PPGB - Mestrado em Bioquímica
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Dissertação Beta-Glucanas extraídas do fungo Caripia montagnei (Berk.) Kuntze: uma análise das suas propriedades antioxidante, antitumoral, antiangiogênica e anti-inflamatória de forma isolada e em sinergia com AINEs, L-NAME e ligantes de PPAR alfa e gama(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2011) Castro, Allisson Jhonatan Gomes; Leite, Edda Lisboa; Cruz, Ana Katarina Menezes da; http://lattes.cnpq.br/9810605697247961; Martins, Daniella Regina Arantes; http://lattes.cnpq.br/3695151190501921; http://lattes.cnpq.br/7712988818433906; http://lattes.cnpq.br/6781850620408652As glucanas são homopolímeros de D-glicose que apresentam propriedades bioativas como influência direta na ativação de leucócitos, ação antitumoral, antioxidante e imunomodulatória. Portanto, o objetivo deste trabalho foi verificar a ação de p-Glucanas extraídas do fungo Caripia montagnei nos processos de inflamação, inibição da angiogênese e de radicais livres. A fração polissacarídica apresentou 98,5% de carboidratos, 1,5% de proteínas e 0,1 mg/mg de compostos fenólicos. Sua composição monossacarídica apresentou predominantemente glicose por CLAE com a ressonância magnética nuclear confirmando a presença de D-glicose a 103,5 ppm em configuração p. A viabilidade de fibroblasto em presença de glucanas de C. montagnei (25 pg) foi de 83,3±17,6%, com alta citotoxicidade para células tumorais HeLa a 100 pg (94,36±2,3 %). A atividade anti-edematosa obervada com 90 mg/kg de Caripia montagnei foi de 90,7+3,5%. Esta quando em sinergia com parecoxibe a atividade é de 81,3+7,4%, 100,1±12% com o L-NAME e 97,8±10% quando em sinergia com o PFOA. Na pleurisia, com o grupo tratado com as glucanas (90 mg/Kg), verificou-se uma redução da migração leucocitária de 91,04±7,3% e na produção de óxido nítrico de 48,2 %, sendo superior a atividade da indometacina. As glucanas de C. montagnei apresentaram também significante atividade antiangiogênica a 1mg/ovo. Nas atividades antioxidante total e poder redutor verificou-se uma atividade antioxidante relativas ao BHT de 57% e 84%, respectivamente. A avaliação da inibição do radical hidroxila (1 mg/ml) foi 38±0,01%, enquanto que para a peroxidação lipídica foi observada uma inibição de 37,6±0,16%. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que as p-glucanas de Caripia montagnei apresentam atividades inibitórias na inflamação, angiogênese e na inibição de radicais livres.Dissertação Comparação do potencial antioxidante in vitro, em cultivo de células e in vivo de fucoidans obtidos comercialmente(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2021-10-08) Silva, Maylla Maria Correia Leite; Câmara, Rafael Barros Gomes da; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; 76111830449; http://lattes.cnpq.br/4651814546820796; http://lattes.cnpq.br/9200036511632745; http://lattes.cnpq.br/3703561529618882; Lucena, Eudes Euler de Souza; http://lattes.cnpq.br/6969519171915250; Pinhal, Maria Aparecida da Silva; http://lattes.cnpq.br/7511274763693292Os fucoidans são polissacarídeos sulfatados que são extraídos da biomassa de algas marrons, e estes contêm, principalmente, L- fucose sulfatada em sua constituição. Esses polímeros já se encontram disponíveis comercialmente, e já foram analisados para diversos fins. Uma das atividades mais avaliadas é a antioxidante. Entre os fucoidans que já foram investigados quanto a capacidade antioxidante estão os fucoidans das algas marrons: Undaria pinnatifida; Macrocystis pyrifera e Fucus vesiculosus. Entretanto, a atividade antioxidante dos fucoidans destas, ainda não foi comparada. Dessa forma, objetivou-se com esse trabalho identificar qual desses fucoidans, que foram obtidos comercialmente (Sigma-Aldrich), apresenta a melhor atividade antioxidante. Para tal, inicialmente os fucoidans foram avaliados quanto a composição físico-química. Ao analisar os resultados obtidos, percebe-se que estes fucoidas são de fato ricos em fucose e sulfato. Com relação a massa molecular aparente verificou-se que esta varia de 70,4 a 168,5 kDa, sendo o fucoidan de U. pinnatifida o maior polímero. Nos testes antioxidantes in vitro os fucoidans apresentaram atividade moderada, com exceção do ensaio de sequestro de H2O2, onde todos os fucoidans exibiram elevada atividade de sequestro desta substância. Quando os fucoidans foram avaliados em condições de cultivo celular em macrófagos (RAW 264.7), pelos ensaios de redução de MTT (3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl) 2,5-diphenil tetrazolium bromide) e live/dead, após indução de estresse oxidativo com H2O2, observou-se que os fucoidans reduziram o efeito do H2O2 sob o metabolismo dessas células, com destaque para o fucoidan de F. vesiculosus (5 mM). Os dados obtidos in vitro e com células, deram suporte para a realização dos testes in vivo com o modelo de embriões de Danio rerio (zebrafish). Duas análises foram realizadas: a determinação da taxa de sobrevivência dos embriões e quantificação da intensidade de fluorescência das larvas que eclodiram. Foi observado que na presença dos fucoidans e H2O2, a taxa de sobrevivência dos embriões pouco foi afetada, comparado ao tratamento que recebeu apenas H2O2 (0,4 mM), onde se verificou 50% de redução da taxa de sobrevivência. A avaliação das larvas tratadas com os fucoidan e com H2O2 (0,4 mM) mostrou que o menor percentual de intensidade de fluorescência foi observado com aquelas tratadas com o fucoidan de F. vesiculosus e M. pyrifera. Considerando os resultados dos ensaios realizados, aponta-se o fucoidan de M. pyrifera como o fucoidan com melhor potencial antioxidante, principalmente nos testes in vivo. Desse modo, o fucoidan de M. pyrifera é o mais promissor com relação as atividades antioxidantes.Dissertação Caracterização de comunidades e isolados bacterianos obtidos a partir de amostra de petróleo de pré-sal brasileiro sob cultivo em presença de CO2(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2021-07-20) Barbalho, Kamilla Karla da Silva; Lima, Lucymara Fassarella Agnez; http://lattes.cnpq.br/1083882171718362; http://lattes.cnpq.br/8583882001958993; Thompson, Fabiano Lopes; http://lattes.cnpq.br/4148145822928884; Melo, Vânia Maria Maciel; http://lattes.cnpq.br/1572504650930605Os microrganismos representam a maior biomassa da Terra e estão diretamente relacionados aos ciclos biogeoquímicos. Tem sido descrito que a atividade microbiana afeta a cadeia produtiva relacionada ao setor de petróleo e gás, sendo de interesse o conhecimento quanto a microbiologia associada aos reservatórios, visando a otimização da cadeia produtiva, assim como a mitigação de impactos ambientais devido a contaminação ambiental por hidrocarbonetos (HC). Os reservatórios do pré-sal brasileiro são ambientes extremos com elevada concentração de dióxido de carbono (CO2) e alta profundidade, cuja microbiologia ainda é pouco conhecida. O objetivo deste trabalho foi caracterizar comunidades e isolados bacterianos obtidos a partir de amostra de petróleo do pré-sal submetido a cultivo em elevada concentração de CO2. A partir de uma amostra de petróleo, foram obtidos e analisados seis consórcios organizados em dois grupos: três consórcios microbianos indefinidos crescidos em elevada concentração de CO2 e os outros três obtidos da mesma amostra em aeração atmosférica e posteriormente submetido a elevadas concentrações de CO2. Os consórcios microbianos foram caracterizados quanto a: i) produção de biossurfactantes (BS); ii) curva de crescimento em presença de HC como fonte de carbono; e iii) caracterização taxonômica e funcional por sequenciamento metagenômico. Os ensaios funcionais dos consórcios mostraram que três são capazes de produzir moléculas BS capazes de gerar emulsão, ao passo que nenhum dos consórcios é capaz de dispersar o óleo. As curvas de crescimento demonstraram que cinco consórcios são capazes de crescer na ausência de fontes de carbono externa, indicando a ocorrência de fixação de carbono inorgânico, o que foi corroborado pelo sequenciamento metagenômico dos consórcios via identificação de sequências atribuídas ao gênero Ochrobactrum, o qual é capaz de fixar carbono. Nos consórcios, os filos mais abundantes foram Proteobacteria, Actinobacteria e Firmicutes, sendo os consórcios submetidos à alta concentração de CO2, após crescimento em O2, mais diversos que os consórcios crescidos em elevada concentração de CO2. Quanto ao perfil metabólico, as vias mais enriquecidas nos consórcios crescidos em CO2 foram às vias de metabolismo de aminoácidos e metabolismo de carboidratos. Dos consórcios foram obtidos dezenove isolados bacterianos e nove foram caracterizados e testados. Para os isolados foram realizados os ensaios de: i) produção de BS; ii) capacidade de degradação de HC; iii) hidrofobicidade celular e iv) atividade enzimática de hidrolases. Desses, cinco foram capazes de degradar entre 50% e 80% das frações de xileno e tolueno, e outros oito degradam 100% às frações de gasolina, diesel e querosene. Conclui-se que o crescimento de consórcios indefinidos em O2 acarreta numa maior diversidade de microrganismos, que o CO2 inibe a produção de BS e que isolados e consórcios microbianos do pré-sal mostram-se promissores como fonte de produtos biorremediadores, assim como de hidrolases com potencial aplicação industrial.Dissertação Atividade antibacteriana de magnetita (Fe3O4) isolada e associada a campos eletromagnéticos sobre Escherichia coli DH5a pVAX-1 (resistente à canamicina)(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2021-06-30) Santos, Sunamita da Silva Barbosa; Silva, Marcelo de Sousa da; http://lattes.cnpq.br/1295430560645312; http://lattes.cnpq.br/6988181736543670; Melo, Maria Celeste Nunes de; http://lattes.cnpq.br/0580551464788795; Barbosa, Júlio César Pereira; http://lattes.cnpq.br/0437190557200470Devido ao aumento da resistência bacteriana nos últimos anos, tem tornado necessário a pesquisa e desenvolvimento de terapias antibacterianas alternativas e, nesse sentido, o uso de campo magnéticos tem sido explorados por tratar-se de uma terapia não farmacológica e, por isso, provavelmente isenta dos efeitos moleculares do fenômeno de resistência. Paralelamente, nanopartículas com propriedades magnéticas, em especial a magnetita (Fe3O4), são ainda pouco exploradas quanto ao potencial antibacteriano. Nesse contexto, o presente trabalho avaliou as propriedades antibacterianas intrínsecas de nanopartículas de magnetita, sintetizadas por moagem de alta energia, e da sua associação com um campo magnético externo variável de 70 mT a 10 Hz sobre Escherichia coli DH5α pVAX-1. Após a síntese, as nanopartículas foram caracterizadas quanto sua composição e tamanho primário, por difração de raio-X (DRX); quanto ao seu tamanho hidrodinâmico, por espalhamento dinâmico de luz (DLS) e quanto à sua carga superficial, por potencial zeta. Posteriormente, os ensaios in vitro foram realizados, nos quais foram investigadas alterações na curva de inibição bacteriana; na morfologia bacteriana, por meio de microscopia (MEV), e na carga de superfície bacteriana, utilizando potencial zeta. A associação entre o antibiótico canamicina e magnetita também foi avaliado quanto ao efeito potencializado entre as substâncias. A exposição à magnetita isolada, ou combinada ao campo magnético gerou efeitos bacteriostáticos significativos, além de alterações morfológicas na superfície bacteriana e aumento no potencial zeta da suspensão. O uso de nanopartículas de magnetita também potencializou o efeito inibitório do antibiótico canamicina, apontando para o uma segunda opção de uso, como coadjuvante na terapia antibiótica. Os resultados apresentados revelam potencial antimicrobiano importante e ensaios in vivo adicionais são necessários para comprovar a importância dos efeitos observados num sistema biológico.Dissertação Efeito do inibidor de tripsina isolado da semente de tamarindo (Tamarindus indica L.) nanoencapsulado sobre parâmetros bioquímicos e histopatológicos do fígado de ratos Wistar alimentados com dieta de alto índice glicêmico(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2021-05-28) Aguiar, Ana Júlia Felipe Camelo; Morais, Ana Heloneida de Araújo; Passos, Thais Souza; 102.926.527-55; http://lattes.cnpq.br/9685790797554876; http://lattes.cnpq.br/1233944493334651; http://lattes.cnpq.br/3937321074677193; Moura, Sérgio Adriane Bezerra de; http://lattes.cnpq.br/1323062374722389; Ferreira, Ederlan de Souza; http://lattes.cnpq.br/4952207117831158Em todo o mundo tem ocorrido uma transição nutricional baseada em dietas compostas por alimentos de alto índice glicêmico e alta carga glicêmica, que associados a outros fatores, são cruciais para o aumento da prevalência da obesidade e diversas doenças, como a Doença Hepática Gordurosa Não Alcoólica (DHGNA). Essa doença abrange desde uma esteatose e esteatohepatite até quadros graves, como cirrose e carcinoma hepatocelular. O tratamento da DHGNA é uma necessidade clínica não atendida, dessa forma, diversos estudos têm procurado novas terapias não só para a DHGNA, mas também para a obesidade. Dentre eles, se destacam os achados relacionados ao inibidor de tripsina isolado de sementes de tamarindo (ITT) nanoencapsulado em quitosana e proteína isolada do soro do leite (EQPI) sobre a redução da glicemia e transaminases. Portanto, o objetivo do presente estudo foi investigar o efeito do EQPI sobre parâmetros bioquímicos e a histopatologia do fígado de ratos Wistar alimentados com dieta de alto índice glicêmico e alta carga glicêmica (dieta HGLI). Primeiramente, as nanopartículas com e sem ITT, respectivamente EQPI e QPI, foram obtidas pela técnica de nanoprecitação em solvente orgânico e, caracterizadas quanto à morfologia (MEV), tamanho de partícula (Difração a laser), interações químicas (FTIR) e eficiência de encapsulação. Os animais foram divididos em quatro grupos, contendo cinco animais cada, sendo tratados por dez dias com: 1. Dieta HGLI e água (1 mL), 2. Dieta padrão e água (1 mL), 3. Dieta HGLI e EQPI (12,5 mg/kg em 1 mL), e 4. Dieta HGLI e QPI (10,0 mg/kg em 1 mL). Foram avaliados os parâmetros bioquímicos e hematológicos, dentre eles, função renal, acometimento hepático (enzimas hepáticas, relação TGO/TGP), perfil lipídico, glicemia, insulina e, Homeostasis Aodel assessment of Insulin Resistence and β cells (HOMA-IR e HOMA-β, respectivamente). Além disso, foram também investigados os escores hepáticos FIB-4 (Fibrosis-4 Index for Liver Fibrosis) e APRI (AST to Platelet Ratio Index), e a histopatologia dos fígados dos animais avaliados. Diante dos resultados, foram obtidas nanopartículas esféricas, lisas, em tamanho nanomérico (120,7 nm) contendo o ITT. Nos animais, o EQPI reduziu (p < 0,05) a glicemia em 17%, TGO em 39% e fosfatase alcalina em 24%. Ademais, reduziu significativamente (p < 0,05) os dois escores de avaliação de fibrose hepática, APRI e FIB-4, e apresentou melhor aspecto da morfologia hepática quando comparado com os demais grupos. Assim, foi possível constatar que a nanoencapsulação promoveu uma nova funcionalidade para o ITT isolado, promovendo benefícios sobre a injúria hepática provocada pela dieta HGLI, considerando os resultados sobre os parâmetros bioquímicos, morfológicos e de avaliação de fibrose relacionados ao fígado.Dissertação Avaliação de extratos ricos em polissacarídeos, obtidos a partir de cebolas amarelas e roxas (Allium cepa, Linn), quanto ao seu potencial antioxidante e modulatório da cristalização de oxalato de cálcio (CaOx)(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2021-01-29) Machado, Raynara Iusk de Araújo; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; http://lattes.cnpq.br/4651814546820796; ; http://lattes.cnpq.br/3979838028433164; Câmara, Rafael Barros Gomes da; ; http://lattes.cnpq.br/9200036511632745; Lima, Jailma Almeida de; ; http://lattes.cnpq.br/9077722100091492A cebola (Allium cepa Linn.), pertencente à família Amaryllis (Amaryllidaceae), está entre as espécies de hortaliças mais importantes no mundo, destacando-se por ser a segunda com maior valor agregado. Em sua composição encontra-se majoritariamente os carboidratos, cujas aplicações farmacológicas vêm há muito tempo sendo estudadas e constatadas. Com isso, objetivou-se neste trabalho obter extratos ricos em polissacarídeos, a partir de cebolas amarelas (YAC - yellow Allium cepa) e roxas (PAC – purple Allium cepa), caracterizá-los quimicamente – por meio da quantificação de açúcar, proteína, sulfato e compostos fenólicos – e estruturalmente – por procedimentos como cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e eletroforese em gel de agarose. Seguindo esta busca, foram realizados ensaios para a avaliação dos extratos quanto ao potencial antioxidante e potencial modulador da formação de cristais de oxalato de cálcio (CaOx). Observou-se que os extratos obtidos são constituídos majoritariamente por heteropolissacarídeos, que possuem em suas estruturas os monossacarídeos: glicose, galactose, arabinose e ácidos glucurônicos (YAC) e glicose, galactose e ácidos glucurônicos (YAC). Além da porção carboidratos, identificou-se também nos extratos a presença de sulfato e baixos níveis de proteínas e compostos fenólicos. Todavia, apesar da considerável quantidade de sulfato encontrado nas amostras, não encontramos indícios da ligação deste sulfato com os polissacarídeos. Para a avaliação do potencial antioxidante dos extratos de YAC e PAC, foram realizados cinco ensaios: capacidade antioxidante total (CAT), poder redutor, quelação cúprica, quelação férrica e sequestro de radical hidroxila. Em três dos cinco testes realizados, foram obtidos melhores resultados para o extrato de YAC. Esses melhores valores foram identificados especificamente nos ensaios: CAT (110,8 mg de AA por grama do extrato), poder redutor (48% de atividade) e quelação de ferro (80,01% de atividade quelante). Com relação a atividade modulatória de CaOx, foram encontrados resultados positivos para o extrato YAC, este foi eficaz no direcionamento da cristalização para a formação de cristais de oxalato de cálcio do tipo dihidratado (COD) de tamanho reduzido, o que poderia, em sistemas biológicos, facilitar o processo de excreção dos cristais pela urina e diminuir a capacidade de ligação dos cristais às células epiteliais dos túbulos renais causando danos. Os resultados encontrados neste trabalho são promissores e abrem caminho para estudos posteriores que possam avaliar tais potenciais in vivo.Dissertação Avaliação do potencial antioxidante de Condroitim sulfato extraído das vísceras de tilápia Oreochromis niloticus(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2020-08-27) Medeiros, Luiz Henrique Costa de; Chavante, Suely Ferreira; Souza, Giulianna Paiva Viana de Andrade; ; http://lattes.cnpq.br/9747224552107070; ; http://lattes.cnpq.br/3440814329803472; ; http://lattes.cnpq.br/9786859259093914; Bezerra, Iglesias de Lacerda; ; http://lattes.cnpq.br/9190547635625352; Filgueira, Luciana Guimaraes Alves; ; http://lattes.cnpq.br/9951316929526841Os glicosaminoglicanos são polissacarídeos presentes na superfície celular e matriz extracelular da grande maioria dos animais, eles desempenham diversas funções biológicas, tais como crescimento celular, diferenciação, antioxidante, neuroprotetores e outros. Entre os glicosaminoglicanos, o condroitim sulfato (CS) se destaca por seu efeito antioxidante e pode ser encontrado em várias espécies de peixes, como a tilápia (Oreochromis niloticus) cujo cultivo representa uma importante atividade econômica na cidade de Natal (RN/Brasil), a qual gera diariamente dezenas de quilos de vísceras como resíduo de sua produção. Desta forma, esse estudo visa utilizar os rejeitos da tilapicultura obtidos em feiras livres do município de Natal, como matéria prima para extração e purificação de condroitim sulfato, além de avaliar seu efeito antioxidante. Para isso os resíduos foram expostos a um processo de proteólise enzimática, seguido de complexação e descomplexação com resina Lewatit. Este método permitiu obter um pool de glicosaminoglicanos que em seguida foi exposto à técnicas de purificação baseados em fracionamentos com acetona e cromatografia de troca iônica acompanhados por eletroforese em gel de agarose e degradação enzimática. Posteriormente foram feitos testes antioxidantes que visaram quantificar a capacidade do CS em inibir espécies reativas intracelulares e in vitro, visto que o desequilíbrio nos níveis destas espécies reativas tem participação em quadros clínicos como as doenças autoimunes, neurodegenerativas e câncer. Para isso foram usados métodos de inibição de espécies reativas intracelulares (DCFH-DA), quelação dos íons ferroso e cúprico, inibição dos radicais superóxidos e hidroxila, além da inibição de óxido nítrico e peroxidação lipídica. Como resultados, foi possível observar que em cada quilo de massa seca de víscera de tilápia é possível extrair aproximadamente 69mg de condroitim sulfato purificado, sendo composto 59% por condroitim-4-sulfato. Através da observação dos valores obtidos nos testes antioxidante foi possível ressaltar uma inibição de até 52% do total de espécies reativas intracelulares em cultura de células RAW 264.7, sem demonstração de citotoxicidade até a concentração de 200mg/mL de condroitim. Os demais testes sugerem que essa inibição ocorre por diversos fatores, que vão desde a inibição dos metais e dos radicais livres (p<0,05), até a provável participação em vias secundárias, como a ativação de proteínas antioxidantes. Os resultados obtidos nesse estudo fortalecem a extração e uso de glicosaminoglicanos, em especial do condroitim sulfato, auxiliando na compreensão dos efeitos biológicos de condroitins oriundos de múltiplas fontes, dando ênfase para seu efeito antioxidante e fornecendo uma alternativa de descarte para o rejeito biológico produzido pela produção comercial de tilápia, abrindo perspectivas para possíveis usos dessa molécula na pesquisa e indústria.Dissertação Caracterização de frações ricas em polissacarídeos sulfatados da alga marrom Dictyopteris delicatula e avaliação do seu potencial antiurolítico, a partir da determinação de suas atividades antioxidante e moduladora da cristalização de oxalato de cálcio(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2020-03-27) Batista, Lucas Alighieri Neves Costa; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; ; Scortecci, Kátia Castanho; ; Silveira, Raniere Fagundes de Melo;Fucanas e fucoidans são polissacarídeos que contêm alfa-L-fucose sulfatada em sua constituição e são encontrados quase que exclusivamente em algas marrons, atribui-se a essas moléculas diversas atividades farmacológicas como: anticoagulante, antitrombótica, antiproliferativa, antinociceptiva osteogênica. A ampla presença de grupamentos sulfato, e as vezes carboxila, nas fucanas e fucoidans confere a essas moléculas uma elevada carga negativa, o que é uma característica comum nos inibidores da formação de cálculos renais de oxalato de cálcio (CaOx), por isso, considera-se que as fucanas e fucoidans têm elevado potencial como agentes antiurolíticos. Outro ponto positivo para as fucanas e fucoidans com relação sua atividade antiurolítica é as suas propriedades antioxidantes, pois como o estresse oxidativo participa do processo de formação de cálculos renais, a ação antioxidante é considerada como preventora da urolitíase. Contudo, poucas fucanas e fucoidans, menos de dez, foram avaliados nesse sentido. Tendo isso em mente, assim como, a questão da carga negativa e a atividade antioxidante como fatores chave para atividade antiurolítica, no presente estudo teve-se como objetivo avaliar o potencial antiurolítico de polissacarídeos extraídos da macroalga Dictyopteris delicatula, uma macroalga amplamente encontrada em todo o litoral nordeste do Brasil, por meio da análise da influência desses polissacarídeos na cristalização do CaOx in vitro e da capacidade deles em prevenir o estresse oxidativo em células proveniente do epitélio renal (MDCK). Polissacarídeos de D. delicatula foram extraídos por proteólise a quente e fracionados por meio de precipitação com volumes crescente de acetona em cinco diferentes frações: F0,5v, F0,7v, F1,0v, F1,5v e F2,0v. Análise da composição dessas frações mostrou que se tratavam de frações ricas em polissacarídeos sulfatados (FRPS) contendo fucose. Na presença das FRPS os cristais CaOx foram menores, mais numerosos e com carga superficial altamente negativa. Destacou-se a atividade modulatória da F0,5v (0,1 mg/mL), cuja presença na cristalização aumentou 1721 vezes o número de cristais formados; reduziu em mais de 90% o tamanho dos cristais; aumentou a carga negativa da superfície de -7 mV para -35 mV e impediu completamente a formação de cristais CaOx monoidratados. Muitos destes efeitos ainda foram visualizados quando F0,5v foi avaliada em concentrações menores (0,02 – 0,01 mg/mL). Quando avaliada em condições de cultivo celular, F0,5v (0,5 mg/mL) inibiu por completo o efeito do peróxido de hidrogênio em diminuir a viabilidade de células MDCK. Portanto, esta foi escolhida para ser melhor caracterizada. Assim, a F0,5v foi submetida a cromatografia de troca iônica e foram obtidas cinco subfrações: 0.2 M, 0.4 M, 0.5 M, 0.6 M e 1.0 M. A caracterização química da F0,5v e das suas subfrações revelaram que essas são constituídas principalmente por fucose, glucose, ácido urônico e sulfato. As atividades antioxidante e moduladora da cristalização de CaOx de nenhuma das subfrações foi superior às atividades da F0,5v, indicando que a F0,5v é mais potente quando não está fracionada. Em suma, F0,5v foi capaz de sequestrar 79% dos radicais hidroxila, 10% dos radicais superóxido, 22% do óxido nítrico e teve atividade antioxidante equivalente a 31 mg de ácido ascórbico. E com relação a modulação dos cristalização, na presença das subfrações foi observado redução no número e aumento no tamanho dos cristais CaOx, exceto quando utilizou-se 0.2 M e 0.6 M. Considerando a atividade antioxidante e modulatória da cristalização do CaOx promovida pela F0,5v, concluise que essa fração tem potencial em prevenir a formação de cálculos renais de CaOx mais promissor que as suas subfrações.Dissertação Avaliação do efeito da inibição química das funções redox e reparo de APE1/Ref-1 sobre a transcrição gênica durante a inflamação(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2020-04-14) Oliveira, Thais Teixeira; Lima, Lucymara Fassarella Agnez; Oliveira, Riva de Paula; Pinto, Nadja Cristhina de SouzaA proteína APE1/Ref-1 possui dois domínios funcionais em mamíferos. O domínio N-terminal é capaz de reduzir fatores de transcrição, tais como NF-kB, AP-1 e HIF-1, aumentando a capacidades destes de ligação ao DNA e a expressão de seus genes alvos. Já o domínio C-terminal é responsável pela atividade de endonuclease de APE1/Ref-1, que atua no reparo de sítios apurínicos/apirimidínicos (AP) durante a via BER. Devido a suas várias funções, APE1/Ref-1 é um potencial alvo terapêutico estudado principalmente em relação ao câncer. Recentemente, foi demonstrado que a presença de 8-oxoG, principal lesão oxidada no DNA, nos promotores de alguns genes pode resultar na indução da expressão gênica na presença de OGG1 e APE1/Ref-1. Sendo assim, APE1/Ref-1 também regula a expressão gênica de maneira dependente da sua função de reparo. Porém, o papel de cada uma das funções de APE1/Ref-1 sobre a regulação transcricional ainda não está completamente elucidado. Em um trabalho anterior do nosso grupo, foi observado através de RNAseq, que a inibição da atividade de endonuclease de APE1/Ref-1 por metoxiamina altera a expressão de diversos genes durante a inflamação assim como diminui a expressão de citocinas e quimiocinas em monócitos pré-tratados com LPS. Dessa forma, o objetivo desta pesquisa foi verificar quais outros genes têm sua expressão afetada pela inibição do reparo de sítios AP, assim como identificar através de ferramentas de bioinformática os possíveis reguladores e parceiros de APE1/Ref-1 nesta resposta. Para isso, o RNA-seq foi reanalisado utilizando ferramentas de bioinformática e bancos de dados atualizados. Adicionalmente, os genes diferencialmente expressos após o tratamento com metoxiamina foram analisados quanto às suas funções e aos possíveis reguladores de sua expressão. A análise do transcriptoma indicou que o tratamento com metoxiamina aumenta a expressão de genes relacionados à inibição da via mTORC1 e a poliubiquitinação de proteínas. Por outro lado, diminui a expressão de genes relacionados a progressão do ciclo celular, transcrição, expressão de genes mitocondriais, produção de prostaglandinas e sinalização via Toll-like independente de MyD88. Além disso, esses genes foram comparados com aqueles diferencialmente expressos após o tratamento com E3330 (inibidor específico da função redox) nas mesmas condições. Os principais reguladores dos genes comuns assim com seus alvos foram analisados quanto a sua expressão por meio de q-PCR e Western blot. Foi observado que tanto a função de reparo de APE1/Ref-1 quanto a função redox são capazes de diminuir a transcrição de genes alvos de NRF1, GABPA e ELK1. Esses genes estão relacionados à biogênese mitocondrial, processamento de rRNA e biogênese ribossomal. Além disso, foi observado que ambas as funções de APE1/Ref-1 diminuem de maneira semelhante a expressão de genes relacionados a biogênese mitocondrial, assim como também são capazes de diminuir a expressão de Myc. Por outro lado, a expressão de proteínas ribossomais foi principalmente afetada por E3330, enquanto a inibição do reparo de DNA foi capaz de diminuir a expressão do pré-rRNA 47S sem afetar o processamento deste RNA. Por fim, podemos concluir que ambas as funções de APE1/Ref-1 podem estar envolvidas na regulação de genes relacionados a biogênese mitocondrial, mas exercem papeis diferentes na regulação de genes relacionados ao processamento e transcrição do rRNA.Dissertação Uma nova lectina lactose-específica isolada do fungo Langermannia bicolor com propriedades antibiofilme(2019-12-20) Moura, Geovanna Maria de Medeiros; Santos, Elizeu Antunes dos; ; ; Nascimento, Ermeton Duarte do; ; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; Santos, Paula Ivani Medeiros dos;Formado por uma complexa matriz de biopolímeros, a estrutura do biofilme bacteriano atua como uma estratégia de resistência frente a condições de estresses ambientais, incluindo por exemplo a imunidade do hospedeiro e ação de antibióticos. Esse problema tem intensificado a busca por moléculas com ação antibiofilme, como aquelas capazes de interferir na estrutura da matriz do biofilme e, assim, permitir a ação de fármacos antimicrobiano. Nesse cenário se destacam as lectinas, proteínas de origem não imune, capazes de se ligarem especificamente a carboidratos do biofilme. O objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar a lectina do basidiomiceto Langermannia bicolor (LLB) bem como avaliar o seu potencial aglutinante e antibiofilme bacteriano. A LLB foi isolada após uma separação por cromatografia de troca catiônica e gel filtração, e se mostrou específica para lactose e dependente de Ca+2 , a alta estabilidade em uma ampla faixa de valores de pH e temperatura. A lectina não interferiu na viabilidade de hemácias humanas e linhagens de fibroblastos murinos (3T3). Apesar de LLB não apresentar atividade antibacteriana, a lectina foi capaz de aglutinar (interação dependente de seu domínio reconhecedor) e reduzir significativamente a biomassa de biofilme total, atuando na prevenção da formação do biofilme e no biofilme pré-formado de Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa. Dessa forma, esses dados sugerem LLB como um futuro candidato de protótipo antibiofilme, no entanto mais estudos devem ser realizados para elucidar o mecanismo de ação, bem como sua possível combinação com antibióticos convencionais como estratégia terapêutica afim de reduzir o desenvolvimento da resistência bacteriana.Dissertação Avaliação do efeito in vitro, in vivo e ex vivo do picolinato de cromo(2019-09-30) Morais, Yara Campanelli de; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; ; Lima, Jailma Almeida de; ; Scortecci, Katia Castanho;O picolinato de cromo (PICCr) é um complexo formado por três resíduos do ácido picolínico (na forma de sal) ligados por coordenação a um átomo de cromo III. A suplementação com PICCr por esportistas e outros vem a cada ano aumentando, inclusive tem sido observado ao ingesta de altas dose diárias por essas pessoas. Não há um definição dos limites de segurança para o uso do PICCr. Portanto, tevese como objetivo avaliar parâmetros de toxicidade do PICCr por meio de diferentes testes in vitro (células em cultivo), in vivo e ex vivo (metalômica) com intuito de trazer a luz mais informações referentes ao uso seguro desse composto. Após aquisição por meios comerciais de cápsulas de PICCr provenientes de dois países diferentes: Inglaterra e Brasil, iniciou-se esse trabalho verificando por espectrometria de absorção atômica a quantidade de material contidas nessas cápsulas. Constatou-se 40 vezes mais PICCr no produto inglês do que o referido na sua bula, e 5 vezes no produto brasileiro. Quatro linhagens celulares: macrófagos murinos (RAW-264.7), células de ovário de hamster chinês (CHO), fibroblasto murino (3T3) e células de adecarcinoma hepático humano (HepG2) foram expostas a variadas concentrações de PICCr (5 a 20 µg/mL) e verificou-se que CHO, 3T3 e HepG2 tiveram a sua capacidade de reduzir o MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il) 2,5-difenil tetrazol) diminuída (de 10 até 80%). Já as células RAW-264.7 não foram afetadas, nesta análise. As células HepG2 quando expostas ao PICCr (20 a 50 µg/mL) apresentaram números de micronúcleos significativamente semelhante as células que não foram expostas ao PICCr. Nas células RAW 264.7, percebeu-se uma diminuição na liberação de oxido nítrico, quando elas foram expostas a lipossacarídeos de parede bacteriana (LPS) e o PICCr. Nos ensaios in vivo, camundongos Swiss machos foram expostos a diferentes doses de PICCr (1000 e 2000 µg/mL) por 15 dias. Após este período, verificou-se que os animais tratados tiveram menor ganho de peso e diminuição nos níveis de triglicerídeos plasmáticos. Não apresentaram modificações macroscópicas, nem histológicas nos tecidos hepático e renal. Verificou-se também que os animais tratados apresentaram diminuição de 50% dos níveis séricos de ferro plasmático em comparação com o grupo não tratado. Todavia, análises de metalômica mostraram que os níveis de ferro nos tecidos hepático e renal não foram afetados. A atividade do PICCr como agente anti-inflamatório, bem como, a sua capacidade de reduzir os níveis séricos de ferro ainda não tinham sido relatadas, e isso pode potencializar o seu uso. Entretanto, estudos com humanos se fazem necessários para confirmarem estas observações, podendo impulsionar estudos futuros para se compreender melhor estes efeitos e agregar valor econômico e farmacológico ao PICCr.Dissertação Polissacarídeos sulfatados da alga marrom Dictyota mertensii: avaliação do efeito antioxidante sinérgico em associação com o ácido ascórbico e purificação de uma fração(2019-09-23) Silva, Cynthia Haynara Ferreira da; Costa, Leandro Silva; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; ; ; Filgueira, Luciana Guimarães Alves; ; Telles, Cinthia Beatrice da Silva;As macroalgas marinhas são organismos que possuem grande diversidade biológica e ampla distribuição geográfica. Por causa dessa disponibilidade, elas são importantes para diversas áreas de conhecimento, como área ambiental, econômica e científica. As macroalgas sintetizam diversos compostos orgânicos com funções bioativas e, dentre esses, estão os polissacarídeos sulfatados (PS). Os PS de algas marrons (fucanas e fucoidans) apresentam diversas atividades, inclusive atividade antioxidante, e esta pode ser potencializada com o uso em conjunto de outros antioxidantes. O potencial antioxidante de PS obtidos da Dictyota mertensii já é relatado na literatura, entretanto, este se apresenta abaixo do encontrado com outros PS de macroalgas. Desse modo, objetivou-se avaliar o efeito sinérgico da atividade antioxidante de PS obtidos da macroalga D. mertensii em combinação com o ácido ascórbico. Espécimes da alga foram coletados do litoral potiguar e submetidos ao processo proteólise e fracionamento diferencial com acetona para obtenção dos PS, o que levou a obtenção de 6 frações (F0.3; F0.5; F0.7; F1.0; F1.5; F2.1). Essas frações polissacarídicas foram submetidas análises químicas e físicas para determinar sua composição e como resultado, observou-se que a D. mertensii sintetiza PS estruturalmente diversos. Observou-se que as frações são ricas em heteropolissacarídeos, em que há predominância dos monossacarídeos fucose, ácido glucurônico e xilose nas frações F0.3, F0.5, F1.0, F1.5 e F2.1. Além desses monossacarídeos, foi observado predominância de glicose e galactose em F1.0 e F1.5. A fração F0.7 é composta principalmente por fucose e ácido glucurônico. Foram observados três padrões de migração eletroforética nas frações: um perfil mais lento foi observado nas frações F0.3, F0.5 e F0.7; um perfil intermediário na F1.0 e um perfil mais rápido nas frações F1.5 e F2.1. Observou-se também valores diferenciados para a quantificação de açúcares totais e sulfato nas frações. Destaca-se as frações F0.7 e F0.5 com percentuais de açúcares de 85% e 66%, respectivamente em relação ao sulfato, destaca-se as frações F1.0 e F0.7, com 40,2% e 32% , respectivamente. As frações foram ainda avaliadas quanto ao potencial antioxidante em combinação com o ácido ascórbico em testes in vitro e em cultura de células. Como resultado, observou-se um aumento do potencial antioxidante proveniente do efeito sinérgico dos PS e do ácido ascórbico em todas as frações, com destaque para a F0.7, na qual foi observado potencialização de mais de 100% na capacidade antioxidante total e 40% na atividade de poder redutor. Com a análise de viabilidade celular em células epiteliais renais de cachorro (MDCK), por meio do ensaio de redução do brometo de 3-(4,5- dimetil-tiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT), foi possível observar diminuição da viabilidade celular apenas com o uso das fração F1.5, e F1.0 e F2.0 na concentração de 1 mg/mL. O potencial efeito sinérgico na atividade antioxidante em cultura de células foi avaliado pelo modelo de estresse oxidativo induzido por peróxido de hidrogênio em células MDCK. Como resultado, foi observado efeito protetor somente com as frações F0.5, F0.7 e F1.0, avaliadas isoladamente. A fração F0.7 foi escolhida para os passos de purificação e após a utilização de dispositivos de ultracentrifugação, cromatografia de troca iônica e cromatografia de gel filtração (HPLC), as análise demonstraram que a F0.7 é composta por três populações principais de PS. Os dados aqui encontrados abrem caminho para continuação dos estudos para a proposição da estrutura de pelo menos um PS, bem como entender melhor o efeito sinérgico desses polissacarídeos com o ácido ascórbico.Dissertação Caracterização da microbiota de uma amostra de petróleo do pré-sal(2019-07-30) Freitas, Júlia Firme; Lima, Lucymara Fassarella Agnez; ; ; Porto, Ana Lúcia Figueiredo; ; Campos, Julliane Tamara Araujo de Melo; ; Dalmolin, Rodrigo Juliani Siqueira;O petróleo é uma das principais fontes de energia do mundo. No Brasil, a descoberta e a extração dos reservatórios de petróleo do pré-sal impulsionaram a produção do óleo. Entretanto, a atividade gera recorrentes contaminações ambientais, causando problemas de âmbito mundial. Os microrganismos demonstram capacidade de degradar o óleo, e por isso o metabolismo microbiano pode fornecer oportunidade para biorremediar ambientes contaminados e auxiliar no gerenciamento dos reservatórios, contribuindo para a manutenção da qualidade ou na recuperação do petróleo. A identificação da microbiota do reservatório contribui para compreensão do metabolismo de degradação do óleo. Vale salientar que ainda não há análises da microbiota do pré-sal, descritas na literatura, por abordagens dependentes ou independentes de cultivo. O objetivo deste trabalho foi obter e caracterizar isolados e consórcios microbianos (indefinidos e definido) capazes de degradar petróleo. A partir de uma amostra de óleo do pré-sal foram obtidos três consórcios indefinidos e 26 isolados bacterianos. Para avaliar as potencialidades dos consórcios e dos isolados foram realizados os seguintes ensaios: i) habilidade de degradação, ii) produção de biossurfactantes, a partir dos ensaios de dispersão do óleo e do índice de emulsificação (E24%) ; iii) hidrofobicidade celular; iv) produção de biofilme; v) atividade enzimática de hidrolases; vi) presença de ramnolipídeo e vii) curva de crescimento. Todos os isolados demonstraram capacidade de degradar petróleo e outros subprodutos pelo ensaio de DCPIP, 12 isolados utilizaram querosene e 2 degradaram xileno e tolueno. O ensaio de dispersão do óleo demonstrou que todos os isolados produzem biossurfactantes, enquanto 22 isolados emulsionaram querosene. A atividade lipase foi demonstrada por todos os isolados, entretanto, apenas 4 bactérias produziram esterase. Os isolados foram identificados como pertencentes aos gêneros Bacillus (n= 9), Ochrobactrum (n = 11), Acinetobacter (n=2), Dermacoccus (n=1) e Staphylococcus (n = 2). Um consórcio definido foi elaborado com onze isolados que apresentaram os melhores resultados nos testes funcionais. A estimativa da degradação indica que todos os consórcios degradaram 100% do petróleo, diesel, gasolina, óleo de soja, azeite de oliva e hexadecano, enquanto a degradação para querosene foi de 46 a 90%, xileno de 44 a 77% e tolueno 43 a 78%; e o índice de emulsificação dos consórcios foi ≥58%. A comparação dos resultados entre o consórcio definido e os indefinidos demonstra similaridades nas características funcionais (curva de crescimento, degradação de hidrocarbonetos e produção de biossurfactantes). Conclui-se assim que, os microrganismos obtidos do petróleo, ou pelo enriquecimento de tal, apresentam capacidade de degradar o petróleo a partir da produção de biofilme e modificação da hidrofobicidade celular, além disso o consórcio definido apresenta o mesmo potencial da microbiota nativa, sendo uma alternativa eficiente para aplicação em estratégias de biorremediação; enquanto os consórcios indefinidos podem fornecer dados para o gerenciamento de reservatórios.Dissertação Estudo da influência do voo com o foguete VSB-30 no transcriptoma de plantas de Saccharum spp. (cana-de-açúcar)(2017-05-26) Nascimento, Vladimir Vieira do; Scortecci, Katia Castanho; ; ; Lima, João Paulo Matos Santos; ; Calsa Júnior, Tercilio;Com a submissão de plantas de cana-de-açúcar em um voo realizado com o foguete VSB-30, puderam-se observar alterações histológicas e bioquímicas nos tecidos de folhas e de raízes. Por isto, neste trabalho, o nosso objetivo foi avaliar o transcriptoma, para com isso identificar nos tecidos de folhas e raízes possíveis respostas relacionadas à condição de voo com o foguete VSB-30. Para isso, inicialmente, foi utilizado o pacote DESeq o qual permitiu detectar 118 Transcritos Expressos Diferencialmente, que possuíam valores de Log2FoldChange ≥2 ou ≤−2. Com a aplicação do método blind, as comparações que foram realizadas entre as amostras dos grupos Teste de voo com o foguete VSB-30 e Controle permitiram verificar que as maiores sensibilidades ocorreram em amostras de tecidos de raízes, visto que foram detectados 77 transcritos específicos. Estes dados ao serem submetidos à ferramenta STRING v.10 retornaram redes de interação de proteínas ortólogas que foram formadas a partir do organismo de referência Sorghum bicolor. Diante disso, as análises de biologia de sistemas que foram realizadas no programa Cytoscape v.3.4 possibilitaram identificar que nas amostras de tecidos de raízes ocorreram alterações no Processamento de Informações, com induções relacionadas aos processos biológicos de tradução de proteínas. Na amostra de Raiz Foguete Vertical também foram observadas respostas específicas que foram relacionadas às condições de microgravidade e hipergravidade. Pois estas podem ser interpretadas pelos sistemas biológicos como uma condição de estresse abiótico. O que poderia resultar em indução nos processos biológicos que envolvem o proteossoma ativo e repressão na maturação de ribossomos. Isto, possivelmente, culminaria em um aumento na degradação de proteínas oxidadas e parada da progressão do ciclo celular. Por outro lado, nas amostras de tecidos de folhas surgiram como possíveis respostas ao experimento realizado uma indução no processo biológico de transcrição. Na amostra de Folha Foguete Vertical, também foi detectada uma possível indução na via metabólica de degradação e descarboxilação de glicina. Com tudo isso, infere-se que todos esses resultados compreendam as principais respostas metabólicas relacionadas ao voo realizado com o foguete VSB-30, que apresenta ambientes transitórios de microgravidade e hipergravidade, que em plantas podem ser interpretados como uma condição de estresse ambiental.Dissertação Caracterização da atividade antiparasitária do dietilditiocarbamato frente a diferentes cepas de Trypanosoma cruzi(2019-08-29) Oliveira, Johny Wysllas de Freitas; Silva, Marcelo de Sousa da; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; ; ; Pontes, Daniel de Lima; ; Ribeiro, Aline Rimoldi;A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, acomete milhares de pessoas anualmente. Os fármacos tradicionalmente utilizados além de serem altamente citotóxicos não são eficazes na fase crônica da doença. Além disso, o parasita apresenta diversidade genética que pode ocasionar diferentes manifestações clínicas e resistência aos tratamentos. O dietilditiocarbamato de sódio pertencente a classe dos ditiocarbamatos, compostos químicos de alta versatilidade farmacológica que podem interagir com metais e induzir a produção das espécies reativas de oxigênio e nitrogênio. O objetivo deste trabalho é caracterizar a ação inibitória do DETC frente diferentes cepas de T. cruzi. Primeiramente, as diferentes cepas Dm28c (TcI), Y (TcII), QMM9 (TcIII) e Cl Brener (TCVI) foram cultivadas em meio LIT. Os ensaios antiparasitários avaliaram diferentes concentrações do DETC em períodos de 24h e 48h, através dos métodos de contagem e da resazurina, contra as formas epimastigota e tripomastigota de T. cruzi. A citotoxicidade celular foi analisada frente as linhagens animais 3T3 (fibroblasto) e RAW (macrófago) das 24 horas após aplicação do composto e avaliada por meio do ensaio de redução do MTT. Adicionalmente, foi analisado os mecanismos de morte parasitária desencadeados pelo composto frente a epimastigota de T. cruzi no período de 24 horas. Foi observado também a atividade mitocondrial das diferentes cepas de T. cruzi na forma epimastigota após 24 horas de tratamento com o composto por meio do ensaio de potencial de membrana. Além disso, as alterações morfológicas causadas pelo composto após 24 horas de tratamento através da microscopia eletrônica de varredura. Ademais, analisou-se a ação inibitória do DETC sob proteínas proteolíticas dos extratos do T. cruzi por zimográfia seguido de densitometria. Considerando que os ditiocarbamatos apresentam importante ação inibitória sob a α-anidrase carbônica de T. cruzi buscou-se evidenciar o ancoramento do DETC nesta proteína através do ensaio in silico de docking molecular. A partir dos ensaios antiparasitários determinou-se a concentração do DETC necessária para reduzir o crescimento populacional em 50% (IC50) de cada uma das cepas em 24 horas, resultando de 28,8 µM até 66,4 µM para forma epimastigota e de 23,5 µM até 79,0 µM para forma tripomastigota a depender da cepa. Por meio da citotoxicidade celular observou-se perfil inibitório do composto que demonstrou citotoxicidade moderada contra as linhagens animais 3T3 e RAW, determinando assim os IC50 de 81,46 µM para 3T3 e 96,34 µM para RAW. A inexistência ou baixíssima atividados dos marcadores anexina e do PI (fosfato inorgânico), tornaram inviável determinar os mecanismos de morte celular desencadeados pelo composto frente ao parasita. Mediante a avaliação do potencial da membrana mitocondrial observou-se danos mitocondriais causados pelo DETC nas diferentes cepas do parasita inibindo o potencial de atividade da membrana interna da mitocôndria, chegando a atingir 80%. Por intermedio das análises da microscopia eletrônica de varredura observou-se que o composto desencadeia ações na estrutura celular parasitária, resultando na descontinuidade na membrana, rompimento e formação de poros. Por meio da zimografia foi constatado uma redução na atividade proteolítica dos extratos dos parasitas alcançando 36%. Observou-se que o DETC apresentou alta capacidade de interação para inibir a α- Anidrase carbônica, analisando o posicionamento do ancoramento na estrutura proteica. Portanto, o DETC apresenta-se como possível candidato para tratamento alternativo a doença de Chagas devido a elevada atividade antiparasitária, citotoxicidade moderada e apresenta ações sobre compartimentos específicos do parasita.Dissertação Análise do perfil epigenético de crianças com fendas labiopalatinas não sindrômicas(2019-08-14) Rêgo, Amanda Jussara Figueirêdo; Amaral, Viviane Souza do; ; ; Navoni, Julio Alejandro; ; Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de;As fendas labiopalatinas não sindrômicas (FL/PNS) são defeitos congênitos advindos de causas ambientais e genéticas. Estudos recentes têm associado os fatores epigenéticos, como a metilação do DNA, à hereditabilidade dessa malformação complexa, assim como a nutrição vem sendo considerada um gatilho ambiental das FL/PNS atuando diretamente no perfil de metilação. Desta forma, o objetivo desse trabalho foi analisar o padrão epigenético do DNA de crianças com FL/PNS. Também foi investigado o padrão dietético dos fissurados e o perfil de exposição durante a gestação de suas mães. Foram coletadas células da mucosa oral de todas as crianças para a extração do DNA e determinação da metilação global e específica. Para isso, aplicou-se a técnica de análise de restrição combinada por bissulfito (COBRA) às 5-metilcitosinas (5-mC) das regiões LINE-1 e Alu, pois compreendem cerca de 30 % do genoma humano, e, adicionalmente, foi feita a reação em cadeia da polimerase para análise da metilação específica do promotor do BRCA1. A escolha desse gene foi baseada no seu papel na estabilidade do genoma. Além disso, as mães colaboraram com a pesquisa respondendo um questionário sobre informações dietéticas sobre seus filhos e fatores de exposição na gestação. Como resultado, em relação aos scores do perfil dietético analisados, foi observado que o grupo controle apresentou um maior consumo de “ultraprocessados”, “trigo refinado”, “gorduras vegetais processadas”, “carboidratos simples” e “embutidos” (p<0,05), porém, quanto às demais categorias de alimentos, não houve diferença estatística entre os grupos. Com relação aos dados da gestação, foi visto uma baixa taxa de programação gestacional e consequente atraso no início do uso dos suplementos nutricionais que favorecem o adequado desenvolvimento do embrião. Além disso, o tempo de uso de anticoncepcionais antes da gestação foi significativamente maior para as mães do grupo de fendas e associado ao aumento do risco em quase duas vezes de seus filhos nascerem com fendas (p=0,036; IC 95%, 0,639 – 4,134). Sobre os dados de metilação global, foi encontrado uma porcentagem média de 5-mC apenas para o LINE-1, respectivamente, de 48% e 45,3%, controle e fenda, com diferença estatística significante (p=0,047). E o promotor do BRCA1 mostrou-se metilado em 30.4% e 56.5%, controle e fenda, respectivamente, sem diferença estatística entre os grupos. Em geral, foi visto que o perfil alimentar dos participantes da pesquisa é de baixa qualidade, e mesmo a alimentação sendo discretamente melhor entre os indivíduos do grupo fenda, houve tendência maior à hipometilação global e hipermetilação no BRCA1 nas crianças com fendas, corroborando com as especulações recentes de que marcas epigenéticas da metilação do DNA podem ser fruto de uma herança epigenética transgeracional e ter efeitos na etiologia dessa malformação. Porém, são necessários mais estudos para a confirmação desses achados e compreensão de outros mecanismos epigenéticos que estejam atuando conjuntamente com as variantes de susceptibilidade genética e em consequência aos fatores ambientais responsáveis pela caracterização desse fenótipo.Dissertação Caracterização química e avaliação das atividades biológicas de extratos da polpa de Melocactus zehntneri (Britton & Rose)(2019-06-26) Martins, Verônica Giuliani de Queiroz Aquino; Scortecci, Katia Castanho; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; ; ; Hoskin, Roberta Targino; ; Santos, Deborah Yara Alves Cursino dos;De modo a comprovar o uso popular de uma espécie e fomentar a descoberta de novos princípios ativos, as cactáceas tornam-se objetos para estudos fitoquímicos e farmacológicos. Diante deste contexto, o presente trabalho obteve seis extratos a partir da parte interna do cladódio liofilizada -polpa- da cactácea Melocactus zehntneri e avaliou os potenciais antioxidante e biológico, por meio de ensaios in vitro e in vivo. A extração se deu de modo seriado, a partir da polpa liofilizada gerando seis extratos: hexano (EH), clorofórmio (EC), etanol (EE), metanol (EM), água final (EAF) e um realizado apenas com água: aquoso (EA). Destes, foi avaliado o teor de açúcar, proteínas e compostos fenólicos. A cromatografia em camada delgada (CCD) apresentou terpenos (ácidos ursólico e oleanólico), saponinas, açúcares (rafinose, frutose, sacarose e galactose), glicoproteínas, bem como os ácidos urônicos e glicurônicos na CCD em celulose descendente. Na cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), foi sugerida a presença das classes de fenilpropanóides como: ácidos cumáricos, ácido benzoico, luteolina, hesperidina e ácido elágico, principalmente. Realizou-se testes antioxidantes, dentre os quais os extratos (25, 50, 100, 250 e 500 µg/mL), apresentaram atividades nos testes de Quelação de Íons Ferro, DPPH, Sequestro de Íons Superóxido e na Atividade Sequestradora de Radical Hidroxila. Com base nestes resultados foi avaliada a ação antibiofilme frente a bactéria Staphylococcus epidermidis 70D MRSE, resultando em uma atuação dos extratos de forma inibitória na formação do biofilme em formação, onde quase todos os extratos, exceto do clorofórmio (EC), promoveram inibição do biofilme, ressaltando que o extrato aquoso (EA) apresentou a melhor porcentagem de inibição do biofilme com aproximadamente 90%. Em outra abordagem foi verificado se os extratos apresentavam uma citotoxicidade frente a linhagem celular 3T3. Como a maior parte dos extratos não exerceu citotoxicidade, então foi avaliado a possível atividade protetora dos extratos, na presença do H2O2, na linhagem celular 3T3. Observou-se que os extratos apresentaram uma atividade curativa, ou seja, capacidade de tratar as células frente ao agente estressor H2O2. Foi ainda avaliada a atividade fotoprotetora in vitro. Os extratos EH e EC apresentaram, respectivamente, os melhores valores de fator de proteção solar (2,4 e 3,2), evidenciando uma potencial atividade fotoprotetora. Portanto, os resultados obtidos mostram o potencial destes extratos para atuarem como antioxidantes, antibiofilme, sem citotoxicidade, com ação curativa frente ao estresse com H2O2 e podendo ser utilizado como aditivo a protetores solares pelo seu potencial fotoprotetor.Dissertação Efeitos da suplementação de creatina no estado redox do tecido renal de ratos diabéticos induzidos por estreptozotocina(2019-03-14) Medeiros, Matheus Anselmo; Lima, João Paulo Matos Santos; Medeiros, Karina Carla de Paula; ; ; ; Pedrosa, Lúcia de Fátima Campos; ; Bortolin, Raul Hernandes;Introdução: A creatina é um suplemento nutricional que vem sendo alvo de pesquisas em várias patologias, com ampla possibilidade de aplicações clínicas. Estudos mostram o efeito da creatina em aumentar a captação de glicose por elevar a expressão de receptores GLUT-4 em desordens metabólicas como o Diabetes Mellitus tipo II, no entanto, não há estudos que relatem o efeito da creatina no metabolismo glicídico do Diabetes Mellitus tipo I. Sendo assim, este trabalho tem como objetivo avaliar o efeito da suplementação de creatina em ratos diabéticos induzidos por estreptozotocina. Métodos: Foram utilizados 32 ratos Wistar separados em 4 grupos: (C) animais sem diabetes e sem suplementação de creatina (n=8), (CCr) animais sem diabetes e com suplementação de creatina (n=8), (D) animais diabéticos induzidos com estreptozotocina sem suplementação (n=8), (DCr) animais diabéticos induzidos com estreptozotocina tratados com creatina (n=8). Os grupos D e DCr receberam dose única de estreptozotocina (40 mg/kg i.p.). Foram realizadas as seguintes avaliações: clínica, bioquímica, bem como a análise de parâmetros de estado redox no tecido renal dos animais. Resultados e discussão: Na glicemia de jejum, os grupos diabéticos apresentaram hiperglicemia significativa em comparação com os grupos controles, porém, o grupo DCr apresentou uma melhora significativa em relação ao grupo D. Esse resultado corrobora com estudos anteriores que verificaram o mesmo efeito positivo em condições patológicas que culminam na hiperglicemia. Na quantificação da ureia e alanina transaminase, os grupos diabéticos apresentaram um aumento significativo em comparação com os grupos controles, porém, o grupo DCr apresentou uma melhora significativa em relação ao grupo D em ambos parâmetros. Nossos resultados de ALT e ureia sérica no grupo D pode ser interpretado como um aumento da gliconeogênese a nível sistêmico, provavél lesão hepática e do catabolismo proteico, uma vez que a ureia é o principal produto do ciclo da ornitina. A atividade enzimática de catalase, superóxido dismutase e glutationa peroxidase foi significativamente baixa no grupo D em comparação aos grupos controles, porém, o grupo DCr teve atividade restabilizada a nível semelhante aos grupos controles em todas as enzimas. Na quantificação do conteúdo de peróxido de hidrogênio, o grupo D apresentou níveis significativamente altos em comparação aos grupos controles, porém, o grupo DCr teve restabilização a nível semelhante aos grupos controles nesse parâmetro. Esses resultados convergem com estudos prévios que observaram que suplementação de creatina modula a atividade antioxidante enzimática e pode ser um agente antioxidante direto de espécies reativas de oxigênio. Conclusão: a creatina pode melhorar o perfil metabólico no DM e restabilizar parâmetros do estado redox nesta condição. Estes resultados sustentam a suplementação de creatina como um potencial agente terapêutico adjuvante.Dissertação Caracterização in silico e análise de uma sequência homóloga à sec14 em angiospermas(2019-06-07) Silva, Camila Rayane Pereira da; Scortecci, Katia Castanho; ; ; Golbert, Daiane Cristina Ferreira; ; Calsa Júnior, Tercilio;O Brasil é o maior produtor mundial de cana-de-açúcar. Todas as partes dessa cultura são aproveitadas e usadas como matriz energética para produção não somente do açúcar, mas também de biocombustíveis e outros produtos. Os estudos moleculares com cana-de-açúcar se desenvolvem de forma lenta devido a sua complexidade genômica, possuindo elevada ploidia, contudo a descoberta de novos genes que possam atuar em processos chave desse organismo é valiosa para futuras contribuições à indústria sucroalcooleira. Este trabalho teve como objetivo caracterizar uma sequência homóloga a PROTEÍNA DE TRANSFERÊNCIA DE FOSFATIDILINOSITOL/FOSFATIDILCOLINA - SEC14 (PHOSPHATIDYLINOSITOLPHOSPHATIDYLCHOLINE TRANSFER PROTEIN - SEC14) em cana-de-açúcar que foi identificada em estudos anteriores em bibliotecas subtrativas para o processo de florescimento. A caracterização in silico foi feita por análise funcional do gene, construção de redes de interação proteína-proteína, filogenia, dinâmica molecular do modelo tridimensional da proteína e análise de co-expressão. Ademais, foi realizado um ensaio de expressão por RTqPCR em tecidos vegetais para variedades tardia e precoce, bem como, em tecidos vegetais submetidos à estresses hídrico, oxidativo e por inserção de sulfato de cálcio, além da análise de expressão em diferentes tecidos da planta (folha e raiz). Os resultados obtidos por meio das ferramentas de bioinformática mostram a existência do domínio CRAL-TRIO, que está presente em todas as sequências homólogas, essencialmente na mesma posição, revelando alta conservação da sequência SEC14 em plantas. A árvore filogenética sugere que há prováveis duplicações da proteína SEC14 em plantas. O modelo tridimensional apresenta um provável bolso hidrofóbico para ligação de lipídios, descritos em outros modelos de SEC14 consolidados, sugerindo uma conservação estrutural e que foi confirmado pela dinâmica molecular. Ainda foi verificado, por meio da simulação, um domínio ainda desconhecido no modelo proposto por homologia de SEC14. Os dados de expressão revelam que o gene SEC14 se apresentou diferencialmente expresso entre as variedades precoce e tardia. Além disso, foi verificado que a expressão foi maior em raízes quando comparado com o tecido foliar. Também foi observado que não houve diferença significativa de expressão nostecidos foliares de plantas submetidas ao estresse hídrico e oxidativo, provavelmente devido ao estágio juvenil. Uma outra análise de expressão realizada foi com um material de campo tratado com cálcio, onde não observamos diferença na expressão, mostrando que a SEC14 não foi responsiva para as condições analisadas. Por fim, este estudo fornece informações para um melhor entendimento de como o gene/proteína de SEC14 atua em cana-de-açúcar. Revelam novos saberes sobre estrutura tridimensional dessa proteína nessa cultura e traz novas perspectivas para os estudos moleculares com plantas de interesse econômico como a cana-de-açúcar.Dissertação Efeito da suplementação com 800 UI de Alfa-Tocoferol no soro e leite de mulheres lactantes(2019-05-15) Rebouças, Amanda de Sousa; Dimenstein, Roberto; Rodrigues, Karla Danielly da Silva Ribeiro; ; ; ; Lima, João Paulo Matos Santos; ; Melo, Illana Louise Pereira de;No decorrer da lactação há uma redução fisiológica de vitamina E no leite e a suplementação materna é uma forma eficiente para aumentar essa concentração e garantir um aporte nutricional adequado ao lactente. Porém, não se sabe o impacto sobre a relação soro-leite materno. Aliado a isso, estudos mostram que a resposta à suplementação ocorre de forma diferenciada, sugerindo a possibilidade de ser influenciada tanto pela dose do suplemento quanto por outros fatores que possam interferir nos mecanismos de transferência da vitamina para a glândula mamária, ainda desconhecidos. Portanto, o objetivo do estudo foi avaliar o efeito da suplementação materna de vitamina E na relação entre alfa-tocoferol no soro e leite materno, e investigar os fatores associados ao aumento da vitamina sérica e no leite. Foi realizado um ensaio clínico randomizado com 79 mulheres lactantes atendidas em um ambulatório público de Natal-RN, Brasil. As participantes foram alocadas no grupo suplementado, que recebeu 800 UI de RRR-alfa-tocoferol (588 mg), e no grupo controle, que não recebeu a suplementação. Leite maduro e soro foram coletados em ambos os grupos entre 30 a 90 dias pós-parto (coleta 1) e no dia seguinte a coleta 1 (coleta 2). O grupo suplementado recebeu a suplementação imediatamente após a coleta 1. O alfatocoferol foi analisado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência e o perfil lipídico foi determinado por kits comerciais e fórmulas. O consumo alimentar foi obtido a partir do recordatório de 24 h. Para avaliar o efeito da suplementação no leite, as participantes do grupo suplementado também foram divididas em quartis, conforme o percentual de aumento do alfa-tocoferol no leite entre a coleta 1 e coleta 2 (quartil 1 e quartis 2-4). Não houve diferença no perfil lipídico, consumo dietético de vitamina E, concentração de alfa-tocoferol no leite e no soro entre os grupos na coleta 1, e entre a coleta 1 e 2 do grupo controle (p > 0,05), mostrando a homogeneidade dos grupos. As mulheres avaliadas não apresentaram deficiência de vitamina E (DVE), porém a maioria apresentou consumo inadequado de vitamina E (< 16 mg). No grupo suplementado houve um aumento da vitamina no soro, onde na coleta 1 a média foi 1136,8 µg/dL e na coleta 2 foi 2080,3 µg/dL (p < 0,001), assim como no leite que passou de 300,8 µg/dL para 646,3 µg/dL após a suplementação (p < 0,001). Após a suplementação, houve correlação positiva entre o alfa-tocoferol no leite e no soro e com a vitamina E dietética. Ao avaliar os fatores associados ao efeito da suplementação, apenas o alfa-tocoferol no leite da coleta 1 e o consumo alimentar de vitamina E apresentaram relação significativa com o aumento da vitamina no leite, enquanto que o soro da coleta 1 foi o único associado ao efeito positivo da suplementação no soro materno. Esses achados demonstram que em casos de ingestão elevada é possível ocorrer uma maior captação do alfa-tocoferol circulante pela glândula mamária, contribuindo para a associação entre a vitamina do soro e leite materno. Ressalta-se a importância de um consumo adequado em vitamina E, a partir de alimentos fontes, para manter os níveis satisfatórios da vitamina no soro e leite, além de propiciar uma melhor eficácia da suplementação com 800 UI de alfa-tocoferol. Este ensaio clínico foi registrado no http://www.ensaiosclinicos.gov.br/rg/RBR-38nfg2/ (RBR-38nfg2).