérias láticas (BALs) são um grupo diverso de microrganismos que consistem em bastonetes ou cocos Gram-positivos, geralmente considerados microrganismos seguros (GRAS). Durante a fermentação, as BALs produzem metabólitos que possuem atividades antioxidante, antidiabética, antimicrobiana e emulsificante. Portanto, o presente estudo teve por objetivo avaliar o potencial biotecnológico de bactérias láticas quanto a produção de biossurfactantes/bioemulsificantes, lipase e bacteriocinas. Inicialmente, realizou-se a triagem de quatro linhagens de BALs quanto a capacidade de produzir biossurfactantes/bioemulsificantes (Lactobacillus acidophilus NRRL B-4495, Lactiplantibacillus plantarum NRRL B-4496, Lacticaseibacillus rhamnosus EM1107 e Lacticaseibacillus paracasei Shirota). A linhagem de L. paracasei foi selecionada para o estudo das condições de produção de biossurfactantes/bioemulsificantes. Em seguida, um delineamento composto central rotacional (DCCR) 22 foi realizado para avaliar a influência da concentração de glicerol e pH inicial sobre a densidade óptica a 600 nm (DO600 nm) e índice de emulsificação após 24h (IE24%). Os sobrenadantes do cultivo de L. paracasei foram testados quanto a atividade antimicrobiana (contra Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 8739, Burkholderia cepacia ATCC 25416 e Burkholderia multivorans ATCC BAA247), atividade antioxidante in vitro, atividade antidiabética in vitro e foram avaliados quanto a atividade de lipase. Além disso, um DCCR 23 foi realizado para avaliar a influência da concentração de lactose, peptona e pH inicial na produção de bacteriocinas. Os resultados do primeiro DCCR mostraram que a concentração de glicerol e pH na faixa estudada não interferiram na DO600nm. No que diz respeito ao IE24%, a resposta máxima foi obtida com 4,8% de glicerol e pH na faixa de 6 a 7. O teste de atividade antimicrobiana demonstrou que os sobrenadantes testados não exibiram atividade frente às cepas testadas. Foi observada atividade antioxidante notavelmente alta tanto para os sobrenadantes testados quanto para o controle (MRS), indicando a possibilidade da presença de algum interferente no meio de cultivo. Além disso, foi observada atividade inibitória para amiloglucosidase (20,7% e 23,9%). Foi constatada atividade lipolítica nos sobrenadantes (16,12 e 19,00 U/mL). Também foi verificado que a variável concentração de peptona, lactose e pH influenciaram positivamente na produção de bacteriocinas por L. paracasei. Conclui-se que L. paracasei pode ser uma fonte viável de metabólitos com atividades antidiabética, antimicrobiana (bacteriocinas), bioemulsificantes e lipolíticas.
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