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Título: Purificação, caracterização e atividade bioinseticida de um inibidor de tripsina de sementes de Crotalaria pallida
Autor(es): Gomes, Carlos Eduardo Maia
Palavras-chave: Proteínas - bioquímica;Inibidores de tripsina - sementes;Atividade biológica - enzimas digestivas;Cultura agrícola - nordeste;Biossíntese
Data do documento: 20-Dez-2004
Editor: Universidade Federal do Rio Grande do Norte
Citação: GOMES, Carlos Eduardo Maia. Purificação, caracterização e atividade bioinseticida de um inibidor de tripsina de sementes de Crotalaria pallida. 2004. 74 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica; Biologia Molecular) - Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2004.
Resumo: A proteinaceous trypsin inhibitor was purified from Crotalaria pallida seeds by ammonium sulphate fractionation, affinity chromatography on immobilized Trypsin-Sepharose and TCA precipitation. The trypsin inhibitor, named ITC, had Mr of 32.5 kDa by SDS-PAGE and was composed by two subunits with 27.7 and 5.6 kDa linked by disulphide bridges, a typical characteristic of Kunitz-Inhibitor family. ITC was stable until 50°C, and at 100°C its residual activity was of about 60%. Also, ITC was stable at pHs 2 to 12. The inhibition of trypsin by ITC was non-competitive, with a Ki of 8,8 x 10-7M. ITC inhibits weakly other serine proteinases such as chymotrypsin and elastase. The inhibition of papain (44% of inhibition), a cysteine proteinase was an indicative of the bi-functionality of ITC. In vitro assays against digestive proteinases from several Lepdoptera, Diptera and Coleoptera pests were made. ITC inhibited in 100% digestive enzymes of Ceratitis capitata (fruit fly), Spodoptera frugiperda and Alabama argillacea, the last one being a cotton pest. It also inhibited in 74.4% Callosobruchus maculatus (bean weevil) digestive enzymes, a Coleoptera pest. ITC, when added in artificial diet models, affected weakly the development of C. capitata larvae and it had a WD50 of 2.65% to C. maculatus larvae
metadata.dc.description.resumo: Um inibidor de proteinase foi isolado de sementes de Crotalaria pallida por fracionamento com sulfato de amônio, cromatografia de afinidade em Sepharose com tripsina acoplada e precipitação com ácido tricloroacético (TCA). O inibidor de tripsina, denominado ITC, possui massa molecular de 32,5 kDa determinada por SDS-PAGE e é composto por duas subunidades, uma de 25,7 e outra de 5,6 kDa, ligadas por pontes dissulfeto; uma característica típica da família de inibidores de Kunitz. ITC foi estável até 50°C e a 100°C sua atividade residual foi cerca de 60%. ITC também foi estável em valores de pHs variando de 2 a 12. A inibição da tripsina por ITC é do tipo não-competitivo, com um Ki de 8,8 x 10-7M. ITC inibe fracamente outras proteinases serínicas como quimotripsina e elastase. A inibição da papaína (44%), uma proteinase cisteínica, foi indicativa da bifuncionalidade de ITC. Ensaios in vitro contra proteinases digestivas de vários insetos praga das ordens Lepidoptera, Diptera e Coleoptera foram realizados. ITC inibiu em cerca de 100% enzimas digestivas de Ceratitis capitata (mosca-das-frutas), Spodoptera frugiperda (lagarta do cartucho do algodão), e Alabama argillacea (curuquerê do algodão). ITC também inibiu em 74,4% enzimas digestivas de Callosobruchus maculatus (broca do feijão) uma praga da ordem Coleoptera. ITC, quando adicionado a dietas artificiais, afetou fracamente o desenvolvimento de larvas de C. capitata e teve um WD50 de 2,65% contra larvas de C. maculatus
URI: http://repositorio.ufrn.br:8080/jspui/handle/123456789/12530
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