Identificação molecular, caracterização dos fatores de virulência e perfil de susceptibilidade antifúngica de isolados de Trichosporon spp

dc.contributor.advisorChaves, Guilherme Maranhão
dc.contributor.advisorIDhttps://orcid.org/0000-0002-0170-9383
dc.contributor.advisorLatteshttp://lattes.cnpq.br/1463249528959656
dc.contributor.authorJimenez, Márcia Gabriele de Souza
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/2621755476353143
dc.contributor.referees1Andrade, Vânia Sousa
dc.contributor.referees2Guerra, Felipe Queiroga Sarmentopt_BR
dc.date.accessioned2025-06-03T22:24:31Z
dc.date.available2025-06-03T22:24:31Z
dc.date.issued2022-12-21
dc.description.abstractYeasts belonging to the genus Trichosporon emerge as emerging pathogens with high mortality rates. Primarily, Trichosporon species are etiological agents of white piedra, a fungal infection characterized by nodules adhered to the extrafollicular region of the hair shaft. However, in recent decades, Trichosporon spp. have been considered opportunistic pathogens responsible for severe communities. The number of researches involving the genus Trichosporon is still scarce, with little information available on the profiles of sensitivity to antifungal agents, expression of virulence factors “in vitro” and the actual distribution of the species in the different sites of infection. The objectives of this study were to carry out a molecular identification (IGS1 region of the rDNA) of Trichosporon spp. transmitted from white “piedra”, as well as determining the expression of “in vitro” virulence factors, including: DNases, hemolysins and phospholipases activity, ability to adhere to epithelial cells, cell surface hydrophobicity, melanin and biofilm production, in addition to evaluating fungal growth in the presence of cellular stressors. Also determine the antifungal susceptibility profile of clinical isolates of Trichosporon spp. and the results were compared to systemic infection strains. We identified 4 T. asahii isolates, 17 T. inkin isolates, 2 T. faecale and 2 T. asteroides isolates. Phylogenetic analysis revealed a higher degree of genetic relatedness (high bootstrap value) between T. asahii, T. asteroides and T. faecale, with T. inkin being considered a less closely related species. T. inkin isolates were more prevalent in clinical samples from patients with white piedra, in addition to showing greater ability to adhere to epithelial cells. The T. asahii isolates showed higher capacity for biofilm formation, cell surface hydrophobicity and hemolytic index. All evaluated isolates were able to produce hemolysins and DNases, whereas melanin production in Niger Seed Agar was not detected. Phospholipase production was negative for all tested isolates, except for two strains of T. inkin, which showed a high Pz value (low enzyme production). Several isolates considered minimal inhibitory concentrations and high epidemiological cut-off values, with a tendency to multidrug resistance to azoles (ketoconazole, itraconazole and fluconazole) and amphotericin B. Although the present study included few T. asahii isolates, they were captured this species, in general, stands out in the expression of virulence factors and resistance to antifungal agents, reinforcing its importance in invasive trichosporonosis.
dc.description.resumoAs leveduras pertencentes ao gênero Trichosporon surgem como patógenos emergentes com altas taxas de mortalidade. Primariamente, espécies de Trichosporon são agentes etiológicos de “piedra” branca, uma infecção fúngica caracterizada por nódulos aderidos à região extrafolicular do fio de cabelo. Entretanto, nas recentes décadas, Trichosporon spp. têm sido consideradas patógenos oportunistas responsáveis por infecções graves. O número de investigações que envolvem o gênero Trichosporon ainda é escasso, havendo poucas informações disponíveis sobre os perfis de sensibilidade aos antifúngicos, expressão de fatores de virulência “in vitro” e a real distribuição das espécies nos diferentes sítios de infecção. Os objetivos deste estudo foram realizar a identificação molecular (região IGS1 do rDNA) de cepas de Trichosporon spp. obtidas de “piedra” branca, bem como determinar a expressão de fatores de virulência “in vitro”, incluindo: Atividade de DNases, hemolisinas e fosfolipases, capacidade de adesão a células epiteliais, hidrofobicidade de superfície celular, produção de melanina e de biofilme, além de avaliar o crescimento fúngico na presença de estressores celulares. Determinou-se também o perfil de susceptibilidade antifúngica de isolados clínicos de Trichosporon spp. e os resultados foram comparados a cepas obtidas de infecção sistêmica. Foram identificados 4 isolados de T. asahii, 17 isolados de T. inkin, 2 de T. faecale e 2 de T. asteroides. A análise filogenética revelou maior grau de relacionamento genético (alto valor de “bootstrap”) entre T. asahii, T. asteroides e T. faecale, sendo que T. inkin foi considerada a espécie menos intimamente relacionada. Os isolados de T. inkin foram mais prevalentes em amostras clínicas obtidas de pacientes com “piedra” branca, além de apresentarem maior capacidade de adesão às células epiteliais. Os isolados de T. asahii apresentaram maior capacidade de formação de biofilme, hidrofobicidade de superfície celular e índice hemolítico. Todos os isolados avaliados foram capazes de produzir hemolisinas e DNases, enquanto que a produção de melanina em Ágar Semente de Níger não foi detectada. A produção de fosfolipases foi negativa para todos os isolados testados, exceto para duas cepas de T. inkin, que apresentaram alto valor de Pz (baixa produção da enzima). Vários isolados avaliados apresentaram concentrações inibitórias mínimas e valores de “cut-off” epidemiológicos elevados, com tendência à multirresistência aos azólicos (cetoconazol, itraconazol e fluconazol) e anfotericina B. Embora o presente estudo tenha compreendido poucos isolados de T. asahii, observou-se que essa espécie, de modo geral, se destaca na expressão de fatores de virulência e resistência aos antifúngicos reforçando sua importância nas tricosporonoses invasivas.
dc.identifier.citationJIMENEZ, Márcia Gabriele de Souza. Identificação molecular, caracterização dos fatores de virulência e perfil de susceptibilidade antifúngica de isolados de Trichosporon spp. Orientador: Dr. Guilherme Maranhão Chaves. 2022. 80f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2022.
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/63810
dc.language.isopt_BR
dc.publisherUniversidade Federal do Rio Grande do Norte
dc.publisher.countryBRpt_BR
dc.publisher.initialsUFRNpt_BR
dc.publisher.programPROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICASpt_BR
dc.rightsAcesso Abertopt_BR
dc.subjectTrichosporon spp.
dc.subjectGenotipagem
dc.subjectVirulência
dc.subjectEstresse celular
dc.subjectSusceptibilidade antifúngica
dc.subjectPiedra branca
dc.subject.cnpqCIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA
dc.titleIdentificação molecular, caracterização dos fatores de virulência e perfil de susceptibilidade antifúngica de isolados de Trichosporon spp
dc.typemasterThesispt_BR

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