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Título: Determinação de patogenicidade e resistência à sulfadiazina de três isolados de Toxoplasma gondii do Estado do Rio Grande do Norte e atividade anti-toxoplasma do timol e estragol
Autor(es): Oliveira, Cláudio Bruno Silva de
Palavras-chave: Toxoplasma gondii;Patogenicidade;Resistência;Sulfadiazina;Timol;Estragol
Data do documento: 25-Fev-2016
Citação: OLIVEIRA, Cláudio Bruno Silva de. Determinação de patogenicidade e resistência à sulfadiazina de três isolados de Toxoplasma gondii do Estado do Rio Grande do Norte e atividade anti-toxoplasma do timol e estragol. 2016. 89f. Tese (Doutorado em Desenvolvimento e Inovação Tecnológica em Medicamentos) - Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2016.
Resumo: Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan widely distributed, it is the cause of toxoplasmosis, a usually benign disease that can have serious repercussions in immunosuppressed and congenitally infected fetuses. This disease is one of the main drivers of hospitalization related to food and, considering the atypical pattern by which this can be seen in Brazil, the adverse effects on the standard treatment and resistance emerging phenotypes present this study aimed to standardize the maintenance and determine Profile of pathogenicity and resistance to sulfadiazine of local isolates de T. gondii; check the immunogenic potential and behavioral change; Besides evaluating the antiparasitic potential of thymol and estragol versus clonal and local isolated of the parasite. The parasite-induced cytopathic effect was evaluated in RAW 264.7 cell culture and pathogenicity was determined in mice following infection with monitoring for 30 days and confirmed by PRC-RFLP using CS3 marker. The phenotypic resistance to sulfadiazine was measured using a curve doses in animals infected (100, 200 or 300 mg / kg) and anti-Toxoplasma activity of thymol and estragole against local isolates and standard strains were determined in infected Swiss mice and treated during 6 days. Changes in memory/learning and impulsiveness were assessed in plus-maze discriminative avoidance task. Polymorphisms were determined by sequencing of DHPS gene. Blood samples were collected from C57BL/6 mice for the ELISA and measurement of cytokines in C57BL/6 mice. The cytopathic effect and PCR-RFLP analysis showed that the chicken populations represent different isolates of the parasite. Isolated CK3 was the most pathogenic in vivo, moderately pathogenic isolated CK2 induced a humoral response and different behavior of ME49 strain changes. Treatment failures were observed in animals infected with CK3 and Pg 1 and treated with sulfadiazine but were not observed polymorphisms in the DHPS gene. It was possible to establish a model for determination of anti-Toxoplasma activity of new compounds and, through this, it was observable that thymol and estragole were effective against the strain ME49, but only estragole was active against the isolated CK2 with a strong Th1 response. Thymol, estragole, and sulfadiazine had no action against CK3 and Pg 1. These atypical pathogenicity and resistance profiles of local parasites were first observed in the literature and may explain the differential toxoplasmosis profiles observed in this region.
metadata.dc.description.resumo: Toxoplasma gondii é um protozoário intracelular obrigatório amplamente distribuído, ele é o etiológico da toxoplasmose, doença de curso normalmente benigno que pode ter sérias repercursões em imunossuprimidos e fetos congenitamente infectados. Esta doença é uma das principais responsáveis por hospitalização relacionada à alimentos e, considerando o padrão atípico pelo qual esta se observa no Brasil, os efeitos adversos no tratamento-padrão e os fenótipos emergentes de resistência o presente estudo teve como objetivo padronizar a manutenção e determinar o perfil de patogenicidade e resistência à sulfadiazina de isolados locais do T. gondii; verificar o potencial imunogênico e alterações comportamentais; além de avaliar o potencial antiparasitário do timol e estragol versus cepa clonal e isolados locais do parasito. O efeito citopático induzido pelo parasito foi avaliado em cultura de células RAW 264.7 e a patogenicidade foi determinada em modelo murino após infecção com monitoramento por 30 dias e confirmada por PCR-RFLP, usando o marcador CS3. A resistência fenotípica à sulfadiazina foi medida utilizando de uma curva de doses em animais infectados (100, 200 ou 300 mg/kg) e a atividade anti-Toxoplasma do timol e estragol contra isolados locais e cepa padrão foram determinadas em camundongos Suiços infectados e tratados durante 6 dias. As alterações na memória/aprendizado e impulsividade foram avaliados em labirinto em cruz elevado. Polimorfismos foram determinados por sequenciamento do gene DHPS. Amostras de sangue foram coletadas de camundongos C57BL/6 para o ELISA e dosagem de citocinas em camundongos C57BL/6. O efeito citopático e a PCR-RFLP mostraram que os isolados de galinhas representam diferentes populações do parasito. O isolado Ck3 foi o mais patogênico in vivo, o isolado moderadamente patogênico Ck2 induziu uma resposta humoral e alterações comportamentais diferentes da cepa ME49. Falhas terapêuticas foram observadas nos animais infectados com Ck3 e Pg1 e tratados com sulfadiazina, porém não foram observados polimorfismos no gene DHPS. Foi possível estabelecer um modelo para determinação da atividade anti-Toxoplasma de novos compostos e, através deste, foi obervado que timol e estragol apresentaram efetividade contra a cepa ME49, mas apenas o estragol apresentou ação contra o isolado Ck2, com forte resposta Th1. Timol, estragol e sulfadiazina não tiveram ação contra Ck3 e Pg1. Estes perfis atípicos de patogenicidade e resistência dos parasitos locais foram observados de forma inédita e podem explicar os perfis diferenciados da toxoplasmose observados nessa região.
URI: http://hdl.handle.net/123456789/23028
Aparece nas coleções:PPGDITM - Doutorado em Desenvolvimento e Inovação Tecnológica em Medicamentos

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